外周血树突状细胞的体外培养

本文用塑料贴壁的外周血单个核细胞(PBMNCs)在含自体血浆、rhGM-CSF、rhIL-4和TNFα的RPMI1640培养基,37℃,5%CO2湿化空气培养树突状细胞(DCs).经10天培养,可获得大量具DCs形态学特征的细胞,其有很强的刺激同种淋巴细胞增殖功能,约30%的细胞表达HLA-DR和CD1a.健康志愿者每1×107PBMNCs可收获细胞约5×105.本文培养方法产率高,培养体系简单,用自体血浆代替小牛血清,培养过程简便,这些均适应临床治疗要求.     

外周血免疫细胞亚群及肿瘤标记物对胃大部切除术后患者预后预测的应用价值

目的:探讨外周血免疫细胞亚群及血清肿瘤标记物对胃大部切除术后患者的预后预测的应用价值。方法:应用电化学发光免疫分析法及流式细胞术分别检测25例胃大部切除术后患者的相关血清肿瘤标记物(AFP、CEA、CA19-9、CA12-5、CA72-4)及外周血免疫细胞亚群CD3、NK、CD4、CD8、CD4/CD8,结合长期随访,采用统计学方法分析不同指标之间的相关性及其对胃大部切除术后患者预后预测的应用价值。结果:胃大部切除术后患者外周血免疫细胞亚群及血清肿瘤指标均存在异常,Mann-Whitney检验分析显示外周血CD4 T细胞亚群和CEA呈显著负相关(r=-0.460,P=0.014)。Kaplan-Meier生存分析显示胃大部切除术后患者CD4(P=0.021)和CA72-4(P=0.012)水平和患者预后明显相关。多因素Logistic分析显示CD4(P=0.008)和CA72-4(P=0.010)是影响胃大部切除术后患者预后的独立危险因素。结论:胃大部切除术后患者免疫细胞亚群及血清肿瘤标记物短期内仍存在异常,高水平CD4和低水平CD72-4与患者预后良好显著相关。     

血清CGRP、MMP-9和T、NK细胞及免疫球蛋白对脑卒中并发肺部感染患者的诊断价值

目的 应用ROC曲线评价血清降钙素基因相关肽（CGRP）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和T淋巴细胞亚群、自然杀伤细胞（NK细胞）及免疫球蛋白对脑卒中并发肺部感染患者的诊断价值。方法 选择2015年11月至2019年3月在我院神经内科接受治疗的68例老年脑卒中并发肺部感染患者作为感染组,另选取同期未并发肺部感染的46例老年脑卒中患者作为非感染组。比较两组患者的临床资料,检测并比较两组患者血清降钙素原（PCT）、超敏C-反应蛋白（hs-CRP）、白细胞介素-6（IL-6）、CGRP、MMP-9和T细胞、NK细胞及免疫球蛋白水平,应用受试者工作特征（ROC）曲线分析各指标对脑卒中并发肺部感染的诊断价值。结果 （1）感染组与非感染组患者年龄、性别、病种、基础疾病比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）,感染组患者神经功能缺损评分（NIHSS）、急性生理功能和慢性健康状况评分系统（APACHE）Ⅱ评分均显著高于非感染组（均P＜0.05）。（2）感染组患者血清hs-CRP、PCT、IL-6水平均显著高于非感染组,CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、CD16++CD56++NK细胞水平均显著低于非感染组（均P＜0.05）,两组患者CD8+细胞水平比较差异无统计学意义（P＞0.05）;感染组患者IgG水平显著低于非感染组（P＜0.05）,两组患者IgA、IgM水平比较差异无统计学意义（均P＞0.05）;感染组患者血清CGRP水平显著低于非感染组,MMP-9水平则显著高于非感染组（均P＜0.05）。（3）ROC曲线分析显示血清CGRP、MMP-9、PCT和CD16++CD56++NK细胞对脑卒中并发肺部感染的诊断效能较高,4个指标联合检测的AUC为0.937,其灵敏度和特异度为92.5%和96.3%。结论 脑卒中合并肺部感染患者血清IL-6、PCT、hs-CRP、MMP-9水平升高,CGRP、T细胞、NK细胞及免疫球蛋白水平降低。血清PCT、CGRP、MMP-9和CD16++CD56++NK细胞对脑卒中并发肺部感染的诊断效能较高,4项指标联合检测能显著提高疾病早期诊断的敏感度和特异度。     

外周血造血干细胞不同保存方法的比较

目的为造血干细胞低温保存选择合适的方法.方法20例外周血单个核细胞加入DMSP或DMSO加HES,-80℃冰箱(简称冰箱)或程控降温,冰箱或液氮保存,定期检测标本的CFU-GM,LTC-CD34 ,TBR,计回收率.结果冰箱降温并保存,5%DMSO-6%HES为保护剂的CFU-GM、LTC-IC、CD34 、TBR回收率分别为82.2%±14.7%、83.0%±12.2%、94.2%±4.3%、97.7%±3.9%,比10%DMSO者具体回收率明显高(P＜0.05);同一种保护剂下冰箱降温并保存与程序降温冰箱保存比,差异不显著(P＞0.05),冰箱降温并保存、冰箱降温液氮保存及程控降温液氮保存,在一年内,各种回收率差异不显著(P＞0.05),二年时,只有冰箱降温并保存者其各种回收率指标明显下降(P＜0.05);细胞复温后,标本不稀释也不洗涤,室温下放置,细胞活力的各指标均下降(P＜0.05),以含10%DMSO为保护剂者影响最大.结论造血干细胞优选保存方法是保护剂用5%DMSO-6%HES,保存时间不超过一年时,用冰箱降温并保存,长期保存时,冰箱降温则需液氮保存,细胞复温后,标本内保护剂应立即稀释(临床应用)或去除.     

肺炎衣原体单克隆抗体的研制和应用

目的:以杂交瘤技术制备抗肺炎衣原体(Cpn)单克隆抗体,用于衣原体感染的诊断及相关疾病的研究。方法:以进口Cpn抗原免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠的脾脏细胞与SP2/0细胞融合,用间接ELISA法筛选抗体阳性杂交瘤细胞。收集接种过杂交瘤细胞的小鼠腹水,分别用ELISA法检测抗体效价、用免疫琼脂扩散试验鉴定单抗的类别、用微量荧光免疫试验(MIF)检测单抗的种属特异性。用克隆表达的主要外膜蛋白(MOMP)通过Dot-ELISA法分析单抗的特异性。通过建立直接免疫荧光法(DIF)检测病人和正常人外周血单核细胞(PBMC)标本,并进行统计处理。结果:小鼠脾脏细胞与SP2/0细胞的融合率为61.46%(236/384),最终获得4株稳定分泌Cpn单抗的细胞株。用ELISA法检测小鼠腹水,效价高者可达1∶100000。免疫琼脂扩散试验鉴定为IgG类单抗,扩散效价达1∶128。自制单抗能与重组MOMP发生结合反应,表明其为抗CpnMOMP抗体。自制单抗与进口单抗类似,即与鹦鹉热衣原体(Cps)出现一定程度的交叉反应,而与沙眼衣原体(Ct)则无交叉反应。对240份PBMC标本用自制单抗和进口单抗同时检测Cpn抗原,2种单抗检测均阳性的共86份,经SPSS软件分析两者具有较好的一致性。DIF检测显示,心血管疾病和呼吸道疾病Cpn抗原阳性检出率分别为69.34%(95/137)和72.06%(49/68),与正常人标本Cpn抗原阳性率相比,均具有显著性差异。结论:获得IgG类抗CpnMOMP单抗,自制Cpn单抗的特异性和敏感性均与进口单抗具有较好的一致性。PBMCCpn抗原检测的统计分析证实,对于动脉粥样硬化等某些疾病的发生和发展,Cpn感染可能是重要的原因之一,但其中的因果关系还有待深入研究。     

CpG ODN对呼吸道合胞病毒诱导的哮喘小鼠动物模型的免疫治疗作用

目的　探讨Cp G ODN对呼吸道合胞病毒诱导的哮喘小鼠动物模型的免疫治疗作用。方法　用紫外线灭活的呼吸道合胞病毒致敏30只BAL B/ c小鼠后,分别注射生理盐水、地塞米松和Cp G ODN,流式细胞仪检测小鼠的外周血T淋巴细胞亚群,EL ISA法检测小鼠的外周血IL - 4、IFN-γ和总Ig E的含量,并观察肺组织病理变化。结果　Cp G组CD4 +T细胞所占百分比为( 6 9.35±6 .15 ) % ,CD4 +/ CD8+的比值为2 .92±0 .35 ,与哮喘模型组相比显著降低( P<0 .0 5 )。Cp G组IL- 4的含量为( 88.96±9.89) pg/ ml,与哮喘模型组相比明显降低( P<0 .0 5 ) ;IFN-γ的含量为( 4 6 .83±8.84 ) pg/ ml,与哮喘模型组相比显著上升( P<0 .0 5 ) ;总Ig E的含量为( 3.72±0 .6 7) IU/ml,与哮喘模型组相比明显降低( P<0 .0 5 )。肺组织炎症反应明显减轻。结论　Cp G ODN对用紫外线灭活的呼吸道合胞病毒诱导的哮喘小鼠动物模型具有较好的免疫治疗作用     

肠道菌群及内毒素在多器官功能不全综合征时的变化

目的　探讨肠道菌群及内毒素在多器官功能不全综合征( MODS)时的变化。方法　取SD大鼠,腹腔注射无菌酵母多糖A制备MODS模型,检测大鼠肠道菌群、外周血和门静脉血中的内毒素以及肠道游离内毒素含量,并进行定量分析。结果　模型组大鼠肠道专性厌氧菌的数量明显减少,革兰阴性杆菌和双歧杆菌的比例倒置,内毒素含量明显增加,与对照组比差异有显著性( P<0 .0 5 )。结论　MODS时肠道细菌微生态发生明显改变,肠道内毒素池与肠道革兰阴性杆菌的变化密切相关     

局部晚期鼻咽癌患者外周血VEGF检测及意义

目的:研究血管内皮生长因子(vascular endothelium growth factor,VEGF)在局部晚期鼻咽癌患者外周血中的表达相,探讨VEGF与局部晚期鼻咽癌预后的关系,研究是否能预测局部晚期鼻咽癌患者的预后,或作为局部鼻咽癌治疗的靶分子,为寻找局部晚期鼻咽癌放化疗疗效的分子生物学评价指标提供依据。方法:选择57例局部晚期鼻咽癌患者,收集外周血标本,酶联免疫吸附实验(enzym-linked immunosorbent assay,ELISA)检测外周血中VEGF蛋白水平。结合临床病理特征和随访资料进行分析。结果:(1)局部晚期鼻咽癌患者外周血VEGF表达水平均与复发率、远处转移率有关(P0.05)。(2)局部晚期鼻咽癌患者外周血VEGF的表达水平与性别和年龄无关(P0.05)。(3)局部晚期鼻咽癌患者外周血VEGF的表达水平与生存率有关(P0.05)。结论:局部晚期鼻咽癌患者外周血中VEGF的表达水平对复发率、远处转移率和生存率有影响,提示VEGF在局部晚期鼻咽癌的侵袭转移中可能起协同作用;VEGF检测对筛选较高鼻咽癌转移风险的患者可能有更大的临床价值。