腾冲嗜热厌氧菌热休克蛋白60及其基因表达的热激动态变化分析

热休克蛋白60(HSP60)是细菌体内一种非常重要的分子伴侣,其可以协助蛋白质或肽链的正确折叠和构型,防止变性和降解。基于本实验室的早期观察,腾冲嗜热厌氧菌的HSP60是一个典型的温度相关蛋白质,在80℃的表达水平最高。为了进一步了解嗜热菌应急的分子机制,继续进行了在热激后HSP60基因表达的动态研究。将最适温度(75℃)下培养的腾冲嗜热厌氧菌迅速地转移至80℃继续培养,然后在不同的时间点上分别取样,并通过双向电泳、Western blot和Real_time PCR等方法,分析了HSP60在mRNA和蛋白质水平上的表达量的改变。试验结果表明,在80℃热处理4h内的短期应急过程中,HSP60蛋白水平一直呈上升趋势,而它的mRNA水平则表现为先升高后下降的一个非对称性的峰形变化。HSP60的mRNA和蛋白质的对温度的应答快慢程度是不同的。HSP60的mRNA水平的显著变化在1h内便可观察到,而蛋白质水平的显著改变要延迟3h左右。此外,HSP60的mRNA和蛋白质对温度的应答量变大小也是不同的。     

迎接生物技术的第三个浪潮

加入ＷＴＯ在我国经济生活中是件大事 ,它既带给我们巨大的发展机遇 ,也使我们遭遇到巨大的挑战。外贸形势说明 :一场旷日持久的、空前惨烈的经济战已经打响。与生物技术密切相关的农业、医药等产业的状况也不容乐观。在这种激烈竞争形势下 ,中国企业必需学会积极发现并认真构筑自己赖以生存和发展的优势 ,在这当中打造企业自身的技术优势就具有特别重要的意义。令人欣慰的是 ,在新世纪向我们走来的时候 ,生物技术掀起了它的第...     

致倦库蚊对登革Ⅱ型病毒的中肠感染屏障作用

为探讨致倦库蚊对登革Ⅱ型病毒的中肠感染屏障作用,通过病毒分离、逆转录聚合酶链反应、透射电镜等技术进行了相关研究。结果表明：吸食感染性血液后,登革Ⅱ型病毒能侵染白纹伊蚊中肠上皮细胞并大量复制,但不能侵染致倦库蚊中肠上皮细胞。以上研究证明致倦库蚊对登革Ⅱ型病毒存在中肠感染屏障。     

核、质基因对肺形侧耳菌丝生长、营养成分及基因表达的影响

本研究通过杂交构建肺形侧耳同核异质菌株N1M1、N1M2和同质异核菌株N1M1、N2M1,比较菌丝形态与生长速度、营养成分以及常见的细胞核基因与线粒体基因的表达量,分析线粒体基因对肺形侧耳菌丝的影响,探讨线粒体基因与核基因的相互作用。由菌丝生长情况可知N1M1和N1M2菌丝形态相似,生长速度差异不显著,N1M1和N2M1菌丝形态差异大,生长速度差异极显著,在菌丝形态与生长速度上细胞核基因作用大于线粒体基因。进一步检测菌株中的主要营养成分发现必需氨基酸与总水解氨基酸含量差异显著,菌株N1M2蛋白含量显著高于N1M1,N1M1维生素C含量是N1M2的1.67倍,菌株N2M1多糖和蛋白含量显著高于N1M1,铁和维生素C含量显著低于N1M1。所以细胞核基因、线粒体基因都能影响肺形侧耳营养成分含量。检测同核异质菌株N1M1、N1M2的7个细胞核常见基因的表达情况发现,N1M2菌丝中6个细胞核基因的表达量都显著高于N1M1,这表明肺形侧耳线粒体基因的不同会影响核基因的表达;同质异核菌株N1M1、N2M1的14个线粒体普通编码蛋白基因表达差异显著,这说明线粒体基因的表达量会因核基因的不同有所差异。综上,肺形侧耳线粒体基因和细胞核基因能够相互影响,共同作用于生命活动。     

麦芽四糖淀粉酶基因优化表达及酶学性质分析

麦芽四糖淀粉酶是一种新型外切淀粉酶,从淀粉的非还原末端特异地顺序切割第4个α-1,4糖苷键,产物为麦芽四糖,广泛应用于食品、医疗保健等领域.对来自嗜糖假单胞菌(Pseudomonas saccharophila)的麦芽四糖淀粉酶基因序列进行优化,优化前后基因序列同源性达75％.将优化合成的成熟肽基因克隆至原核表达载体pET32a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,重组蛋白主要以包涵体形式存在.包涵体经变性、复性、多步纯化,获得有活性的麦芽四糖淀粉酶.将麦芽四糖淀粉酶与不同来源的淀粉水解反应,结果表明,该酶能与7种不同来源的淀粉反应产生单一的麦芽四糖.经SDS-PAGE电泳,DNS法和硅胶板薄层色谱分析法(TLC)进行酶学性质分析,结果表明麦芽四糖淀粉酶的分子量约为57kDa,纯化后的酶液最适反应温度为45℃,最适反应pH为8.0.研究结果为麦芽四糖淀粉酶的研究和开发提供依据和参考.     

单纯疱疹病毒感染单位核—巨噬细胞

本文综述国外近年来对单核－巨噬细胞受单纯疱诊病毒（ＨＳＶ）感染的研究成果。单核－巨噬细胞对ＨＳＶ感染具有天然的内在抗性,这种抗性受遗传基因控制,不依赖于干扰素（ＩＦＮ）。单核－巨噬细胞的这种抗性因其组织来源和分化状态的不同而有程度上的差异。佛波酯类（ＰＭＡ）,脂多糖（ＬＰＳ）,α－肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）等可削弱这种抗性,促进ＨＳＶ在单核－巨噬细胞中增殖。     

多药耐药菌肺感染患者应用改良后呼吸机对病室环境卫生学影响

目的:探讨应用改良后的呼吸机对病室环境卫生学的影响。方法:对10例产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌肺感染应用呼吸机的患者和40例肺部感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)使用呼吸机的患者进行分组试验,对病室环境卫生学监测结果进行统计分析。机器改良方法是呼吸机的呼气阀处连接一条螺纹管,将带菌空气引出,消毒后排放。结果:肺部感染产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌应用改良后呼吸机的一组在空气、床头桌、水池、操作中人员手的阳性率分别为20%、10%、20%、10%,较未改良的对照组为80%、70%、70%、50%有明显的下降。肺部感染MRSA使用有创改良呼吸机组空气、床头桌、水池、操作中人员手的阳性率分别为10%、10%、5%、10%均低于无创改良组的20%、20%、10%、20%。结论:此种方法有效地降低了环境的污染程度,降低了医源性医院感染的风险。加强洗手和隔离等卫生预防学措施可以有效的降低MRSA的医院感染率。     

布氏菌通过prpA依赖的方式改变免疫应答

<正>布氏菌病是由革兰氏阴性布氏菌属细菌引起的一种分布广泛、人畜共患的疾病,特别是在发展中国家,这种病使人和动物的健康受到严重威胁。布氏菌感染的一个显著特征就是病程长且反复发作,在其众多的致病因素中,免疫调节蛋白如prp A发挥重要作用,使其表现为慢性病的发病特征。Prp A是编码脯氨酸消旋酶蛋白A或羟脯氨酸-2-差向异构酶蛋白的基因。我们发现,在体内,流产布氏菌prp A可     

思力华对慢性阻塞性肺疾病患者中性粒细胞、IL-8及TNF-α水平的影响

目的:探讨舒利迭联合思力华治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者的临床疗效及对患者痰液中性粒细胞、白介素(IL)-8、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平的影响。方法:选取2015年8月~2016年7月来我院就诊的148例COPD缓解期患者,根据患者的入院顺序分成两组,每组74例。对照组治疗采取舒利迭,观察组联合给予思力华治疗,对比两组治疗效果、治疗前后肺功能、动脉血气分析相关指标以及痰中性粒细胞及IL-8、TNF-α水平的变化。结果:治疗后,观察组与对照组总有效率分别是94.59%、83.78%,观察组较对照组显著升高(P0.05)。两组治疗后PaO_2水平、6 min步行距离均较治疗前明显上升及增加,PaCO_2水平明显下降(P0.01),且观察组血气分析指标显著优于对照组,6 min步行距离明显大于对照组(P0.01)。两组治疗后FEV1、FEV1/FVC、FEV1%水平均较治疗前显著升高(P0.01),观察组各项肺功能指标改善效果显著优于对照组(P0.01)。两组治疗后痰中性粒细胞计数与IL-8、TNF-α水平均较治疗前明显下降(P0.01),观察组痰中性粒细胞计数与IL-8、TNF-α水平明显低于对照组(P0.05)。结论:舒利迭联合思力华治疗缓解期COPD可有效改善患者肺功能,缓解炎症反应,疗效确切。     

嗜酸乳杆菌DOMLa菌株thyA基因突变株的筛选

为构建以ｔｈｙ基因为选择标记的嗜酸乳杆菌染色体－质粒致死平衡系统。我们建立了嗜酸乳杆菌ｔｈｙ基因突变菌株的筛选方法。从含有三甲氧卞氨啶（ＴＭＰ）２０μｇ／ｍｌ和胸腺嘧啶（ｔｉｈｙｍｉｄｉｎｅ）５０μｇ／ｍｌ的改良ＭＲＳ培养基因中筛选了１００株突变株,从中确定一株生物学性状稳定的菌株ＤＯＭＬａＦ８４作为进一步研究的受体侯选菌株。