应用XOD—X—Luminol发光体系检测SOD活性

黄嘌呤氧化酶(Xanthine: OxygenOxidore ductase,EC1.2.3.2,简写XOD)在有氧存在时,能催化黄嘌呤(Xanthing,简写X)进行氧化反应生成尿酸和O_2~-。O_2~-可与发光试剂Luminol(5-amino-2,3-dihydro-1.4-phthalazine-dione)反应,使之激发,当O_2~-从激发态返回基态时即向外发光。SOD是专一消除O_2~-的天然物质,故可抑制Luminol对O_2~-的激发发光。根据此原理,本     

家蚕磷酸吡哆醇氧化酶的体外定点突变及其活性鉴定

[目的]研究家蚕Bombyx mori磷酸吡哆醇氧化酶(pyridoxine 5’-phosphate oxidase,PNPO)个别保守氨基酸残基对PNPO酶活性的影响.[方法]用重叠延伸法把氨基酸残基Lys111 (AAA)突变为Glu (GAA),Ser160(AGC)定点突变为Ala(GCC);构建重组表达载体...     

亚洲玉米螟血淋巴中酚氧化酶的研究

酚氧化酶(Phenoloxidase,简称PO)大量存在于亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis)幼虫的血浆中,血细胞中甚少.该酶的活力与幼虫的发育期相关,在蜕皮和化蛹前后活力达高峰.PO可以粘附在酵母菌细胞表面,但未发现具有调理作用.以Sephadex G-200层析,对PO进行了部分纯化,比活力可提高56倍.试虫感染酵母菌后,活体内血浆PO活力即刻下降;体外证明,感染血浆可抑制正常血浆PO活力,以胰蛋白酶和昆布多糖测试以及行耐温实验,表明该抑制物为蛋白质性质.对PO的防卫作用进行了简要的讨论.     

多功能生长因子PTN与受体相互作用及跨膜信号传导

PTN家族由两个成员组成,PTN（pleiotrophin）和MK（midkine）,PTN是由136个氨基酸组成的18kD分泌型多功能生长因子．MK与PTN有50％的氨基酸同源性．它们在正常的细胞的生长、分化和迁移过程中起着重要的作用,也在一些病理过程中,如肿瘤和老年性痴呆中扮演着重要角色．最近发现它们与酪氨酪蛋白激酶磷酸酶受体RPTPβ／ξ相互作用,调节底物β-Catenin（连环蛋白）的酪氨酸磷酸化水平,从而加深了对其生物学意义的了解,也为Ptn和Mk异常表达引起的疾病,如肿瘤和老年性痴呆的治疗提供了新的药物作用靶点．     

产油微藻Auxenochlorella protothecoides UTEX 2341对镉胁迫的生理响应及抗性机理

【背景】重金属镉(Cd)污染问题日益严峻。微藻是一种良好的生物吸附剂。目前研究多关注于微藻对Cd的去除率及吸附性能方面,对其抗Cd机理的研究比较少。【目的】以产油微藻Auxenochlorella protothecoides UTEX 2341为材料,研究Cd胁迫对UTEX 2341生理性状、抗性机理及产油的影响。【方法】测定微藻在0-5mmol/LCd胁迫下的生长产油情况,并进一步分析2mmol/LCd胁迫下藻体中色素、可溶性蛋白和油脂含量的变化,以及藻体亚显微结构、抗氧化酶和抗氧化剂、脂肪酸组分的改变情况。【结果】Auxenochlorella protothecoides UTEX 2341能够耐受2 mmol/L Cd胁迫,虽然其生物量和叶绿素含量在Cd胁迫下略有降低,但油脂产量显著增加,胁迫168 h时为1.60 g/L,是对照的1.77倍。此外,高浓度Cd引起了胞内活性氧的积累。抗性机理分析表明高Cd胁迫显著抑制了微藻体内的抗氧化酶活性,但非酶抗氧化剂类胡萝卜素和还原性谷胱甘肽的含量显著增加,分别是对照的1.42倍和4.5倍,从而缓解高浓度Cd对微藻细胞造成的氧化损伤,减轻Cd的毒性。脂肪酸组分分析结果表明,Cd胁迫下油酸(C18:1)含量增加,且脂肪酸成分中C16-C18的含量达96%-98%,符合生物柴油的生产标准。【结论】该研究为揭示微藻抗Cd的机理以及Cd胁迫下微藻柴油合成的调控机理提供了一定的研究基础。     

小菜蛾PGRP-SA的体外表达及介导酚氧化酶活力的研究

肽聚糖识别蛋白(Peptidoglycan Recognition Proteins,PGRPs)是可以识别肽聚糖和含肽聚糖的细菌的一类模式识别受体,在介导酚氧化酶级联反应中起着重要的作用。本研究以实验室克隆的小菜蛾Px PGRP-SA(Gen Bank No.EU399240)为基础,RT-PCR克隆了其开放阅读框(ORF),在原核细胞中获得了高效重组表达,利用GST一步纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备了抗血清,滴定效价为1∶51200。Western blot检测表明Micrococcus luteus和Serratia marcescens可以显著提高Px PGRP-SA在小菜蛾血淋巴中的含量。为了检测Px PGRP-SA与酚氧化酶PO的活力关系,本研究将Px PGRP-SA连接到真核表达载体p MT/Bip/V5/His A构建真核表达质粒p MTAPGRP,转染果蝇S2细胞中,获得稳定的细胞系,硫酸铜诱导获得表达后用anti-V5纯化获得重组蛋白Px PGRP-SA。将重组蛋白Px PGRP-SA与M.luteus和S.marcescens分别温育后,可以显著提高小菜蛾血浆中PO的活力。本研究结果阐明了重组蛋白Px PGRP-SA在小菜蛾体PO级联反应中的功能,为进一步研究Px PGRP-SA在小菜蛾体内免疫信号通路中的功能奠定了基础。     

多功能信封式纳米载体研究进展

基因治疗成功的关键技术之一是研制出安全高效的基因转染载体。多功能信封式纳米载体具有易进入细胞、低毒性、低免疫原性、低致瘤性、易制备、转染效率高等优点,是一种有良好应用前景的基因转染载体。综述了近年来多功能信封式纳米载体的研究进展。     

浓度倍增对城市油松抗氧化酶活性的影响

利用OTC（开顶箱）法模拟未来CO₂浓度,于CO₂倍增浓度（700 μmol·mol^-1）和正常空气CO₂浓度(≈350 μmol·mol^-1）条件下,测定了沈阳市区油松（Pinus tabulaeformis）针叶超氧自由基（O^·₂）产生速率、过氧化氢（H₂O₂）含量、超氧化物歧化酶（SOD）与抗坏血酸-谷胱甘肽循环（ASA-GSH cycle）主要酶活性动态变化,探讨高浓度CO₂对油松抗氧化酶活性的影响。结果表明：在短期(60 d)内CO₂浓度倍增使油松超氧自由基（O₂^·）产生速率与过氧化氢（H₂O₂）含量减少,而SOD、抗坏血酸过氧化物酶（APX）、单脱氢抗坏血酸还原酶（MDAR）、脱氢抗坏血酸还原酶（DHAR）、谷胱甘肽还原酶（GR）活性升高;植株抗氧化能力增强,对活性氧清除能力提高;但长期（70 d以上）CO₂浓度倍增处理则可能使试验结果发生逆转。     

热胁迫对双孢蘑菇抗氧化酶及热激蛋白基因的差异表达的影响

抗氧化酶和热激蛋白是双孢蘑菇Agaricus bisporus抵御逆境胁迫的重要蛋白,高温胁迫下菌丝会通过二者基因的差异表达来减少对自身的损伤.通过对双孢蘑菇菌丝进行40℃热胁迫处理0-120min后发现,随着热胁迫时间延长,菌丝生长速度降低、气生菌丝增多和菌丝分叉明显.转录组分析抗氧化酶和热激蛋白基因差异表达发现,在...     

NADPH氧化酶的光驱激活

NADPH氧化酶在多种细胞表达,激活后产生超氧阴离子或过氧化氢,调控各种细胞生理或病理活动.已知日光中的UVA波段,激活皮肤角质化细胞中的NOX1同工酶,以及肥大细胞中的NOX2同工酶.与复杂多亚基同工酶NOX1, NOX2相比, NOX5是单亚基同工酶, DUOX2是双亚基同工酶. NOX5含有所有NOX同工酶的吸光分子血红素, FAD, NADPH. NOX5同工酶中的NADPH, FAD皆为内源性光敏剂,吸收UVA后可通过Ⅱ型光动力作用产生单线态氧分子.现有文献认为, UVA可能可以激活所有NOX同工酶,导致其不可逆激活.在此光驱激活过程中,内源性光敏剂的Ⅱ型光动力作用,发挥关键作用.