大丽轮枝菌（Verticillim dahliae）突变体库的构建与分析

为了更加快捷地筛选大丽轮枝菌致病关键基因,利用聚乙二醇介导的原生质体转化法构建病原菌随机插入突变体库,对部分阳性转化子的生长表型指标和致病力进行分析,筛选生长发育与致病缺陷突变体并进行靶标基因定位。结果表明,本研究共获得13 030多个阳性转化子,随机挑选5个转化子与V991野生型菌株进行比较分析,发现其中一个突变体在PDA和不同碳源培养基上的菌落直径、产孢量以及致病力均显著降低。侧翼序列测序结果结合Blast比对分析表明,该缺陷突变体中的潮霉素抗性基因表达盒定位于大丽轮枝菌3号染色体1 528 782 bp处,属于内切葡聚糖酶1基因（VDAG＿04017）。综上所述,本研究通过大丽轮枝菌插入突变体库构建、突变体生长表型指标和致病力鉴定及靶标基因定位等一系列分子生物学手段,可初步鉴定病原菌致病相关基因,为从全基因组层面深入研究大丽轮枝菌致病机制奠定了一定基础。     

艰难拟梭菌毒素致病机制及毒素基因调控的研究进展

艰难拟梭菌(Clostridioides difficile)是一种产芽孢的革兰氏阳性专性厌氧杆菌,是引起抗生素相关性腹泻的主要致病菌。艰难拟梭菌产生的毒素A和毒素B在其致病过程中发挥关键作用。毒素发挥毒性作用依赖其4个功能结构域:葡萄糖基转移酶结合域、半胱氨酸蛋白酶结合域、易位域和受体结合域。毒素的受体结合域识别并结合细胞表面受体,介导毒素内吞并形成内体。经过自体催化切割,毒素将真正的毒性片段——葡萄糖基转移酶结合域释放到胞浆中,葡萄糖基转移酶能够失活宿主肠上皮细胞内的GTP酶导致细胞骨架解聚和坏死,进而引起腹泻和伪膜性结肠炎等临床症状。艰难拟梭菌毒素产生受致病基因座内及基因座外许多调控因子的调节。tcdR和tcdC基因位于致病基因座内,对毒素基因的表达分别起促进和抑制作用,而基因座外如spo0A、codY等基因则通过抑制tcdR的表达从而间接影响毒素蛋白产生。本文将重点介绍艰难拟梭菌毒素的致病过程和影响毒素基因表达的分子调控机制,以期为开发针对毒素的治疗手段提供新思路。     

浸麻类芽孢杆菌葡甘露聚糖降解酶的异源表达及功能研究

【目的】克隆表达浸麻类芽孢杆菌(Paenibacillus macerans)的葡甘露聚糖降解酶,研究其性质和功能,丰富葡甘露聚糖降解酶资源,了解浸麻类芽孢杆菌降解葡甘露聚糖机制。【方法】检索浸麻类芽孢杆菌的葡甘露聚糖降解酶基因,构建重组菌株,表达纯化重组酶,系统研究其功能及在降解葡甘露聚糖中的作用。【结果】克隆表达了5个葡甘露聚糖降解酶组分。结果显示PmMan1和PmMan2为内切β-甘露聚糖酶,PmGlc1、PmGlc2和PmGlc3为外切β-葡萄糖苷酶。其中PmGlc1只能水解pNPβGlc,PmGlc2能水解二糖和人参皂苷的β-1,6-葡萄糖苷键,而PmGlc3对β-葡萄糖苷键的选择性较为广泛。PmMan1、PmMan2、PmGlc2和PmGlc3能够降解葡甘露寡糖,PmMan1和PmMan2可以降解葡甘露聚糖。共同降解葡甘露聚糖时,PmGlc2和PmGlc3与PmMan2具有协同效应,且PmGlc3与PmMan2的协同作用更为显著。【结论】从浸麻类芽孢杆菌中获得了4种葡甘露聚糖降解酶,阐明了该菌葡甘露聚糖降解酶系成员的作用,丰富了酶资源和理论研究成果的同时,为酶法制备活性葡甘露寡糖提供了有效工具。     

芽胞杆菌属芽胞长久存活机制的研究进展

能够在不利的外界环境下长久存活是一些产芽胞菌的重要特点之一,本文就国外对在芽胞内环境,酶休的眠,芽胞与化学因子、放射线、热的关系等方面的研究状况进行了论述。     

中国异皮属线虫一新种（线虫纲：垫刃目：异皮科）

本文描述采自河北省滦县寄生于白茅Ｉｍｐｅｒａｔｅ ｃｙｌｉｎｄｒｉｃａ ｖａｒ．Ｍａｊｏｒ的异皮属线虫一新种,中华异皮线虫Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ ｓｐ．ｎｏｖ．;新种孢囊为柠檬形,阴门膜孔为两侧单膜孔型,下桥发达有泡状突;二龄幼虫口针基部球前部略凹陷,口孔侧唇外缘融合王头晕第１环纹内,即无明显侧唇,其体侧区有３条侧线与体环纹呈不完全网格状交叉;雄虫侧区有３条侧线与体环纹呈完全网格状     

口服双歧杆菌后呼氢曲线改变及临床意义

本文对２０例健康人和１０例溃疡病人（经奥咪拉唑２０ｍｇ／日治疗两周以上）进行研究,受试者均在口服双歧杆菌（２亿／ｄ）前及一周后各测试一次乳果糖呼氢试验。结果：服菌前健康组有４例双峰型曲线,溃疡病组均为不典型双峰曲线,服菌后两组中双峰曲线均变为单峰曲线。健康组呼气氢浓度时间曲线上Ｔ＝１３５分至２１０分各位点浓度服菌后显著增高（Ｐ＜０．０５－０．０２）溃疡病组Ｔ＝７５,９０,１０５及１９５,２１０分各位点浓度服菌一周后显著降低（Ｐ＜０．０５）。健康组服菌一周后ＦＨ２和△ＭＨ２较服菌前显著增高。结果提示：口服双歧杆菌活菌能定植于结肠内,对小肠细菌过度生长有清除作用。     

新型肌苷新生菌——产氨短杆菌GMBA—800选育和特性的初步研究

采用多种方法诱变获得一株新型肌苷产生菌－－产氨短杆菌ＧＭＢＡ－８００,对其生长和发酵条件进行初步研究。肌苷产量从５ｇ／Ｌ提高到１８．４１ｇ／Ｌ,发酵周期从８４ｈ缩短为６３ｈ。菌株遗传性状稳定。     

成人革兰阴性杆菌肺炎23例临床分析

本文以临床体征,胸片和连续二次以上细菌培养阳性为诊断标准,报告革兰阴性杆菌肺炎２３例,并就其临床表现,并发症及预后进行分析,提出８种情况应考虑革兰阴性杆菌肺炎,对临床诊断和治疗有指导意义．