腺相关病毒载体介导siRNA抑制HBV的表达与复制

目的：构建并制备能够有效抑制HBV mRNA表达的siRNA重组腺相关病毒。 方法：将筛选到的siRNA片段克隆入骨架质粒pAAVMCS中,与pAAVRC和pHelper质粒共转染人胚肾293T细胞,包装出重组腺相关病毒,将纯化后的重组病毒直接感染Hep G 2.2.15细胞,通过酶联免疫法和荧光定量PCR法检测重组腺相关病毒的抑制效果。结果：重组腺相关病毒显著降低HBV 分泌的相关抗原蛋白以及DNA和RNA水平。结论：重组腺相关病毒载体介导的siRNA能够有效抑制HBV的表达与复制。     

植物蛋白质组学研究进展Ⅱ.蛋白质组技术在植物生物学研究中的应用

蛋白质组技术已广泛应用于植物遗传、发育和生理生态等诸多生物学领域, 主要研究植物的遗传多样性、植物发育(如种子成熟与发芽过程)、组织器官的分化过程、不同亚细胞结构的新蛋白组分的发现及其功能鉴定、植物对非生物逆境(包括高温、低温、高盐和干旱等)和生物逆境(病虫害)的适应机制和植物与微生物(根瘤共生体)相互作用机制。同时对植物蛋白质组学的发展前景进行了讨论。     

用分子标记揭示植物随机大居群中亚居群的遗传结构——茅栗自然居群空间遗传结构的SSR分析

采用微卫星标记对茅栗(Castanea sequinii)随机大居群以及其中各亚居群的遗传结构进行了空间自相关分析,以探讨植物自然居群内遗传变异的分布特征及其形成机制。通过9对微卫星引物所产生的119个多态位点,测定了大别山区域内茅栗居群以及各亚居群的空间自相关系数Moran's I值。结果表明:大别山分布的野生茅栗为一个缺乏空间结构的随机大居群,茅栗亚居群之间频繁的花粉流削弱了地理隔离导致的遗传漂变或分化作用在维系居群随机遗传结构中具有的重要作用。但是,在接近亚居群大小的地域范围内(0.228 km)具有一定的空间结构,即小地域尺度中的亚居群存在着空间遗传结构。取样的3个亚居群在小格局范围内都存在一定的空间结构,遗传变异基本上呈非随机分布,在短距离内(61 m)3个亚居群一致表现出不同程度的显著正相关,而随着距离的增加,Moran's I值虽然在不同亚居群间存在一定差异变化,但是总体而言趋向预期值,即不存在空间结构,说明其遗传变异在亚居群内只是在短距离内形成一定的空间结构。研究认为有限的种子散播以及微生境选择等因素可能是产生这种小格局的遗传结构的主要原因。上述研究结果有助于进一步了解植物随机大居群的进化历史和生态过程,同时也为栗属植物中国特有种的保育策略提供了科学依据。     

新基因Restin的克隆及比较生物学分析

采用PCR介导的减法杂交技术,从全反式维甲酸诱导的HL-60细胞中克隆得到一新基因,该基因编码219个氨基酸.借助生物信息学分析技术,发现该基因表达蛋白与神经细胞生长抑制因子(Necdin)的功能结构域高度同源(49%),均为碱性蛋白,命名为Restin(细胞静息相关蛋白).更有意义的是,同源搜索发现Restin,Necdin和Mages(黑色素瘤相关抗原家族)为同一蛋白家族,提示Restin和Mages是两类具有某种联系而功能又不同的蛋白质. 对所有这些蛋白进行综合分析发现,它们分别属于两个不同的亚家族,碱性蛋白家族和酸性蛋白家族,其中Restin,Necdin和Mage D1含有碱性同源结构域(理论pI为8.6～10.1), 主要在终末分化细胞中表达,在肿瘤组织极少表达或不表达,实验结果表明,Necdin可以与转录因子(E2F1)及p53相互作用,从而抑制细胞增殖,推测此类蛋白可能与细胞静息状态相关;而Mage A,C等表现为酸性同源结构域(理论pI为4.2～4.9),主要在肿瘤组织和胎儿组织中表达,推测此类蛋白可能与细胞增值有关.这两类蛋白是否构成一对与细胞周期调控相关的正负系统值得进一步深入研究.     

带myc标签的人造血相关PBX相互作用蛋白真核表达载体的构建及其功能研究

目的:构建带myc标签的造血相关PBX相互作用蛋白(HPIP)的真核表达载体,获得myc-HPIP融合蛋白,并对其生物学功能进行初步检测。方法:以本实验室保存的pcDNA3.0-HPIP质粒为模板,采用PCR技术扩增HPIP编码序列,将其插入pXJ-40-myc载体,通过Western印迹检测表达情况;将重组质粒与空载体分别转染人肝癌HepG2细胞,通过Western印迹检测其对AKT、ERK信号通路中AKT、ERK磷酸化水平的影响。结果:双酶切和测序结果表明myc-HPIP真核表达质粒构建成功,转染HepG2细胞后表达了myc-HPIP融合蛋白;Western印迹证明myc-HPIP可升高AKT、ERK的磷酸化水平。结论:构建了带myc标签的人HPIP真核表达载体,为进一步研究HPIP在肿瘤发生发展中的功能奠定了基础。     

锌胁迫对两种柑橘幼苗光合特性日变化及其相关性的影响

通过砂培试验,采用C I-340型便携式光合测定系统研究了不同锌处理（0.05mg/L Zn为对照,0.5mg/L Zn为锌过量,0mg/L Zn为锌缺乏）对‘不知火’和‘椪柑’幼苗叶片光合特性日变化及其相关性的影响。结果表明,在锌胁迫条件下,‘不知火’叶片的净光合速率（Pn）日变化呈单峰曲线,对照为双峰曲线,而‘椪柑’与对照呈现相似的单峰型变化,且锌胁迫下两者平均的Pn均显著低于对照。简单相关分析表明,‘不知火’在锌胁迫下叶片Pn与光合有效辐射（PAR）、蒸腾速率（Tr）均呈显著的正相关,其对照Pn与各因子之间并无显著相关性,各锌处理下的‘椪柑’叶片Pn均与Gs呈显著正相关。逐步多元回归的分析结果与简单相关分析结果存在出入。还就锌胁迫对两品种柑橘的光合特性及其相关性的影响进行了讨论。     

布拉酵母菌辅助治疗对老年CagA和VacA阳性幽门螺杆菌感染患者IL-6和IL-8及肠道菌群的影响

评价布拉酵母菌（S. boulardii）对老年细胞毒素相关蛋白A（cytotoxin-associated gene A protein, CagA）和空泡毒素（vacuolating cytotoxin A, VacA）阳性幽门螺杆菌（H. pylori）感染患者炎症因子及肠道菌群的影响,以探讨S. boulardii治疗H. pylori I型高毒力株感染的机制。

选择我院200例CagA和VacA阳性的老年H. pylori感染者,采用随机数字表分成四联组和S. boulardii组。四联组患者采用铋剂四联疗法,S. boulardii组在铋剂四联疗法基础上加用S. boulardii。比较两组患者H. pylori根除率、胃黏膜组织学评分、临床疗效评分、不良反应、血清白细胞介素（IL）-6及IL-8水平、肠道菌群分布。

（1）S. boulardii组H. pylori根除率按方案（PP）分析和按意向性（ITT）分析均高于四联组（85.1% vs 72.8%;80.0% vs 67.0%）,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。（2）S. boulardii组患者不良反应发生率（7.0%）低于四联组（21.0%）,差异有统计学意义（χ² = 8.140,P = 0.004）。（3）治疗后,两组患者胃黏膜组织学评分、临床症状评分、血清IL-6及IL-8水平均较治疗前降低,且S. boulardii组低于四联组（均P＜0.05）。（4）治疗后,四联组患者肠道乳杆菌、双歧杆菌数量较治疗前减少,肠杆菌、肠球菌数量较治疗前增加（均P＜0.05）;而S. boulardii组患者肠道乳杆菌、双歧杆菌数量较治疗前增加（均P＜0.05）,肠杆菌、肠球菌数量较治疗前差异无统计学意义（均P＞0.05）。

S. boulardii辅助四联疗法可提高老年患者H. pylori I型高毒力株的根除效果,减轻患者胃黏膜组织炎症,降低不良反应,其机制可能与S. boulardii下调免疫炎症介质表达和改善肠道菌群分布有关。

     

添加益生菌的早期滋养量肠内营养对重症脑卒中患者呼吸机相关性肺炎的影响

目的 探讨早期给予添加益生菌的滋养量肠内营养（EN）对重症脑卒中患者呼吸机相关性肺炎（VAP）的影响。方法 选择2015年10月1日至2017年10月1日我院神经内科收治的接受鼻饲饮食及机械通气的重症脑卒中患者56例,随机分为对照组和观察组各28例。对照组患者在入院48 h内给予早期肠内营养支持治疗,观察组在对照组基础上常规给予双歧杆菌乳杆菌三联活菌片鼻饲,并给予滋养量肠内营养支持治疗（起始量10~20 mL鼻饲低速泵入）。比较两组患者治疗后肠内营养达标时间、肠内营养并发症发生率、营养状态指标、炎症因子水平、呼吸机相关性肺炎发生率、脱机成功率及病死率。结果 治疗后,观察组患者腹胀、腹泻、应激性高血糖发生率较低,肠内营养达标时间较短。同时观察组患者血清白蛋白、前白蛋白、淋巴细胞计数均高于对照组,血WBC、CRP、PCT水平均低于对照组。观察组患者脱机成功率相对较高,呼吸机相关性肺炎发生率相对较低。观察组患者GCS评分、APACHEⅡ评分及病死率相对较低,但差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 早期给予添加益生菌的滋养量肠内营养有助于提高患者肠内营养的耐受性,改善患者营养状态,降低炎性因子水平,有助于减少呼吸机相关性肺炎发生率。     

动物园的教育作用不可取代

我孩子现在4岁,每个星期都要去两三次动物园。很多孩子都是这样,动物园对他们来说具有非凡的吸引力,因此其教育作用不可低估。包括我自己,还有不少从事动物以及相关方面研究的学者和活动家,喜欢动物、关心动物、研究动物,最初都是从动物园开始的。可以说,动物园是我们启蒙的地方,如今我们又把所学的知识应用在动物园的动物身上。从这个意义上说,动物园的教育作用是不可取代的。     

BJ-DRGs在某综合医院科室住院服务评价中的应用研究

目的 利用“北京版诊断相关组”为风险调整工具,评价各科室住院服务产出,为医院精细化管理提供方向。方法 参照北京市临床重点专科评价方法选取指标及计算公式,分别对科室产出指标计量结果进行科室间比较和与前3年自身平均水平比较,进而评价分析。结果 全院住院服务水平逐步向好;各科室贡献水平不同,外科系统贡献优于内科系统,质量得分对排名影响较大。结论 多维度分析,改进住院服务评价方法适应科室间评价;以住院服务质量安全为评价重点;评价方法及结果应用需结合医院实际情况。