HCV丝氨酸蛋白酶小分子底物构建及GST融合表达

丝氨酸蛋白酶是丙型肝炎病毒重要的功能蛋白和药物作用靶点,其通过分子内（cis）和分子间（trans）方式催化水解前体蛋白,释放病毒功能蛋白。目的：为深入研究病毒蛋白酶活性和抑制剂鉴定需要,实验研究参照丙型肝炎病毒1a亚型菌株蛋白酶天然底物的氨基酸序列特点,设计了一段包含两个天然底物酶切位点的小分子多肽2S,并进行了原核表达。方法：利用PCR方法,合成2S小分子多肽基因,目的基因两端引入BamH I和EcoR I两个限制性酶切位点,双酶切后将基因与表达载体pGEX-4T-2重组,转化大肠杆菌DH5α,经化学诱导进行GST融合蛋白表达,通过亲和层析柱纯化目的蛋白。纯化的GST 2S融合蛋白在体外反应系统进行酶切鉴定,SDS-PAGE和ELISA鉴定酶切结果。结果：PCR合成的小分子底物多肽2S基因,经与表达载体重组后测序,证实基因序列正确。采用0.5mmol/L浓度的IPTG诱导工程菌过夜,获得表达的目的蛋白,经分离纯化得到融合蛋白GST-2S。GST-2S在体外磷酸盐缓冲系统中与丝氨酸蛋白酶反应,15%SDS-PAGE鉴定酶切产物,证实融合蛋白底物条带明显消失,ELISA结果同样说明融合蛋白的底物活性。结论：含有两个天然底物酶切位点的小分子多肽可以替代病毒天然底物,实验结果为丙型肝炎病毒丝氨酸蛋白酶活性研究和酶抑制剂研究奠定了方法学基础。     

免疫融合蛋白sFcεRIα/mIg(IgG2)的研制

哮喘、过敏性鼻炎、特应性皮炎及食物过敏等疾病为一类常见疾病,但存在治疗效果不佳,患者病程长等特点。IgE 分子是导致过敏性疾病的关键分子。抑制IgE分子与效应细胞膜表面FcεRI受体的结合可抑制过敏反应的发生。通过克隆FcεRI受体α亚基的cDNA与IgG2的稳定区铰链区、CH2和CH3的cDNA连接,以二聚化融合蛋白sFcεRIα/mIg(IgG2)的形式在CHO细胞中表达,达到提高sFcεRIα生物半衰期的目的。表达载体构建和初步的功能性试验等一系列研究证实,所表达的融合蛋白的分子量为170kDa,并与人IgE和鼠IgE有较好的结合活性。这些研究为该融合蛋白最终实现产业化打下良好基础。     

青藏高原横断山区饲用黄芪根瘤菌的抗逆性及系统发育分析

分离纯化青藏高原横断山区(四川甘孜藏族自治州和阿坝藏族羌族自治州)原生野生饲用黄芪根瘤菌,为优良菌株的筛选提供种质资源.采用纯培养法从该地区部分饲用黄芪植物根瘤中分离纯化根瘤菌;通过16SrDNA序列同源性分析确定菌株的系统发育地位;通过测定菌株的耐盐性、初始pH生长范围及生长温度范围来分析饲用黄芪根瘤菌的抗逆性.从青...     

内蒙古乌海市鸟类区系特征及群落结构

2009年4月至2010年3月对内蒙古乌海市的鸟类区系及群落结构进行了调查研究。共记录到鸟类132种,隶属于17目37科。其中留鸟26种,夏候鸟71种,旅鸟27种,冬候鸟8种。繁殖鸟有97种,其中古北界鸟类有83种,占繁殖鸟类种数的85.6%。研究发现不同季节、不同生境中的鸟类群落特征差异较大。春季的鸟类多样性指数和均匀度指数均最高;湿地的鸟类多样性指数最高。本文基于研究结果提出了对乌海市鸟类及其生存环境的保护建议。     

基于融合双亲短肽提高葡萄糖氧化酶的热稳定性

葡萄糖氧化酶(Glucose oxidase,简称GOD)可氧化葡萄糖生产葡萄糖酸及其衍生物,在新型无抗饲料添加剂的开发中具有良好的应用潜力,但其生产加工过程中尚存在热稳定差的瓶颈问题。本研究采用融合双亲短肽技术提高葡萄糖氧化酶的热稳定性,分别选取8种不同氨基酸长度、不同Linker连接的双亲短肽(Self-assembling peptides,SAPs)融合至黑曲霉来源的葡萄糖氧化酶的N端,构建了8种融合型酶SAP1-GS-GOD、SAP1-PT-GOD、SAP2-PT-GOD、SAP3-PT-GOD、SAP4-PT-GOD、SAP5-PT-GOD、SAP6-PT-GOD、SAP7-PT-GOD,并在毕赤酵母GS115中异源表达。获得的连接PT Linker的融合酶在60℃下孵育60 min后的相对酶活均高于初始酶。其中,融合酶SAP5-PT-GOD在60℃下孵育30 min的相对酶活为67%,是相同处理条件下初始酶相对酶活的10.9倍。同时,融合酶SAP1-PT-GOD、SAP2-PT-GOD、SAP3-PT-GOD、SAP5-PT-GOD的K_(cat)/K_m值较初始酶均有进一步的提高。研究表明,在葡萄糖氧化酶的N端融合以PT为Linker的目标双亲短肽能有效提高葡萄糖氧化酶的热稳定性,通过对融合酶分子内作用力进行分析,酶分子内氢键的增加对融合酶热稳定性的提高效果最为显著。上述研究获得的热稳定性提高的融合葡萄糖氧化酶及其效果机制分析对提高酶在加工和应用过程中的活性具有重要的研究意义和应用价值。     

阿尔山市鸟类区系组成及群落结构*

2011年4月至2012年3月,采用样带法对阿尔山市鸟类区系及群落结构进行了调查。共记录到鸟类103种,隶属于13目32科。其中留鸟32种,夏候鸟60种,旅鸟6种,冬候鸟5种。繁殖鸟构成本地区鸟类区系的主体,夏候鸟为主要组成类群。属于国家Ⅱ级重点保护的野生鸟类有24种。阿尔山市鸟类区系反映出东北区与蒙新区成分相互渗透的特征。鸟类种类组成有明显的季节性差异,春、秋季节为高峰期,夏、冬季为平稳期。多样性指数变化：林地＞草地＞湿地＞山地＞农田＞居民区。随着人类活动程度的加剧,距离城镇较近、人类经常活动的生境,鸟类多样性明显较低。说明城市化影响已开始显现,人类活动对鸟类区系组成有较大影响。     

帮扶式体系托管城乡中医药一体化管理模式的实践

为了着力改变基层中医药资源匮乏现状,促进优质中医药资源下沉,实现中医药人才、管理和技术等要素的整合与流动,切实提升基层中医药服务能力,为百姓提供更方便、更规范、更有效的中医医疗、预防、保健服务。积极探索,根据我国国情,结合成都市新都区的实际,提出了帮扶式体系托管城乡中医药服务一体化管理新模式,并在实践中取得了初步成效。     

封面说明

正梅花(Prunus mume)是蔷薇科(Rosaceae)李属(Prunus)的落叶乔木,原产中国西南部,在中国分布广泛,川、滇、藏交界的横断山区是梅的自然分布中心与变异中心。梅花通常在冬春季节先叶开放,栽培品种多样,与松、竹并称为"岁寒三友",自古以来备受人们喜爱。照片示:梅花品种‘二绿萼’(1)、‘乌羽玉’(2)、‘江南台阁’(3)的花以及‘锦红垂枝’(4)的植株(相关内容详见本期正文304～307页王富廷等的文章)。本期封面图由北京林业大学姜良宝和郝瑞杰老师拍摄。