地高辛标记Ucp2基因RNA探针的制备和应用

目的:制备用于检测小鼠胚胎早期Ucp2基因表达的地高辛标记的特异性RNA探针。方法:提取小鼠胚胎脑组织总RNA,设计引物,通过RT-PCR方法获取Ucp2基因片段,将其克隆到pGEM-T载体。分别利用Sp6、T7和Ucp2特异性引物,PCR扩增获得转录模板,通过Sp6及T7 RNA聚合酶,获得地高辛标记的正义、反义Ucp2 RNA原位杂交探针。检测标记探针的效价后,通过全胚胎原位杂交分析制备探针的特异性和杂交效果。结果:成功获得Ucp2基因正义、反义探针,反义探针能高效灵敏检测到Ucp2基因在小鼠胚胎Ed9.5、Ed10.5神经系统呈现高表达,而正义探针未能检测到表达信号。结论:成功制备了特异高效的地高辛标记Ucp2 RNA原位杂交探针,为进一步研究Ucp2基因在小鼠胚胎组织中的表达,尤其在神经组织的定位奠定基础。     

DNA指纹技术的应用及局限性

DNA指纹图谱是一种在一单一实验中可检测出大量DNA位点差异性的分子生物学技术。自1985年Jeffeys et al,从人的肌红蛋白位点获得第一个多位点探针并用于检查人类基回的VNTRs以来,由于各种高水平探针如微卫星探针、寡聚核苷酸探针的相继问世,使DNA指纹技术在动植物科学研究、遗传疾病的诊断、基因图谱的绘制,遗传标记的寻找及法医学等方面得到广泛应用,充分表现了此技术的优越性。当然此技术还需进一步完善。     

大肠杆菌转座因子在遗传分析中的应用

转座因子是一种不能独立完成自我复制,但是却能在细胞内,由一种复制子移动到另一种复制子的遗传因子。在原核生物中常见的转座因子有:插入顺序、转座子和噬菌体μ。     

DNA指纹图及其在法医领域的应用

遗传标记是遗传分析的基础。直至80年代中期,所有法医物证鉴定的遗传标记都局限于用血清或凝胶电泳测定的蛋白质多态。随着分子克隆技术的问世,才有可能在基因组DNA的水平上直接分析其可变性。致的人     

近交系BALB/c小鼠及先天遗传性白内障突变型BALB/cBk-Cat小鼠的DNA指纹研究

采用人工合成的寡核苷酸探针(GATA)~4|分别与近交系小鼠BALB/c和经10年 30代培育而成的自发突变型近交系先天遗传性白内障BALB/cBk-Cat小鼠进行DNA分杂交,DNA指纹显示:(1)BALB/c小鼠个体之间以及BALB/cBk-C at小鼠个体之间没有差异;(2)BALB/c小鼠与BALB/cBk-Cat小鼠的DNA指纹在23-6kb之间的区域有差异。     

核酸的非同位素化学发光分析系统

核酸的非同位素化学发光分析系统王瑛（中国科学院动物研究所;北京１０００８０）近些年由于在核酸杂交检测中引人化学发光物质代替了传统所用的显色反应,大大改善了系统的灵敏度,从而将核酸的非同位素标记与检测技术提高到一个崭新的水平,被愈来愈多的实验室采用。化...     

用于(医学)诊断的DNA探针

用DNA作诊断试验是非常迅速、灵敏和特异的,容易进行并容易分析。DNA杂交试验的非放射性检测方法出现,对现代的重组DNA技术从研究实验室进入更接近临床的实验室起到了相应大的促进作用。在这里要谈到这项新颖技术的基本原则及其应用。 DNA探针是一种能够识别并能特异地与互补DNA片段,即使这些互补的DNA序列是在其它完全无关的DNA序列中。     

B型肝炎表面抗原基因在转化的小鼠细胞中的转录

小鼠L细胞用来研究病毒表面抗原基因(基因S)的转录,这种细胞是由带有B型肝炎病毒(HBV)DNA片段的重组质粒转化过的。在HBV基因组中绘出了一种HBV特有的、聚腺苷化的、2.3-kb的RNA的图。这种RNA与这个基因组的近75％杂交,并排斥HBV核心抗原基因(基因C)区。2.3kb的RNA类型只存在于产生B型肝炎表面抗原的     

三种提取RNA的方法对汉滩病毒检测敏感性影响的研究

分别采用标准法、ＧＰ法和ＭＢＰ法抽提汉滩病毒ＲＮＡ,结合套式ＰＣＲ比较这三种方法的敏感性。结果表明,所用引物对这两株病毒具有相同的特异性。这三种提取ＲＮＡ的敏感性差异不大,敏感性从高到低依次为：ＧＰ、ＭＢＰ和标准法,检测汉滩病毒的效价分别为０．０１、０．０１和０．１ＴＣＩＤ５０／２００μｌ;提取ＲＮＡ的时间长短分别为：标准法为２．５ｈ,ＧＰ为１ｈ,ＭＢＰ为０．５ｈ,可见ＭＢＰ用时最少。使用ＧＰ和ＭＢＰ提取ＲＮＡ时,可以在室温下进行,不需要低温离心。所以,ＭＢＰ最适合于实验室和临床病原体的快速检测,特别是对采集的环境样品的快速检测