猪JARID1C基因的cDNA克隆、生物信息学及组织表达谱分析

JARID1C是高度保守的ARID蛋白家族的成员,该家族的蛋白参与并引起一系列生物学效应,如染色质重塑、细胞增殖与分裂、个体发育以及基因转录调控。JARID1C在人脑中表达丰富,对脑的发育和维持正常功能具有重要作用,突变可引起智力迟钝。本研究采用电子克隆（insilicocloning）的方法并结合5′末端快速扩增技术（RACE）,从猪卵巢中克隆到JARID1C的全长cDNA序列（GenBank登录号：EF139241）。猪JARID1C基因的cDNA全长5,908bp,包括4,551bp的开放阅读框（ORF）、522bp的5′非翻译区（5′UTR）和835bp的3′非翻译区（3′UTR）,polyA加尾信号序列AATAAA位于5,881bp和5,886bp之间。生物信息学分析揭示JARID1C蛋白含有1517个氨基酸残基,定位于细胞核中,该蛋白含有5个保守的结构域：JmjN结构域、ARID结构域、JmjC结构域、C5HC2锌指结构域和PHD锌指结构域。应用ClusterW程序分别对猪、狗、小鼠、大鼠、人和猿的JARID1C核苷酸序列和氨基酸序列进行多重序列比对,发现猪的JARID1C与其他哺乳动物具有很高的相似性。借助Mega3.1软件,采用N-J算法构建JARID1亚家族蛋白的系统进化树,揭示不同物种的进化关系。应用实时荧光定量PCR技术分析该基因在不同组织的表达差异,结果表明该基因在各组织均不同程度地表达,其中在肺和骨骼肌表达水平最低,而在脑和性腺表达水平最高。     

大白×梅山杂交组合肉质性状的数量性状位点定位分析

为寻找影响猪肉质数量性状基因位点的染色体区域 ,以 3头英系大白公猪和 7头梅山母猪建立F2 资源家系。随机选留 14 7头F2 代个体 (1998年 81头 ,2 0 0 0年 66头 ) ,经检测均获得肉质性状表型数据。对资源家系内的所有个体位于染色体 1、2、3、4、6和 7上的 48个微卫星位点进行扩增。利用线性模型最小二乘法分别对各年度及两年综合后的肉质性状进行数量性状位点 (QTL)区间定位 ,利用置换法确定显著性阈值。研究结果表明 :在 2 0 0 0年群体中 ,猪 4号染色体 (SSC4)上定位了肌内脂肪QTL ,达到染色体极显著水平 (P <0 0 1)和基因组显著水平 (P <0 0 5) ,解释表型变异为 5 2 4% ,梅山猪具有增加肌内脂肪QTL ;两年度群体综合后 ,在上述 4号染色体同一区间 ,肌内脂肪QTL接近染色体显著水平 ;股二头肌pH值和半棘肌pH值QTL分别定位在SSC1和 3上 ;在 1998年和 2 0 0 0年群体中分别发现 1个和 3个达染色体显著水平 (P <0 0 5)的系水力QTL ;在 1998年群体中 ,肌肉含水量QTL位于SSC6;两年综合群体中 ,SSC2、6和 7上定位了肌肉含水量QTL ,达到染色体显著水平 ,含水量QTL均有印迹效应 ,梅山和大白猪各有增效基因     

甲虫体内定居猪巨吻棘头虫微生态学初步研究

本文报告了１９８４年大连地区甲虫体内定居猪巨吻棘头虫的幼虫（棘头体）情况。大牙锯天牛的成虫定植率为１０．２％,低于１９７４年的３８．８％。本次调查发现铜绿丽金龟、蒙古丽金龟和灰粉锶金龟,共４种金龟体内都有棘头体定居,其定植率依次是２３．８％,２３．８％,１６．１％和３３．３％。前３种金龟体内定居着棘头体为大连地区首次报告。调查证明上述天牛和金龟６种甲虫也是本地区流行的猪巨吻棘头虫病的重要媒介,如采     

猪胚胎热应激后耐低温性的变化

手术或屠宰采取措囊胚（Ｂ）、扩张囊胚（ＥＢ）。孵出囊胚（ＨＢ）,置于含１０％ＦＣＳ的ＧＩＴ液中进行４２℃水浴１０分钟的热应激和－７℃酒精糟１０分钟的低温感受试验。结果,热应激对猪胚的存活率及发育率均无影响（Ｐ＞０．０５）;而热应激提高了猪胚对低温的耐受程度,热应激的胚胎再经低温感受试验后,培养２４小时的ＥＢ（φ＜５０）、ＥＢ（φ≥５０）和ＨＢ的活细胞数分别较相应的对照组提高３５．５％、４１．３％和５１．１％,差异显著（Ｐ＜０．０５）,但在热应激处理液中添加了蛋白合成抑制剂者没有产生这一效果,此结果证明,热应激很可能诱发猪胚内产生抗低温的应激蛋白质,这为进一步研究猪胚胎冷冻和改进猪胚冷冻前处理提供了依据和可能途径。     

结合学科建设的应用型本科院校的微生物学实验教学改革

微生物学实验作为生物学科的重要基础课程,在创新人才培养和素质教育中起着重要作用。提高学生的创新实践能力,培养服务区域经济的创新型应用人才是地方应用型本科高校的办学目标。结合长治学院的学科建设,探讨了普通地方本科院校应用型人才培养中,微生物学实验教学模式的新思路,建立了由基础性实验和综合设计性实验相结合的实验内容,开放学科实验室为学生搭建科研创新实践平台,借助微信平台实现"线上"与"线下"的互动交流学习,构建了科学考核评价体系。改革后的新型教学模式能够切实提高教学质量,对学生的能力培养和综合素质提升起到积极促进作用。     

不同品种猪HSL基因5''''-UTR和外显子Ⅰ片段的克隆测序及多态性分析

激素敏感脂肪酶(Hormone-sensitive lipase,HSL)是负责分解脂肪组织中甘油三酯释放游离脂肪酸的关键和限速酶,也是影响动物脂肪沉积的关键酶.将HSL基因作为影响猪脂肪代谢和沉积相关性状的候选基因,对不同品种猪HSL基因5’-UTR和外显子Ⅰ片段进行了克隆测序并开展多态性与性状间的关系研究.序列比较发现,在测定的HSL基因靠近起始密码子(ATG)的419 bp中,杜洛克、梅山猪、大白猪和平序列完全一致,与长白猪序列比较,在-13～-12 bp位置存在GC→CG的碱基变异;梅山猪(3个体)、通城猪(3个体)、长白猪(3个体)、大白猪(3个体)HSL基因外显子Ⅰ的442 bp位置有G→A碱基间的变异,G→A的转换改变了限制性内切酶BsaHⅠ酶识别位点,且导致了编码氨基酸Val→Ile的替换.经PCR-RFLP分析,HSL基因外显子Ⅰ BsaHⅠ位点多态性有AA、AG和GG 3种基因型.”大白×梅山”F2代资源家系BsaHⅠ点不同基因型个体背膘厚、肌内脂肪等性状协方差统计分析发现,AG基因型和GG基因型在眼肌面积上存在显著差异.     

表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白重组伪狂犬病毒的构建及其生物学特性分析

将猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV）CH-1a株GP5基因插入到伪狂犬病病毒（Pseudorabies Virus,PRV）Bartha-K61株TK基因中,获得了一株TK^-／gE^-表型的重组伪狂犬病病毒,命名为rPRV—GP5。经生长动力学、表达动力学和间接免疫荧光证实PRRSV GP5在重组病毒中获得了表达,表达蛋白的抗原性与亲本病毒相似,rPRV-GP5在不同的细胞上毒价和细胞病变与Bartha—K61比较无显著差异。4只PRV抗体阴性的绵羊,每只接种10^6.0。PFU的rPRV-GP5可以完全抵抗10^3LD50伪狂犬病强毒S株的攻击。10头PRV、PRRSV抗体阴性的仔猪滴鼻接种rPRV-GP5 10^7.0 PFU／头并在接种后63d攻击PRRSV CH-1a株10^5.0 TCID50／头,攻毒后3d和5d出现了PRRSV荧光抗体和ELISA抗体,在政毒后14d检测到了PRRSV中和抗体,Bartha—K61活疫苗组和对照组至实验结束时仍未检测到PRRSV中和抗体。这说明rPRV-GP5免疫产生了针对PRRSV的回忆性免疫应答。     

Alternative splicing and expression profile analysis of expressed sequence tags in domestic pig

Domestic pig （Sus scrofa domestica） is one of the most important mammals to humans. Alternative splicing is a cellular mechanism in eukaryotes that greatly increases the diversity of gene products. Expression sequence tags （ESTs） have been widely used for gene discovery, expression profile analysis, and alternative splicing detection. In this study, a total of 712,905 ESTs extracted from 101 different nonnormalized EST libraries of the domestic pig were analyzed. These EST libraries cover the nervous system, digestive system, immune system, and meat production related tissues from embryo, newborn, and adult pigs, making contributions to the analysis of alternative splicing variants as well as expression profiles in various stages of tissues. A modified approach was designed to cluster and assemble large EST datasets, aiming to detect alternative splicing together with EST abundance of each splicing variant. Much efforts were made to classify alternative splicing into different types and apply different filters to each type to get more reliable results. Finally, a total of 1,223 genes with average 2.8 splicing variants were detected among 16,540 unique genes. The overview of expression profiles would change when we take alternative splicing into account.     

PERV病毒在异种移植中的感染风险及预防对策

猪与人体在器官结构、生理解剖上相似性高,被认为是最佳的异种移植供体,能够有效解决人类供体器官短缺的问题。猪内源性逆转录病毒(porcine endogenous retrovirus, PERV)是一种C型逆转录病毒,以一种前病毒DNA的形式整合在猪的细胞基因组中,随细胞染色体的复制而复制,无法通过无特定病原体(specific pathogen-free, SPF)培育消除,其在异种移植中具有潜在的感染风险。了解PERV的特性,探索PERV预防策略,将有助于猪作为异种移植供体在临床的应用。     

我国巴马小型猪SLA-2基因克隆及分子特征

为研究我国巴马小型猪SLA-Ⅰ分子特征,设计引物克隆了SLA-Ⅰ类分子SLA-2基因（SLA-2*bm）,并通过分子生物学软件分析其分子特征。经克隆及序列测定分析,SLA-2*bm为1119bp,其中3～1097为ORF区,共编码364个氨基酸,分别在第125、188、227和283位置出现半胱氨酸残基,含有两对链内二硫键。氨基酸同源性分析显示SLA-2*bm与其它SLA-2、 SLA-3和SLA-1序列的同源率分别为88.4%～96.4%、88.3%～90.5%和87.7%～92.7%。系统进化树显示SLA-2*bm与其它SLA-2等位基因在遗传关系上相对独立,进化程度较低;各功能区分析,SLA-2*bm与人HLA-A2和小鼠H-2K分子结构相似,且保留了人HLA-A2基因的部分功能位点。结果表明,SLA-2*bm属于一个新的等位基因,巴马小型猪是保留原始基因特征的品种。