发酵法生产多不饱和脂肪酸的研究进展

文章从高产菌株的筛选,发酵条件等方面介绍了微生物发酵生产多不饱和脂肪酸的主要研究进展。同时简要介绍了多不饱和脂肪酸的提取制备技术,并对其发展前景提出了建议。     

大豆ω-3和ω-6脂肪酸脱氢酶基因密码子优化

DHA和EPA对心脑血管疾病以及癌症等疾病的防治有着重要的作用,其中ω-3和ω-6脂肪酸脱氢酶是合成多不饱和脂肪酸DHA和EPA过程中的两个关键的去不饱和酶,由于缺乏这两种酶的基因,高等动物无法自发合成多不饱和脂肪酸,为了得到可以生产多不饱和脂肪酸的转基因动物,本研究计划将大豆的这两个去饱和脂肪酸作为目的基因,但由于不同物种之间的密码子使用具有偏爱性,会严重影响到目的基因在宿主体内的表达水平,为了解决这一问题,提高目的基因在宿主体内的表达水平,同时采用Jcat在线软件和手动替换密码子两种方法对大豆的ω-3和ω-6脂肪酸脱氢酶基因进行了优化,然后选出最优的优化方法,为后期进一步的实验提供目的基因。最后本文预测了两种优化结果的RNA二级结构和CAI、CBI、Nc值和GC含量,比较得出手动替换的结果优于在线优化的结果。     

被孢霉△9脂肪酸脱饱和酶基因保守区的cDNA克隆及结构分析*

被孢霉被广泛采用用于发酵生产Y一亚麻酸、花生四烯酸和EPA等多不饱和脂肪酸。为了解决发酵产率过低等诸多问题,我们拟采用基因工程技术改造生产菌株。通过对已克隆△9脂肪酸脱饱和酶基因的分析,合成一组简并引物,PCR扩增了被饱霉△9脂肪酸脱饱和酶基因的保守区。结果表明被孢霉△9脂肪酸脱饱和酶基因保守区由537个核苷酸组成,共编码179个氨基酸。其与迄今为止发表的微生物△9脂肪酸脱饱和酶基因有很高的同源性。这是被饱霉△9脂肪酸脱饱和酶基因研究的次次报道。     

微生物多不饱和脂肪酸的研究进展

介绍了多不饱和脂肪酸(PUFAs)的微生物来源在微生物体内的代谢途径、分子生物学研究进展以及微生物的发酵生产状况。重点论述了微生物PUFAs的最新分子生物学研究进展。     

球等鞭金藻中Δ5去饱和酶基因的克隆与功能鉴定

球等鞭金藻(Isochrysis galbana)是一类单细胞海洋微藻,富含二十二碳六烯酸(DHA,22:6Δ4,7,10,13,16,19)。我们利用RACE的方法从球等鞭金藻cDNA文库中同源克隆到一个大小为1329 bp的cDNA片段,编码442个氨基酸的多肽,分子量约49.9 kD。生物信息学分析表明,其编码产物N端具有细胞色素b5结构域,以及与电子传递有关的三个富含组氨酸的结构域,与Pavlova salinaΔ5去饱和酶同源性最高,达56%,故将该基因命名为IgD5。酿酒酵母功能鉴定实验表明,其编码的蛋白质具有Δ5去饱和酶活性,能够将二高-γ-亚麻酸(DGLA,20:3Δ8,11,14)转化成花生四烯酸(AA,20:4Δ5,8,11,14),转化效率平均为34.6%,最高可达40.3%。     

产二十二碳六烯酸等多不饱和脂肪酸真菌的筛选

从土壤中筛选出一株产二十二碳六烯酸（ＤＨＡ）的丝状真菌,菌丝含油２１．２３％,ＤＨＡ占总脂肪酸２．５１％;同时含二十碳五烯酸（ＥＰＡ０,占总脂肪酸的０．４１％;不饱和脂肪占总脂肪酸的８０％。经鉴定为头孢霉属（Ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｕｍ ｓｐ．）真菌。同时发现两株菌含ＥＰＡ,经鉴定为小克银汉霉（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ ｓｐ．）和毛霉（Ｍｕｃｏｒ ｓｐ．）。在这几个属中发现ＤＨＡ和ＥＰＡ尚属首     

海洋真菌多不饱和脂肪酸的快速检测

从海水中分离了一种产EPA和DHA的真菌,并建立了微生物油脂的快速提取、甲酯化及其多不饱和脂肪酸的含量的气相色谱测定方法。结果表明：采用CHCl3-KOH-CH3OH一步提取甲酯化适合于产多不饱和脂肪酸菌株的快速检测。对其油脂的提取,采用湿菌丝魏氏盐酸水解法较为合适;并用KOH－CH3OH法对所得油脂进行了甲酯化。最后,运用毛细管气相色谱采用外标法测定了甲酯化样品中多不饱和脂肪酸的含量,其油脂中EPA和DHA的含量分别为7.32％和7.58％。     

EPA高产菌的繁殖体诱导条件初探

研究了诱导介质、处理时间及温度等因素对高产EPA、AA等多不饱和脂肪酸的菌株－－轮梗霉（Diasporangium sp.）产游动孢子能力的影响。结果表明：胡萝卜片介质上、25℃诱导6d,要得到最大数量的孢子。同一条件下游动孢子量则在第8d达到最高。进一步探讨孢子的萌发条件发现：25℃、营养琼脂上孢子的萌发率最高。     

ω-3多不饱和脂肪酸治疗急性肺损伤的疗效观察

目的探讨ω-3多不饱和脂肪酸对急性肺损伤(ALI)疗效。方法选择ALI患者39例,随机分为2组。对照组(19例)予以常规治疗,治疗组20例在常规治疗基础上加用ω-3多不饱和脂肪酸。对比2组治疗有效率及治疗后2、4和8 d的血气分析变化观察氧分压、氧合指数等的变化。结果治疗组有效率为70%,与对照组31.6%相比差异有统计学意义(P0.05);治疗组PaO2、氧合指数高于对照组,同时心率、乳酸水平,下降较对照组明显,差异有统计学意义(P0.05),特别是乳酸(P0.01)。结论ω-3多不饱和脂肪酸应用有助于改善ALI患者的呼吸功能及预后。     

三角褐指藻Δ6脂肪酸延长酶基因的克隆与序列分析

多不饱和脂肪酸具有重要的生理和保健功能.利用基因工程手段在植物和微生物中生产多不饱和脂肪酸是研究的热点.Δ6脂肪酸延长酶是多不饱和脂肪酸合成中的关键酶,克隆了三角褐指藻的Δ6脂肪酸延长酶基因的cDNA和DNA序列,并对该基因的基因结构、翻译后修饰及起源进化进行了分析.结果显示,三角褐指藻的Δ6脂肪酸延长酶基因有两个内含子,该酶属于ELO系列延长酶,具有磷酸化及N-乙酰葡萄糖胺(O-GlcNAc)修饰等翻译后修饰.BLAST结果表明,在三角褐指藻中很有可能存在两个Δ6脂肪酸延长酶基因.