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91.
探索了蓝色染料(Cibacron Blue F3G-A)亲和分离中华眼镜蛇心脏毒素的可能性。采用环氧基活化法制备蓝色染料亲和介质,中性条件下提取眼镜蛇粗毒中的心脏毒素。Tricine系统SDS-PAGE多肽电泳和Lowry法蛋白定量分析纯化效果,发现蓝色染料琼脂糖一步纯化中华眼镜蛇心脏毒素的纯度达到84%,结合量为6.9mg/ml介质。这是首次利用小分子亲和配基纯化心脏毒素。与生物大分子配基相比,活性染料分子具有价格便宜,易于合成,性质稳定,不易降解和适合大规模生产等优点。 相似文献
92.
为了降低野生型葡激酶 (wild- type staphylokinase,wt- Sak)的免疫原性 ,对已构建的葡激酶N端缺失突变体 (ΔNSak) c DNA进行改造 ,将其主要的抗原决定簇编码序列突变为丙氨酸密码子 .该突变体 (ΔNMSak) c DNA与原核表达载体 p LY- 4重组后 ,转化大肠杆菌 JF1 1 2 5.经温度诱导 ,ΔNMSak获得高效表达 ,重组蛋白占全菌总蛋白的 60 % ,以包涵体形式存在 .包涵体经洗涤 ,8mol/L尿素溶解 ,稀释复性 ,离子交换色谱一步分离至电泳纯 ,纯度达 95%以上 ,分子量与理论值相符 ,比活性 8.5× 1 0 4 HU/mg.经 ELISA法、发色底物法测定 ,ΔNMSak与 wt- Sak制备的兔抗wt- Sak抗血清的免疫反应性显著降低 ,经抗血清温育后 ,wt- Sak活性下降程度远高于 ΔNMSak.ΔNMSak、wt- Sak分别免疫豚鼠 ,以 ELISA法测定豚鼠血清中相应抗体的效价 ,ΔNMSak组的抗体效价明显低于 wt- Sak组 ,表明 ΔNMSak的免疫原性显著下降 . 相似文献
93.
我国海域分布有相当丰富的鲨资源,而鲨体内中具有许多重要的生理活性物质。本文概述了鲨体内的生理活性物质及其分离纯经技术和应用现状,并展望其开发利用前景。 相似文献
94.
林肯链霉菌丙氨酸脱氢酶的纯化和性质 总被引:2,自引:0,他引:2
采用硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素52柱层析、亲和蓝柱层析和琼脂糖凝胶Sepharose6B柱层析的方法,分离纯化了林肯链霉菌丙氨酸脱氢酶,用聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单一组分。以凝胶过滤和聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳测得该酶的分子量为170000,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得其亚基分子量为42500,表明林肯链霉菌丙氨酸脱氢酶由四个相同的亚基组成。该酶加氨反应最适pH为9.0,脱氨反应最适pH为9.5,加氨反应和脱氨反应的最适温度均为50℃。加氨反应丙氨酸脱氢酶的表现米氏常数km值为:丙酮酸2.08×10-4mol/L,NH4+2.00×10-2mol/L,NADH2.38×10-5mol/L;脱氨反应的Km为:L-Ala1.43×10-2mol/L;NAD+6.67×10-5mol/L。 相似文献
95.
铁氧还原白-NADP^+氧还酶(FNR)是光合电子传递中的关键酶之一。蓝细菌Synechococcus sp.PCC7002中编码FNR的petH基因被克隆到表达载体pET-3d上,在大肠杆菌中得到了高效表达,其表达量占大肠杆菌总蛋白的505%以上。高效表达的产物以可溶性和包含体两种形式存在。可溶性部分具有FNR的酶活性,在经过离子交换和凝胶层析后产生了电泳纯的FNR。包含体形式的部分经6.7mo 相似文献
96.
介绍了X射线衍射技术在研究蛋白质动态过程中的应用.首先介绍了用常规X射线衍射法和劳埃X射线衍射法等数据采样法研究反应时间为几分钟的蛋白质催化反应.然后介绍了通过选择不匹配底物,不适宜酸度,选择温度和酸度的跳跃,金属和光化学瞬时激发达到反应的同步来研究反应时间为几秒钟的蛋白质催化反应. 相似文献
97.
98.
粘虫颗粒体病毒增效因子的分离纯化及其生化性质 总被引:13,自引:0,他引:13
粘虫颗粒体病毒经0.02mol/LNaOH碱溶,先用SephadexG-200凝胶过滤层析柱从病毒蛋白粗提中分离增效因子,然后选用DEAE-SepharoseCL-6B离子交换层析柱进一步纯化增效因子,得到少量电泳纯的增效因子蛋白样品。 相似文献
99.
重组含有Epstein-Barr病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)基因的杆状病毒在昆虫细胞中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
用杆状病毒表达系统重组病毒,在昆虫细胞中表达了完整的含有EBV-LMP1基因3个外显子开放读码框架的长2.3kb的cDNA片段。用重组病毒感染Sf9细胞,用免疫荧光染色,结果表明:48小时表达重组蛋白,72小时细胞较完整,免疫荧光染色强阳性,96小时后细胞出现破碎。我们采集72小时的组织培养上清和细胞破碎裂解液,分别采用SDS-PAGE、HPLC分子筛法,用免疫蛋白印迹法实验证明,表达的蛋白能被抗LMP1的单克隆抗体所识别,测定表达蛋白的分子量为60kD。经蛋白含量扫描图分析,采用Sephadex-75柱初步纯化表达的LMP1蛋白,将后者进行裸鼠体内致瘤实验,未见肿瘤生长。 相似文献
100.
宛氏拟青霉菌木聚糖酶的分离纯化 总被引:3,自引:0,他引:3
经自然筛选分离得到一株产高木聚糖酶活力的拟青霉属菌,初步鉴定为宛氏拟于霉(PaecilomycesvariotiBainier)菌。该菌所产的木聚糖粗酶液分别经硫酸铵,乙醇沉淀,SephadexG-100,DEAE-SephadexA-50分离纯化后得4个组分,分别称为I,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ。其反应最适温度和pH分别为I,pH4.2,47℃,Ⅱ,pH4.2,52℃,ⅢpH4.0,47℃,Ⅳ,pH3.8,4 相似文献