禽流感病毒样颗粒研究进展

病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)是指由病毒一个或几个结构蛋白自行组装成不含病毒基因组且不能复制、不具有感染能力的病毒样蛋白颗粒。VLPs因能够模拟天然病毒的构象表位而保持了完整病毒颗粒所具有的免疫原性,可诱导机体产生广泛强大的抗病毒免疫反应,阻止病毒侵入机体,在抗病毒性疾病的预防或治疗性疫苗及诊断试剂的研究开发方面具有巨大的应用前景。本文就禽流感病毒样颗粒相关研究进展进行综述,以期为我国禽流感VLPs的研究提供参考。     

鸡马立克氏病病毒B抗原片段在大肠杆菌中表达

鸡马立克氏病病毒ＢａｍＨＩ基因文库Ｉ３质粒中含有编码Ｂ抗原膜外Ｄｏｍａｉｎ的ＤＮＡ序列。经ＳｃａＩ和ＳｐｈＩ双酶酶解Ｉ３质粒,分离获得７６４ｂｐＤＮＡ片段,并克隆进Ｍ１３ｍｐ１９中。ＤＮＡ序列测定分析表明克隆片段为ＭＤＶ－Ｂ抗原基因的４９４－１２５８ｂｐ部分序列。进一步分离ＮｃｏＩ－ＨｉｎｄＩＩＩ部分基因片（５３０ｂｐ）,克隆于ＰＬＰｒｏｍｏｔｅｒ控制下的含有修饰型ｃＩｔｓ８５７基因的表达载体中,     

Epstein─Barr病毒膜抗原在中国仓鼠卵巢（CHO）细胞中的表达

将切去３’端穿膜序列的ＥＢ病毒膜抗原（ＭＡ）基因,插入ｐＳＶ２－ｄｈｆｒ质粒的ＳＶ４０早期启动子下游,构建了真核表达载体ｐＳＶ２－ｄｈｆｒＧＰＴＲ,使两个ＳＶ４０早期启动子分别调控ＭＡ和二氢叶酸还原酶（ｄｈｆｒ）基因。将该重组质粒转化ＣＨＯ－ｄｈｆｒ细胞,在选择培养基中筛选阳性克隆,用氨甲喋呤加压扩增,建立了表达ＥＢＶ－ＭＡ的克隆细胞系。ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析证明,所表达的蛋白的分子量大约为３４０ｋｄ和２２０ｋｄ。经过细Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ２Ｂ琼脂糖凝胶层析初步纯化的抗原与福氏佐剂混合免疫小鼠,２周后小鼠血清中出现明显的ｇｐ３４０／２２０特异性抗体,表明切去嵌膜区结构的ＥＢＶ－ＭＡ基因在ＣＨＯ细胞中的表达产物具有同天然膜抗原相似的分子量大小、糖基化程度、免疫特异性和免疫原性,可望成为ＥＢ病毒人用基因工程亚单位疫苗。     

湖北地区宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16型E7基因的分离、克隆和序列分析

采用加端聚合酶链反应技术,从湖北地区一宫颈癌患者癌组织ＤＮＡ中分离出人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ１６）Ｅ７基因,并在ｐＵＣ１８载体中克隆。经限制性核酸内切酶分析和ＤＮＡ序列分析,确认了含ＨＰＶ１６Ｅ７重组克隆质粒,命名ｐＨＰＶ１６Ｅ７─ＨＢ。ＤＮＡ序列分析表明,ＨＰＶ１６Ｅ７─ＨＢ基因全长２９４ｂｐ（与报道的标准株基因长度相同）,但其核苷酸顺序中有两处发生了Ｃ→Ｔ突变,即第４３位密码子ＣＡＡ变为ＴＡＡ,第７６位ＣＧＴ变为ＴＧＴ;前者使谷氨酰胺密码子变为终止密码,即无义奕变（ｎｏｎｓｅｎｓｅｍｕｔａｔｉｏｎ）。这种突变发生在２９４个碱基的ＤＮＡ扩增产物之中,不像是ＰＣＲ本身的错配,而很可能是湖北株与标准株之间的结构差异。     

水稻条纹病毒RNA4基因间隔区的分子变异

应用反转录－聚合酶链式反应（RT－PCR）和单链构象多态性（single-strand conformation polymorphism,SSCP)技术快速检测我国水稻条纹病毒（RSV）RNA4基因间隔区（intergenic region,IR)的分子变异,结果表明,我国RSV RNA4 IR存在分子变异。供试的7个分离物共有4种泳动带型,其中YL、BS、JD、LY分离物完全一致,而YL、BS、YL及JD4个分离物序列完全一致;JN、PJ、SQ3个分离各不一样,序列之间的同源性均在92％－94％之间.IR序列内部具有两个重要的结构特征：（1）有两处反向重复序列,可形成两个明显的发夹结构,其中一个序列比较保守,形成的发夹结构稳定;但中一个发夹结构由于碱基变异导致其稳定性在各个分离物中差异较大;（2）具有插入序列,相对于日本M分离物,我国7个分离物都有一段长19bp的插入序列,这段插入序列比较保守,各分离物之间仅有1－2个碱基的差异。     

一种广泛可及的委内瑞拉马脑炎病毒复制子颗粒疫苗平台的开发

人兽共患病病毒在动物宿主中成群体传播.而且能够在人群中出现,造成对公共健康产生不利影响的传染性疾病,在疾病暴发与新现的背景下,可便携的、安全且有效的疫苗平台被广泛需求.在此工作中,研究者报道了对甲病毒属复制子疫苗平台的生成与鉴定,这是基于非选择介质———减毒委内瑞拉马脑炎(VEE)病毒疫苗而完成的,所用毒株为3526(VRP3526).     

几种昆虫病毒交叉感染玉米螟的研究

银纹夜蛾NPV(P_aNPV)、柞蚕NPV(ApNPV)和赤松毛虫CPV(D_aCPV)可感染玉米螟。D_aCPV对玉米螟1龄幼虫的ID_(50)为5.9×10~5PIB/ml饲料,对幼虫的生长发育、蛹重、羽化率和成虫寿命有显著影响。D_aCPV主要侵染幼虫中肠柱状细胞,在细胞质中增殖;P_aNPV和A_pNPV主要侵染幼虫的体壁细胞和气管壁细胞。D_aCPV在玉米螟幼虫体内增殖后,多角体形态由正六角形变为锥形或四方形;成虫羽化时排出的蛹便可观察到多角体,病毒可传递给子代。利用其他昆虫病毒有防治玉米螟的可能性。     

一株新城疫病毒新强毒株(NL)的分离鉴定及F基因序列测定

１９９６年５月以来,１我国各地鸡群暴发鸡新城疫,其发病特征是常规疫苗免疫无效。为研究此病毒的特征,对从华东某地分离的新城疫病毒毒株（ＮＬ株）进行了生物学研究。利用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增出ＮＬ株融合蛋白基因（Ｆ基因）全序列,并测序。结果表明,ＮＬ株平均致鸡胚死亡时间最短的,其尿囊液中病毒滴度可达２＾９,表明病毒繁殖速度快。Ｆ基因测序结果表明,ＮＬ株为一强毒株,与现今国外已发表的ＮＤＶ株Ｆ基因同源性在８