鼠PS1-GFP融合蛋白表达载体的构建研究

Presenilin1(PS1)的突变是早发家族性老年痴呆发生的重要因素之一。目前对于PS1结构和功能的研究表明,PS1作为一种多次跨膜并具有γ-secretase活性的蛋白酶,很可能参与众多的细胞信号传导通路,影响细胞分化和调亡、组织及个体的发育等等。但对于PS1的精细结构和功能目前了解甚少,为探讨PS1的精细结构和功能,本研究构建了鼠PS1-GFP融合蛋白表达载体。方法:我们设计了扩增PS1的cDNA全长的引物,以C57BL/6小鼠9天胚的RNA为模板,利用RT-PCR的方法从C57BL/6小鼠9天胚中获得PS1的cDNA,经测序确认后,将其克隆到pMD18-TVector中。设计引物:上游5’-GCCGAATTCTATGACAGAGATACCTGCACC-3’;下游5’-GAAGGATCCGATATAAAACTGATGGAATGC-3’,上游含有EcoRI酶切位点,下游含有BamHI酶切位点。利用高保真DNA聚合酶通过PCR方法将pMD18-T-PS1质粒中的PS1基因亚克隆到pEGFP-C1载体中,获得pEGFP-C1-PS1融合蛋白表达载体,然后利用EcoRI和BamHI从pEGFP-C1-PS1融合蛋白中切下PS1基因,从pMD18-T-PS1质粒中切下载体部分,经过连接,获得中间载体,利用该重组载体中的EcoRI和SalI酶切位点,酶切连接入pEGFP-N2载体中,获得pEGFP-N2-PS1融合蛋白表达载体,经测序鉴定后备用。     

一种新的垂体分泌蛋白Mimecan原核表达、抗体制备及其在垂体瘤组织中的表达(英文)

Mimecan osteoglycin是一种分泌型蛋白质 ,目前其功能尚不明确 .从人垂体cDNA中克隆到OIF基因并构建成重组表达质粒pGEX 5X 2 mimecan ,将此重组表达质粒转化大肠杆菌BL2 1(DE3)后用IPTG诱导 ,成功表达了一种分子量约为 38kD融合蛋白 ,约占菌体总蛋白的 30 %～ 4 0 % .此融合蛋白经纯化分离后免疫新西兰大白兔以制备多克隆抗体 .用Western印迹法检测兔的抗血清 .结果显示 ,该多克隆抗体有较好的针对mimecan蛋白的专一性并且效价较高 ,可用于对mimecan的功能研究 .用此多克隆抗体检测到在某些种类的人垂体瘤组织中mimecan表达极高 ,提示可能存在新的垂体瘤类型 .     

广东省生态学会参加省科协第三届学术活动周纪实

广东省科协于2005年11月15-21日举办了“第三届广东省科协学术活动周”活动,主题是“发展循环经济,建设节约型社会”。此次由39场活动,旨在贯彻国家科技发展战略,落实科学发展观,为广东省科技工作者提供一个多学科、综合性、开放式的学术交流和相互展示才能的活动平台,扩大科协和学会的影响。     

肺炎链球菌结合疫苗的发展和评估

由于肺炎链球菌对青霉素等多种抗生素的高水平耐药性以及对万古霉素耐受性的出现,强调了采用其他方法预防肺炎链球菌感染的重要性,即进行免疫接种。应用与在b型流感嗜血杆菌疫苗中所用相同载体蛋白偶联的肺炎链球菌偶联疫苗,与多糖疫苗作比较能较好地增强婴儿和儿童的免疫应答,并且能在世界范围内增强预防肺炎链球菌疾病的能力。本文综述了有关多价肺炎链球菌偶联疫苗临床试验结果,包括对疫苗的评估、为了疫苗的进一步发展而对有效载体蛋白的鉴定、有关临床试用新型疫苗和质量控制,以及预防肺炎链球菌的其他疫苗。     

010 一种可抑制人类免疫缺陷病毒1型与CD4结合的小分子

除了最近证实的融合抑制物enfuvirtide(T-20)外,所有已确认的人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)药物都以病毒的两个酶作为作用靶：反转录酶和蛋白酶。尽管抗反转录病毒联合疗法已取得令人瞩目的成就,但由于病毒抗药性的出现和由于药物强烈的不良反应和复杂的服药方案造成患者不配合现象,     

人β防御素3 融合蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化与活性分析

近年来由于抗生素的不规范使用等多种原因,细菌耐药问题日益严重,人们正努力从各个方面来解决,其中机体天然产生的肽抗生素(peptide antibiotics)由于其对耐药菌的强大抗菌作用而受到人们的关注。肽抗生素是一种阳离子小分子多肽,在天然免疫和获得性免疫中都发挥着重要作用。防御素(defensin)是肽抗生素中较为重要的一种,主要来源于皮肤、呼吸道等的上皮组织,是正常机体抵抗外界病原微生物入侵的重要防线。人β防御素3(human betadefensin 3,hβD-3)参与人体免疫屏障,并因具有广谱抗菌和抗菌活性不被盐离子浓度抑制等特点而具特别的研究开发价值。提取中国人扁桃体组织总RNA,以RT-PCR技术扩增编码hβD-3成熟肽的cDNA并构建于原核表达载体pQE-80L,IPTG诱导表达后利用SDS-PAGE、免疫印记等方法对重组蛋白进行分析。重组蛋白表达量达到细菌表达总量的40%。重组蛋白自表达菌包涵体中提取后,经亲和层析法纯化目的蛋白达到电泳纯,经多步透析法复性,在体外抗菌实验中表现出了对金黄色葡萄球菌、多重耐药金黄色葡萄球菌等的抗菌活性,为进一步的研究和开发奠定了基础。     

中国城市森林的特点及发展思考

城市森林作为一种与城市密切相关的森林类型 ,受人为干扰的影响很大 ,承受的大气污染、土壤污染、水污染等环境压力大 ,无论是在组成上还是在功能上 ,都表现出不同于一般森林类型的特点。本文在论述了我国发展城市森林意义的基础上 ,分析了城市森林功能、结构、生长、生物多样性、管护要求、效益等方面具有的特殊性 ,并对我国城市森林发展的一些原则性问题进行了探讨 ,以期对正在兴起的我国城市森林的发展提供帮助     

甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因植物表达载体的构建 与遗传转化柑桔的研究

基因工程领域的研究进展使得植物体成为具有重要经济价值的药用蛋白的生产体系。以含甲型肝炎病毒结构基因cDNA的克隆载体pCDNAⅡA16为模板,用甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因特异引物进行PCR扩增,得到全长2.2kb衣壳蛋白融合基因序列。经测序鉴定后正向克隆于植物表达载体pBI121中,衣壳蛋白融合基因位于pBI121质粒T-DNA左右边界区间内,处于CaMV35S启动子控制之下。经限制性内切酶分析和PCR鉴定后利用冻融法将重组质粒pBI121-A导入根癌农杆菌LBA4404。以锦橙 (Citrus. Sinensis Osbeck) 上胚轴为转化材料,通过根癌农杆菌介导法将衣壳蛋白融合基因转 化到植物基因组中。120株转化外植体经卡那霉素50 mg/L筛选,其中13株生长状况良好未出现白化现象的拟转化芽微嫁接到实生砧木继续培养。PCR分析证明,13株拟转化植株中有5株植物基因组中已导入甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因,转化率为4.1%。此研究是对遗传转化柑桔表达外源蛋白的初步探讨,为进一步研究食用疫苗开辟了新途径。Abstract: The use of edible plants for the production and delivery of vaccine proteins could provide an economical alternative to fermentation systems. The construction of the plant expression vector pBI121-A was reported, which contained a fusion gene encoding hepatitis A capsid proteins. The gene was located between the left and right Ti border sequences under the control of CaMV35S promoter. The vector was identified via PCR and restriction enzyme analysis and was introduced into Agrobacterium tumerifacience LBA4404. The transgenic Citrus plants were produced by Agrobacterium-mediated transformation of epicotyl segments. 13 putatively transformed plants through the kanamycin selection were micrografted onto the seedlings. The presence and integration of the transgene had been verified by PCR analysis. The result showed that five transformants were integrated and the transformation efficiency was 4.1%.