腾冲嗜热杆菌热稳定海藻糖磷酸化酶的基因表达与酶的分子生物学性质研究

分离克隆了腾冲嗜热杆菌(Thermoanaerobacter tengcongensis)海藻糖磷酸化酶(TreP)的编码基因(treP), 该酶可催化以葡萄糖和α-1-磷酸葡萄糖为底物的海藻糖合成反应及其逆向的分解反应. 反向mRNA点杂交实验表明, 腾冲嗜热杆菌中treP基因在高盐胁迫条件下表达量增加, 而在海藻糖诱导条件下表达量降低. 将该基因导入不含TreP的大肠杆菌中进行诱导表达, SDS-PAGE表明, 异源表达的TreP分子量约为90 kD, 与预期值相同. 通过葡萄糖氧化酶法测定分解产物葡萄糖的产率表明: TreP催化海藻糖分解反应的最适温度是70℃, 最适pH值为7.0; 通过HPLC检测合成产物海藻糖的产率表明: TreP催化合成反应的最适温度为70℃, 最适pH值为6.0. 在最适反应条件下, 50 μg的TreP粗酶可催化25 mmol/L α-1-磷酸葡萄糖与葡萄糖在30 min合成11.6 mmol/L海藻糖; 而同量的酶在同样时间内仅能将250 mmol/L海藻糖分解生成1.5 mmol/L葡萄糖. 以上体内胁迫和诱导表达分析及体外酶学性质分析均证明该酶的主要功能是催化海藻糖的合成反应. 热稳定性实验表明, 该酶性质比较稳定, 在50℃下温育7 h还能保持77%以上的活性, 是一个有潜在工业用途的新的热稳定海藻糖合成酶.     

酸性和碱性土壤新分离的放线菌中线型和环型质粒的检测

从湖南、云南采集的19份酸性土壤样品分离到50株放线菌,在pH4.5和pH7.0的培养基上都能生长.从新疆、青海、云南的14份碱性土壤样品中分离到38株放线菌,在pH10.0和pH7.0的培养基上均能生长.因此,这些菌株属于中度嗜酸或中度嗜碱放线菌.利用脉冲电泳技术和普通凝胶电泳在其中12株放线菌中检测到线型质粒,其中3株放线菌中检测到环型质粒.这是首次在中度嗜酸和中度嗜碱的放线菌中报道线型和环型质粒.     

含奥氏酮嗜盐紫色硫细菌的分离鉴定及系统发育分析

[目的]为挖掘我国紫色硫细菌物种和光合蛋白基因资源.[方法]采用Pfennig紫色硫细菌无机选择性培养基和琼脂稀释法.[结果]从青岛东风盐场分离获得一株含奥氏酮、耐高浓度硫化物、嗜盐耐碱紫色硫细菌菌株283-1.该菌株能氧化硫化物产生硫粒储存在细胞内、嗜盐、细胞含有奥氏酮类胡萝卜素、细菌叶绿素a强吸收峰位于830 nm处、运动、不产生气囊,表明属于Marichromatium属.16S rDNA序列同源性比较和系统发育分析也表明这一点.但该菌株能在1%～15%NaCl、7.5 mmol/L 高浓度硫化物、45℃、5000lux、pH9.0条件下生长良好,能很好的光同化C3和C4有机酸和葡萄糖酸钠等特性,与Marichromatium属4个种有明显不同.[结论]菌株283-1是Marichromatium属一个新分离物,编号 Marichromatium sp.283-1.     

广东金山温泉沉积物中原核与真核微生物多样性初步分析

[目的]本研究旨在采用不同的PCR引物对广东省恩平市金山温泉的高温水底沉积物微生物多样性进行初步的分析.[方法]采用改进的玻璃珠法抽提温泉沉积物中环境基因组DNA,通过对用4对引物分别扩增得到的原核微生物16S rRNA基因和真核微生物ITS序列的分析,将所得到的数据与国际基因数据库GenBank进行相似性比较并构建系统发育树.[结果]研究发现原核类群G的 14个优势克隆中7个都属于蛭弧菌属(Bdellovibrio).与它们最相似的序列是从海洋中分离到的两个菌株 Bacteriovorax sp. NE1 (EF092445)和Bdellovibrio sp. JS5 (AF084859),相似性分别为96%和99%.原核类群X的4个序列主要属于蓝细菌类群,其中JS-X2与在美国黄石公园温泉发现的Uncultured Cyanobacterium (L35331)有95%的相似性,并且与已经全基因组测序的嗜热蓝细菌聚球藻Thermosynechococcus elongatus BP-1 (47118315)有89%的相似性.真核类群Z有三个类群,分别是Penicillium sp.,Lodderomyces sp.和Gloeotinia sp..其中大部分序列与青霉属相似性在88%～ 90%之间.[结论]所得到的结果显示金山温泉中的微生物多样性十分丰富.     

降纤酶治疗内耳眩晕症的疗效观察

我科自 1 998年初至 2 0 0 0年 1 0月在临床上按全国蛇毒酶临床应用研究协作组建议的降纤酶治疗方案 ,治疗内耳性眩晕症 2 6例 ,疗效肯定 ,现将临床疗效报告如下。1　临床资料1 .1　一般资料　 2 6例患者发病 2～ 1 2年 ,最少发作数 2次 ,最多发作数 1 5次 ,均为反复眩晕发作 ,感音性听力减退 ,伴有不同程度的耳鸣、耳聋 ,曾行头颅 CT及颈椎正侧位片检查未见异常。全部病例均符合内耳眩晕症的诊断 [1] 。其中男 1 9例 ,年龄1 9～ 62岁 ,平均 36岁 ;女 7例 ,年龄 32～ 5 8岁 ,平均 44.6岁。1 .2　治疗方法　降纤酶 (广西医科大学生物制品研…     

嗜麦芽假单胞菌热休克基因dnaK启动子的亚克隆及其在大肠杆菌中功能的研究

通过聚合酶链式反应（PCR）得到了嗜麦芽假单胞菌（Pseudomonas maltophilia)热休克基因dnaK启动子的DNA片段dnaKp,将dnaKp的PCR的产物亚克隆在报道载体质粒pUCD615的LuxCDABE基因上游,成重组的具有启动子的质粒融合体pUCD615p。转化到大肠杆菌的pUCD615p启动子对热、有机化合物和重金属的诱导响应快速灵敏,表现出强的启动子功能,能启动LuxCDABE基因表达,使荧光酶活性提高。借助荧光敏活性的变化,可检测系统中一些有机物和重金属的存在,作为一种灵敏的环境污染生物检测工具。     

下肢闭塞性动脉硬化症的护理与康复

肢体闭塞性动脉硬化症 (ASO)是四肢中、大动脉的动脉硬化性狭窄或阻塞、缺血而引起的症状和体征 [1] 。由于动脉内膜粥样改变 ,导致管腔狭窄、闭塞 ,发生肢体血液循环障碍 ,甚至出现溃疡或坏疽。常伴有冠心病、高血压、脑血管病、糖尿病等。临床以下肢发病多见 ,病残率和致死率较高 ,严重危害人类的身体健康和生活质量[2 ] 。我科自 1 999年 1月至 2 0 0 1年 1月共收治下肢 ASO病人 74例 ,采用中西医结合治疗 ,收到了较好的效果 ,现将护理体会介绍如下。1　临床资料　　本组 74例中 ,男 5 9例 ,女 1 5例 ,年龄 40～86岁 ;单纯左下肢发病 …     

泡囊丛枝（VA）菌根对玉米际磷酸酶活性的影响

以玉米为材料,利用三室隔网培养方法,研究了缺P土壤上施用植酸和卵磷脂时接种几种菌根真菌（Glomus mosseae,Glmous versiformea,Gigaspora margarita)对根际土壤酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性的影响,玉米生长70d后,收获测定距根表不同距离土壤中的磷酸酶活性,结果表明,接种菌根真菌增加了根际土壤酸性和碱性磷酸酶活性,Gigaspora margarita菌根菌的作用大于其它2个菌极菌,不同P源对磷酸酶活性有明显影响。     

抑制蛋白磷酸酶对嗜铬细胞瘤细胞一氧化氮合酶活性的影响

蛋白磷酸酶降低参与阿尔茨海默病（AD）神经元退化,本旨在探讨一氧化氮（NO）在tau蛋白过度磷酸化引起AD脑神经元退化中的可能作用。采用β-还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸-黄递酶（β-NADPH-d)组织化学技术研究不同剂量蛋白磷酸酶抑制剂岗田酸（OA）对嗜铬细胞瘤细胞株（PC12）一氧化氮合成酶（NOS）活性的影响。结果显示1nmol/LOA与PC12共培养48小时,NOS活性轻度增强;当增加OA浓度至10nmol/L时,培养24和48小时均可见NOS活性明显增强,结果表明根据1nmol/LOA抑制蛋白磷酸酶（PP）-2A,而10nmol/LOA除完全抑制PP-2A外,还部分抑制PP-1,提示PP-2A和PP-1的抑制均可增强NOS活性使NO产生增加,关于蛋白磷酸酶活性降低和NO产生增多与AD的关系和作用有待继续研究。     

用双色荧光愿位杂交和PCR技术鉴定无精症患者标记染色体的来源

目的：为了研究无精症患标记染色体的来源,对无精症患进行明确的遗传学诊断。方法：应用双色FISH技术和PCR技术对2例无精症患进行分子细胞遗传学和分子遗传学检测。结果：确定了两例特发性无精症患的标记染色体均来源于Y染色体,其核型为46,X,ishdel(Y)(q11)(DYZ3 ,DXZ1-)。结论：FISH技术结合PCR技术,是鉴定标记染色体来源的又一非常重要方法,对于无精症患在进行胞质内单精子注射（ICSI）或其它治疗之前,完成遗传咨询和明确的遗传学诊断也是特别必须的。