石斑鱼-防御素的酵母表达及其产物抗菌活性分析

防御素是一类阳离子抗菌肽。研究从石斑鱼垂体SMART cDNA 文库中扩增出129 bp 石斑鱼-防御素成熟肽序列, 将其克隆到毕赤酵母表达载体pPCIZA 中, 构建了石斑鱼-防御素的真核表达载体, 电击转化毕赤酵母GS115。Western Blot 分析表明石斑鱼-防御素在酵母菌中获得了表达。体外抗菌实验表明纯化的重组蛋白具有抑制大肠杆菌以及嗜水气单胞菌的作用, 但是对革兰氏阳性菌, 如金黄色葡萄球菌和藤黄微球菌的生长没有抑制作用。实验结果表明酵母表达的石斑鱼-防御素能够特异地抑制革兰氏阴性菌的生长。       

PD-1核心启动子的获得及活性鉴定

目的:构建PD-1(programmed death receptor 1)全长启动子及不同截短体的报告基因,并对其转录活性进行检测。方法:通过PCR及双酶切方法,从人全血基因组DNA中获得PD-1基因编码序列,包含不同长度碱基的PD-1启动子序列,分别克隆到报告基因pGL3-Basic载体上,构建8个不同长度PD-1启动子的报告基因;用脂质体转染法将8个报告基因分别转染至Jurkat细胞系;采用双萤光素酶报告基因系统评估PD-1启动子的活性。结果:经PCR方法扩增出大小分别为1650、1450、1250、1128、874、674、474和274 bp的不同长度的PD-1启动子序列,测序正确(与GenBank报道一致),酶切鉴定正确;瞬时转染Jurkat细胞系后经报告基因检测,8个启动子均具有转录活性。结论:构建了PD-1启动子的报告基因,并证实均有转录活性,且以pGL3-1128活性最高,为PD-1的核心启动子,为进一步研究PD-1的转录调控奠定了实验基础。     

腺花香茶菜中的对映-贝壳杉烯类二萜化合物

从昆明产腺花香茶菜(Isodon adenanthus(Diels)Kudo)的地上部分分离到8个化合物,通过波谱分析鉴定,化合物1～3为新的对映-贝壳杉烯类二萜化合物,命名为腺花香茶菜素N、O和P;4个已知二萜为白叶香茶菜戊素(4)、无毛狭叶香茶菜素C(5)、腺花香茶菜甲素(6)和白叶香茶菜乙素(7),同时得到一个高度不饱和脂肪酸9,16-二羰基-10,12,14-三烯-十八碳酸(8).根据ROESY波谱,对化合物4的结构进行了修正.化合物1对K562细胞显示出明显的细胞毒活性(IC50=0.45 μg/mL).     

神经再生素对PC12细胞分化的影响

目的探索神经再生素(nerve regemration factor．NRF)诱导PCl2细胞神经元性分化的潜在能力。方法以NGF为阳性对照,采用细胞培养方法,观察NRF在低血清的情况下,诱导PCI2细胞发生的形态学改变;同时,使用荧光免疫细胞化学方法,观察神经元标志性物质低分子量神经丝蛋白(NF-L)在NRF诱导分化的PCI2细胞中的表达。采用RT-PCR方法观察NRF对无血清培养的PC12细胞即早基因c—fos的表达变化。结果加药后第14天,NRF、组以及NGF组的PCI2细胞呈现明显的形态学改变：细胞胞体皱缩,且有明显的突起生长。空白对照组、NRI：、组(0．01μg／ml、0.1μg／ml、1μg,／ml)、NGF组(0．05μg／m1)具有明显突起的分化细胞占总细胞的比例分别为5．169％、25．718％、43．325％、73．038％、85．286％。免疫荧光细胞化学结果显示NRF、、NGF组的分化细胞基本都为NF-L标记阳性的细胞;NRF能使c-fos的表达上调,作用2h后达峰值。结论神经再生素具有诱导PCl2细胞的神经元性分化作用,且能使c—fos表达上调。     

抗寒剂和高油菜素内酯对高原水稻抗冷性的影响

抗寒剂ＣＲ－４,高油菜素内酯ＢＲ－１２０分别浸种和喷洒在水稻二叶期叶面上,经低温暗胁迫２ｄ,根干重,根长和茎叶干重,叶片的超氧物歧化酶,过氧化物酶活性和还原性谷胱甘肽含量毕高于对照,抗性强的丽粳低温胁迫时清除活性氧的效果较好。回温恢复１￣５ｄ,抗性不同的两个品种的ＳＯＤ和ＰＯＸ活性、抗坏血酸含量继续增加,丙二醛含量都有下降。但抗性弱的秀子糯回温恢复时,清除活性氧的效果较好,ＰＯＸ活性和ＧＳＨ含量增     

1,25（OH）_2D_3缺失对膜内和软骨内成骨影响的比较研究

目的：比较1,25（OH）2D3缺失对膜内成骨和软骨内成骨影响的不同。方法：用免疫组织化学染色、HE染色和Western-blot等方法检测6周龄的野生型（wild type,WT）和1琢（OH）ase-/-小鼠的颅骨和股骨干骺端骨组织中I型胶原和甲状旁腺素受体（parathyroid hormone receptor,PTHR）的表达水平。结果：和WT小鼠相比较,1 ase-/-小鼠颅骨的I型胶原阳性面积明显减少,但是干骺端I型胶原阳性面积明显增加,差异有显著性（P〈0.01）;1琢（OH）ase-/-小鼠颅骨成骨细胞计数明显减少,差异存在统计学意义（P〈0.05）;但是干骺端成骨细胞计数明显增加,差异有显著性（P〈0.01）;1琢（OH）ase-/-小鼠颅骨的PHTR表达水平明显减少,但是在干骺端PHTR表达水平明显增加,差异均有显著性（P〈0.01）。结论：1,25（OH）2D3缺乏导致小鼠膜内成骨方式骨形成减少,而软骨内成骨骨形成增加。     

植物防御素调控水稻镉积累的新机制

镉是我国农产品的主要重金属污染物之一。随着我国土壤重金属污染问题日益突出, 包括稻米在内的农产品重金属超标时常发生。如何防控重金属在作物可食部位的积累, 在保证农产品安全的同时将农田重金属进行移除修复, 已成为我国农业生产急需解决的问题。最近, 中科院上海生命科学院植物生理生态所龚继明研究组和中国水稻所钱前研究组克隆到1个特异调控镉在水稻(Oryza sativa)叶片中积累的主效QTL基因CAL1。CAL1编码1个植物防御素类似蛋白, 通过与镉进行螯合, 将镉从维管束木质部薄壁细胞中分泌出来, 进入木质部参与长距离转运, 从而定向调控镉在水稻叶片等营养器官的积累而不影响籽粒镉的积累。该研究加深了人们对重金属镉在植物体内的转运和再分配机理的认识, 同时也为培育秸秆镉高积累而籽粒镉含量达标的“修复型”水稻品种提供有价值的新基因。研究成果具有重要的理论意义和应用价值。     

产过敏素harpin的固氮工程菌的某些特性研究

研究了产过敏素harpin的固氮工程菌（Enterobacter cloacaeE4)在番茄,烟草叶片上的致过敏能力及该菌所携的双质粒的稳定性。试验结果表明：E4与DH5（pCPP430)致过敏能力的速度和强度基本相同,E4与308R（pCPP430)相比,烟草上它们致过敏能力的速度基本一致。但308R（pCPP430)致过敏能力的强度更强,在番茄叶片上,E4和308R（pCPP430)致过敏能力的速度和强度基本一样,E4所携的双质粒pCPP430和pMC73A在宿主细菌中是不稳定的,在宿主细菌连续繁殖过程中,质粒pCPP430和pMC73A随宿主细菌的繁殖而发生缺失,当连续传代48代时,双质粒的丢失率达100%,而且各含一种质粒的细胞产生的机率基本相同。     

再生丝素固定的酶免疫传感器及其应用前景的研究

酶免疫传感器是采用再生丝素将待测抗原 (免IgG)固定在石墨电极表面 ,选用抗体 (山羊抗兔IgG-HRP)与其识别结合。利用H2 O2 将抗原抗体结合的电位响应信号放大 ,采用直接电位法检测IgG的浓度。该传感器测定IgG的最低检测浓度可达 1.2× 10 -10 mol/L ,标准曲线的线性范围在 4.1× 10 -7～ 1.2× 10 -10 mol/L ,响应时间为 15s。通过电泳的方法加速抗原抗体的识别结合 ,反应时间由原来的 90min缩短到 30min ,这在国内外鲜有报道。以固定化抗原结合酶标抗体量的多少作为检测抗原标准的新型酶免疫传感器 ,不仅在临床检测、生物医学研究领域中 ,而且在动植物疾病检测、环境监测、HLA个人身份鉴定、PC安全、物理访问 (门禁 )、军事等领域都有着广阔的应用前景。     

蛇毒锯鳞蝰素基因Leu14—Lys15—Glu16的定点突变

本研究的目是的利用蛋白质工程定点突变的方法,在蛇毒锯鳞蝰素基因分子上增加另一个保守序列ＲＧＤ（１４位精氨酸残基,１５位甘氨酸残基,１６位天氨酸残基）,以其增加该分子的生物活性,并探讨蛋白质一级结构,空间结构和功能的关系,在质粒ｐＪＣ６４的基础上,利用ＰＣＲ定点突变方法,对蛇毒锯鳞蝰素基因Ｌｅｕ１４－Ｌｙｓ１５－Ｇｌｕ１６进行定点突变,使相应的ＰＣＲ定点突变方法,对蛇毒锯鳞蝰素基因Ｌｅｕ１４－Ｌｙｓ