金华猪遗传结构及其与太湖猪遗传分化的研究

本研究利用65个微卫星标记结合荧光标记检测技术, 对金华猪I系、II系、III系共271个个体以及嘉兴黑猪、中梅山猪、小梅山猪和二花脸猪等4个太湖猪品种和嵊县花猪各30头的基因型进行了检测, 统计分析了金华猪各品系的遗传结构及各猪种群间的遗传分化。结果显示: 金华猪品系间具有丰富的遗传变异, 平均有效等位基因数以金华猪I系最高, 为3.5; 其次是II系和III系, 分别是2.8和2.5, 金华猪3个品系的平均多态信息含量均高于0.5; I、II、III系的平均观察杂合度分别是0.381、0.399和0.442。金华猪3个品系偏离Hardy-Weinberg平衡的程度不一:I系偏离较大, III系次之, II系相对较小。分析认为金华猪各品系存在一定程度的近交, 品系间存在不同的等位基因。遗传分化结果显示: 金华猪II系和III系间遗传分化相对较小(F_ST＝0.1883), 但它们与I系间的遗传分化较大, F_ST值分别是0.3663和0.3619。同时, 金华猪各品系与太湖猪的遗传关系较近, 其中与中梅山猪群体遗传分化相对较小, F_ST值分别为0.3581、0.3560和0.3572。而金华猪各品系与嵊县花猪的遗传分化最大, F_ST值分别为0.4499, 0.4654和0.4801, 由此可见, 金华猪不同于其他浙江省地方品种, 有着独立的起源和驯化进程。     

MicroRNA-21可促进金华猪胚胎肝脏生长

microRNAs是一种小分子非编码RNA,广泛参与细胞的生长发育、分化和凋亡等生物学过程. microRNA-21(miR-21)是一个在实体肿瘤中高表达的miRNA,可促进癌细胞增殖. 为了研究miR-21在金华猪生长过程中的作用,本试验选取了金华猪80日龄胚胎的心、肝、脾、肺、肾、小肠、胰脏、皮脂组织,进行miR-21组织表达谱研究,结果发现miR-21在肝脏中的表达最高. 进一步以肝脏为对象,研究miR-21在金华猪不同生长阶段中的表达,结果显示胚胎80日龄的miR-21表达量最高（P<0.01）,其次是胚胎期的60日龄和105日龄,出生后1至120日龄miR-21的表达量均维持在较低的水平且相互之间差异不显著(P>0.05). 利用KEGG软件对miR-21预测的靶基因进行通路归类分析表明miR-21参与细胞代谢、生长等过程,从中选择两个抑制细胞增殖的靶基因,增强子结合蛋白（CCAAT/enhancer binding protein,Cebpa) 和原肌球蛋白1基因（tropomyosin 1,Tpm1),qRT-PCR检测二者在不同生长阶段的mRNA表达量,结果其表达趋势与miR-21相反,其中胚胎期80天表达量最低(P<0.05). 综上表明miR-21可能具有促进胚胎肝脏生长的作用.     

猪肺炎支原体及其他支原体黏附因子的研究进展

猪肺炎支原体能够引起猪支原体肺炎,其黏附因子在致病过程中起重要作用。本文综合国内外猪肺炎支原体黏附因子的研究进展,并与其他支原体的黏附因子进行了比较讨论,从而为猪肺炎支原体致病机理的进一步研究及该病的防制提供新思路。     

猪H-FABP基因PCR-SSCP分析

应用PCR-SSCP方法分析了H-FABP基因在山西白猪、马身猪、大白猪、长白猪和杜洛克猪5个猪种的多态性。结果表明:在H-FABP基因内含子1中发现了多态位点,该位点上具有两个等位基因A和B,马身猪BB基因型频率最高,B等位基因频率明显高于A等位基因频率;其余4个猪种AA基因型频率最高。序列测定的结果表明,SSCP的变异是由碱基C→T的替换造成的。     

猪圆环病毒Ⅱ型Cap蛋白重组腺病毒的构建与鉴定

猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)是近年来新发现的引起仔猪多系统衰弱综合症的必需病原,含有两个主要的阅读框ORF1和ORF2,分别编码复制相关蛋白(Rep)和核衣壳蛋白(Cap),其中Cap含有病毒主要抗原表位,是研究PCV2基因工程苗的主要候选目的基因。本研究利用PCR技术将Cap蛋白基因克隆入人5型腺病毒穿梭载体(pShuttle-CMV),与腺病毒骨架载体(pAdEasyTM)共转化大肠杆菌BJ5183进行同源重组并转染HEK-293A细胞,经多次亚克隆获得了重组腺病毒rAd-Cap,测定其TCID50为1013.7/mL。用RT-PCR、间接ELISA、Westernblot和IPMA等方法证明了Cap蛋白在腺病毒中获得表达。该研究为发展PCV2的重组腺病毒基因工程疫苗奠定了基础。     

中国小麦地方品种内和品种间醇溶蛋白遗传多样性分析

为了揭示中国小麦地方品种内遗传异质性和品种间的遗传多样性,采用A-PAGE方法,对72份来自不同生态区的地方品种进行醇溶蛋白构成分析。结果发现,全部供试地方品种共观察到101条迁移率不同的务带,构成229种醇溶蛋白构型,每个品种醇溶蛋白条带数目为14—24。63份（87．5％）地方品种在品种内具有2种以上醇溶蛋白变异类型,其中,变异类型最多的品种二红皮小麦（ZM004659）30个子粒中有14种之多,多数品种具有2—3种变异类型。品种内醇溶蛋白构型一致的品种共有9个,占12．5％。这表明供试的大多数小麦地方品种内个体间在醇溶蛋白构成上具有遗传异质性。聚类分析表明,相同生态区的地方品种没有整齐地聚为一类。     

西藏小型猪线粒体D-loop区及微卫星多态性的遗传学分析

目的通过分析西藏小型猪线粒体控制区(D-loop区)及微卫星位点的遗传多态性,检测西藏小型猪的遗传背景,从而为其作为实验动物提供分子生物学方面的可靠依据。方法利用特异性引物对西藏小型猪的线粒体D-loop区及10个具有多态性的微卫星位点进行扩增,割胶纯化并对线粒体D-loop区进行测序,另外采用聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法分离微卫星位点的等位基因。结果西藏小型猪线粒体D-loop区全序列没有多态性,微卫星位点则具有高度的遗传多态性和杂合度,分别为0.584和0.573。结论西藏小型猪线粒体基因组无多态性,证明其在母系进化和遗传上与其他猪种较为一致,本实验所用的西藏小型猪生长于一个封闭的环境,导致其微卫星位点遗传多态性的中低度水平。     

五指山小型猪下颌骨的测量及分析

目的通过对五指山小型猪(WZSP)下颌骨23个主要变量进行测量分析,以确定该小型猪下颌骨主要遗传变量的数值范围。方法临床解剖取出下颌骨,用水煮沸后剔除肌肉和骨膜,然后用10%甲醛浸泡24h,再用万能角度尺、游标卡尺、卷尺对25例五指山小型猪(8～14月龄,17例雄性,8例雌性)的23个主要变量进行测量。并对测量结果进行统计学分析。结果在测得的雄性和雌性五指山猪下颌骨的23项变量中有4项差异有显著性,2项差异有极显著性,其他差异无显著性;下颌骨各变量之间存在一定的相关性,雄性下颌骨变量x7、x16、x22与其他17项变量相关有显著性或相关有极显著性,雌性下颌骨变量x21与其他11项变量相关有显著性或相关有极显著性。雄性五指山猪下颌骨测量变量显著、极显著相关性所占比例达到52.97%,雌性达到17.00%。与琉球野猪的下颌骨相比,雄性五指山小型猪的x15、x16、x21等变量差异无显著性,雌性的x15、x16、x21、x22等变量差异无显著性,而x2差异有显著性,琉球野猪的下颌骨显得更为狭长。与人及恒河猴(Macacamulatta)、猕猴等动物相比,五指山小型猪下颌骨的多项变量要高。结论测得五指山小型猪育成猪的下颌骨23项变量,可为五指山小型猪遗传、牙科等方面研究提供下颌骨形态学特征的资料。     

克隆猪技术及其在转基因猪研究中的应用

哺乳动物核移植技术是一种可以获得基因组遗传信息完全相同的后代的生物技术。猪体细胞核移植技术包括以下几个环节：卵母细胞的体外成熟、供体细胞的分离和处理、体细胞的核转移、重构胚胎的人工激活、胚胎体外培养和胚胎移植。由于该技术在最近几年的迅速发展,很多实验室已通过该技术成功获得了克隆猪后代。核移植克隆猪技术的出现为生产转基因猪提供了一种有效的方法,并且是目前生产基因打靶猪的惟一方法。至今利用克隆猪技术已经成功获得了一系列的转基因猪和基因敲除猪。以核移植技术产生基因修饰猪目前正处于从基础研究走向应用的过渡阶段。尽管猪体细胞核移植克隆的效率（出生克隆猪数占所用卵数的比例）还不高,但是由于通过该技术能够对猪基因组进行特定的修饰,确保生产的克隆动物100％为转基因动物,从而大大提高了转基因猪的制作效率,可以预料猪核移植技术将会对医药业和农业产生重大的影响。     

小型猪急性心肌梗死模型的建立及其评价

目的探索结扎小型猪冠状动脉左前降支（LAD）建立急性心肌梗死模型及进行血流评价的方法。方法小型猪20头全麻下开胸暴露心脏,预阻断LAD（第二对角支）15min,后予结扎,术中心电图动态监测,术后进行冠状动脉造影,心肌酶学监测以确定模型建立情况,冠状动脉造影以及^13N-NH3 PET心肌血流测定评价手术后血流改变。结果20头小型猪中有16头存活4周,成活率80％,开胸手术中1头因麻醉意外死亡,3头死于术后呼吸不畅。结扎后心电图呈动态变化,24h后血清心肌酶谱（CK,CK—MB,cTnI）较术前明显增高,差异有统计学意义（P〈0．05）,冠状动脉造影显示LAD血流中断,TIMI分级为0级,^13N—NH3 PET检查显示手术后缺损面积百分比（27．0±5．0）较手术前（4．0±3．2）有显著性差异,证实心梗模型建立成功。结论本实验中开胸手术成功率高,术后血流评价方法可用于手术前后冠脉血流和心肌血流的比较以及对心肌梗死后治疗效果进行评价。