兔出血症病毒VP60基因在昆虫细胞中形成病毒样颗粒及其特性

目的将兔出血症病毒（RHDV）VP60全长基因在昆虫细胞-杆状病毒系统中表达,验证重组蛋白形成病毒样颗粒（VLPs）的能力及其生物学特性,探讨VLPs作为检测抗原及亚单位疫苗的潜力。方法用Bac-to-Bac系统体外表达RHDVVP60全长基因。以免疫荧光及Western blotting检测蛋白表达情况及确定蛋白最佳表达条件;免疫电镜观察VLPs形态,并对VLPs的血凝性、免疫原性进行检测。结果SDS-PAGE电泳分析表明,表达的重组蛋白分子量大小约为68KDa,在免疫荧光、琼脂扩散、ELISA试验中均与RHD多克隆抗血清特异性反应;接种重组病毒的Sf9细胞裂解液在电镜下可观察到与RHDV形态相似的VLPs;该VLPs可凝集人“O”、“B”型红细胞,凝集可被RHD多克隆抗血清所抑制;含VLPs的Sf9细胞裂解液可不经纯化用作间接ELISA抗原,所建立的ELISA方法与进口商品化试剂盒相比,特异性良好,敏感性、检出率稍低;将含VLPs的细胞裂解液加氟氏佐剂免疫兔,HI效价可达1∶40,可经受致死量病毒攻击。结论RHDV-VLPs的获得及其良好的免疫原性,为RHD血清学检测试剂的标准化、亚单位疫苗研制应用奠定基础,同时在转移载体及RHDV受体方面研究亦有潜在应用价值。     

藏药短管兔耳草挥发性化学成分的研究

采用毛细管气相色谱—质谱联用技术对藏药短管兔耳草挥发性化学成分进行了研究,经毛细管色谱分离出62个峰,共确定了其中41种化学成分,所鉴定的化合物含量占全挥发油的77．32％;用气相色谱面积归一化法测定了各化学成分的相对含量,其主要化学成分为：二苯胺(16．47％)、邻苯二甲酸丁基—8—甲基壬基酯(6．42％)、二十六碳烷(4．76％)、十六烷酸(3．66％)、二十四碳烷(3．40％)、邻苯二甲酸二丁酯(3．38％)、二十二碳烷(3．30％)、二十碳烷(3．26％)、十六烷酸乙酯(2．77％)、十八碳烷(2．76％)、戊酸(2．48％)、3—乙基环辛烯(2．05％)等。     

兔防御素NP-1基因在转基因番茄中表达的初步研究

兔防御素ＮＰ－１是α－防御素的一种,含３３个氨基酸残基。最初从兔子的多形核嗜中性细胞中分离出来。它对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、分枝杆菌、真菌、被膜病毒以及ＨＩＶ病毒都有不同程度的抑制作用。兔防御素ＮＰ－１所带阳离子较多,可抗不具代谢活性的靶细胞。实验中将兔防御素ＮＰ－１基因构建到植物表达载体中,通过根瘤农杆菌介导转入番茄,得到了转基因番茄植株。对转基因番茄植株进行了ＰＣＲ、Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交、Ｎ     

连续观察兔油酸ARDS模型稳定性及血L-1、IL-8近期变化

目的:探讨油酸(OA)构建兔急性呼吸窘迫综合征(ARDS)模型3天内的稳定性及血浆炎症因子IL-1、IL-8含量变化的意义。方法:健康新西兰大耳白兔30只随机分为5组,每组6只,实验组(n=24)耳缘静脉注射油酸(0.1mL/kg)建立ARDS模型,对照组(n=6)注射等量生理盐水。分别检测对照组6h和实验组6h、24h、48h、72h(n=6)动脉血PH值、PaO2、PaO2/FiO2、PaCO2、肺湿/干重比值(W/D),ELISA法检测血浆细胞因子IL-1、IL-8含量,HE染色观察肺组织病理学改变。结果:和对照组比较,实验组血中细胞因子IL-1在6h、24h组升高;细胞因子IL-8在6h组、24h组、48h组升高。6h组、24h组、48h组氧合指数<200mmHg。结论:兔油酸ARDS模型48h内稳定,炎性细胞和IL-1、IL-8可能是导致ARDS的发生和发展主要原因之一。     

藏药短管兔耳草中松果菊苷和麦角甾苷的RP-HPLC分析

建立了藏药短管兔耳草中松果菊苷和麦角甾苷含量的高效液相色谱分析法.采用Waters XTerra RP18色谱柱(150mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-1%冰醋酸溶液(28:72,V:V)为流动相,流速1.0 mL/min,检测波长330 nm,柱温30℃,在20 min内分离检测了该两种化合物.松果菊苷和麦角甾苷进样量分别在0.077～4.950μg(r=0.999 9)和0.085～5.450μg(r=0.999 9)内呈良好线性,平均加样回收率分别为98.35%和92.50%,RSD分别为2.35%和2.86%.所建立的方法简便、快捷、结果准确可靠,重现性好,可用于藏药短管兔耳草的质量控制,并为兔耳草属植物中苯丙素苷类化合物的分离分析提供一定的参考.     

高原鼢鼠和高原鼠兔骨骼中非必需微量元素的测定

铅、镉、砷、汞、锑和铋等元素是人与动物生命活动非必需且有害的微量元素[1] 。哺乳类动物体内的这些微量元素主要由食物链传递所产生[2 ,3] 。本文对高原鼢鼠 (Ｍｙｏｓｐａｌａｘｂａｉｌｅｙｉ)和高原鼠兔(Ｏｃｈｏｔｏｎａｃｕｒｚｏｎｉａｅ)骨骼中非必需微量元素砷、锑、汞、铋、铅、镉的分布、种间含量差异及其相关性进行了分析和讨论 ,为高寒草甸生态系统研究小哺乳动物的营养生态学、化学生态学以及生态系统的物质循环[4 ,5] 等提供基础资料。1　材料与方法1 1　样品预处理1994年 5～ 6月在中国科学院海北高寒草甸生态系统定位站…     

通过农杆菌介导法将免防御麦NP—1基因导入毛白杨（P.tomentosa）

采用叶盘法将兔将御素ＮＰ－１基因导入毛白杨后,经ＰＣＲ分析、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交检测与筛获得了转基因植株,并经体外抑菌实验表明,转ＮＰ－１基因毛白杨植株组织提取物对某些微生物的生长具有明显的抑制作用。     

合成成骨生长肽的骨内外成骨活性

利用固相多肽合成人成骨生长肽（sOGP),纯度达99．2％,HPLC及毛细管电泳均一,蛋白质序列分析和质谱分析符合理论值。在体内我们观察了sOGP对兔胫骨骨折愈合的药效。用血生化、X射线、骨密度、组织学外骨痂分析、生物力学等方面测得sOGP能显著促进新生骨形成,明显增加成骨活性蛋白碱性磷酸酶（ALP）和骨钙素（BGP）的血清水平,对兔胫骨不稳定的横断骨折愈合具有一定的促进作用。尤其是实验组骨密度和外骨痂中小梁骨成分显著地加的数据,具有统计学意义。还观察了sOGP在没介质中对原代成骨细胞的成骨活性。在体外sOGP低剂量(10^-11mol/L）对原代成骨细胞有明显的增殖作用,表现双向调节。有趣的是sOGP在体外的成骨活性作用必须有血清白蛋白（BSA）和血清中某些因子的参与。     

一株兔出血症病毒2型毒株的分离鉴定

【背景】我国于2020年4月突发兔出血症病毒2型(Rabbit Hemorrhagic Disease Virus 2,RHDV2)疫情,严重威胁兔养殖业和生态平衡,而且目前国内对RHDV2的病原学以及遗传特征等基础研究匮乏。【目的】分离鉴定RHDV2毒株,对分离株进行全基因测序与遗传进化分析。【方法】对成都某兔场疑似RHDV2感染致死的家兔进行病理剖检,通过RT-qPCR检测和动物回归试验,分离鉴定得到RHDV2毒株,进一步进行全基因测序及遗传进化分析。【结果】病死兔剖检表现为各实质器官出血肿大,以心、肺、肝脏尤为明显,经RT-qPCR确诊为RHDV2,而且不存在其他病原混合感染,试验感染家兔可致相似病变。将分离株命名为SCCN03,其基因序列全长为7464bp,与参考毒株(GenBank登录号为MN901451.1)一致性为99.21%。对比参考株氨基酸序列,分离株的非结构蛋白和结构蛋白氨基酸序列发生了多处错义突变,其中非结构蛋白p16和结构蛋白的几处错义突变可能与毒株变异有关。进化树显示毒株SCCN03属于GI.2基因型。【结论】分离鉴定出一株RHDV2毒株,获得其基因序列,丰富了RHDV2的全基因数据资料,为后续RHDV毒力相关研究和相关疫苗研发奠定了基础。