神经节苷脂类抑制BT325细胞系的生长

应用自提的神经节苷脂GM3, 牛脑神经节苷脂(bovine brain gangliosides, BBG)加入低血清培养的人多形成胶质细胞瘤BT325细胞中观察其对该细胞系的影响; 以及GM3、BBG对表皮生长因子(EGF)刺激该细胞系生长的拮抗作用. 结果表明GM3、BBG均能抑制BT325细胞生长,GM3的抑制作用远高于BBG, 其抑制率为60.28% (P＜0.01), BBG为19.33％,在含不同浓度的EGF培养液中分别加入GM3、BBG均可拮抗EGF对BT325生长的刺激作用, GM3的拮抗作用远高于BBG.     

表皮生长因子及其受体和erb-B在鼠视网膜的表达

用免疫组织化学方法,对鼠视网膜的表皮生长因子(EGF)及其受体(EGF-R),和erb-B的表达,作了研究.结果表明:①EGF,EGF-R和erb-B分别在视网膜各层有不同表达;②EGF免疫反应着色不强,但有特异性地均匀分布在节细胞层(GCL)、内核层(INL)、外核层(ONL)和视网膜色素上皮层(RPE);③EGF-R免疫反应着色以GCL和INL的细胞明显,分布于细胞浆和细胞核,以细胞核更明显;④erb-B的分布类似EGF.但在ONL内出现一条较明显的着色带.对以上结果的可能意义进行了讨论.     

肝星状细胞中表皮形态发生素表达调控机制及其作用研究

肝星状细胞是肝脏中重要的间质细胞,是肝细胞外基质的主要来源.表皮形态发生素(epimorphin、EPM、syntaxin2)在肝脏发育、再生及癌变过程中发挥了重要的作用,目前其表达变化的调控机制及对肝星状细胞的作用还未有报道.通过对肝组织标本进行检测,发现肝纤维化过程中肝星状细胞表达EPM上调.从表观遗传学的角度对EPM表达变化调控机制进行研究,发现DNA去甲基化促进了EPM的表达.为了研究EPM对肝星状细胞的可能的调节作用,将EPM表达质粒转染肝星状细胞,之后检测了EPM对肝星状细胞增殖及迁移能力的变化.结果证明EPM能够促进肝星状细胞的增殖与迁移.本研究发现,激活的肝星状细胞高表达EPM可能是由于DNA去甲基化引起的,同时,高表达的EPM能够促进肝星状细胞的增殖与迁移,进而促进肝纤维化进展.     

EGFL7 基因RNAi慢病毒表达载体的构建及鉴定

目的：构建人类表皮生长因子域7（EGFL7）基因RNA干扰（RNAi）重组慢病毒表达载体。方法：参照小分子干扰RNA 的设 计原则,应用OligoDesigner 3.0 软件设计三条靶向人EGFL7 基因的RNA干扰序列（hEGFL7-RNAi）,并将其分别插入含有绿色 荧光蛋白（GFP）的慢病毒载体pLV3 中,获得重组质粒,与包装质粒pRsv-REV、pMDlg-pRRE 和pMD2G共同转染293T细胞,包 装产生重组慢病毒,培养72 h后,应用qRT-PCR 检测慢病毒感染人脐静脉内皮细胞（HUVEC）后靶基因mRNA 的水平,以评价 其基因沉默效果。结果：筛选出3 条人EGFL7 基因的RNAi 序列,分别包装出重组慢病毒,其滴度分别为1× 108、2× 108和5× 108TU/mL,将其转染入HUVEC 后,EGFL7mRNA表达均受到明显抑制(P<0.05)。结论：成功筛选出三条针对人EGFL7基因的 RNAi有效靶序列,并成功构建重组慢病毒表达载体,证明该序列可沉默HUVECs 中EGFL7 基因的表达。     

曲妥珠单抗辅助或新辅助治疗HER2 阳性转移性乳腺癌的临床结果

目的:比较人表皮生长因子受体2过表达(HER2+)的患者既往接受以曲妥珠单抗为基础辅助或新辅助治疗后再次接受针曲妥珠单抗治疗的临床结果。方法:共247例(I-III期170例,IV期77例)HER2+转移性乳腺癌患者,其中首次接受曲妥珠单抗治疗患者211例(I-III期134例,IV期77例),再次接受曲妥珠单抗治疗患者36例(I-III期)。使用Cox比例风险回归和logistic回归分析首次或提前接受曲妥珠单抗治疗的患者的预后的临床结果,生存评估使用Kaplan-Meier法。结果:I-III期HER2+转移性乳腺癌患者中,未预先接受曲妥珠单抗治疗组的中位总生存期为36个月和预先接受曲妥珠单抗治疗组为28个月(危害比[HR],1.45;95%CI,1.05-2.02[P=0.012]);I-IV期HER2+转移性乳腺癌患者中,未预先使用曲妥珠单抗组的中位总生存期为37个月,客观缓解率58%;临床获益率77%;预先使用曲妥珠单抗组为25个月,客观缓解率28%;临床获益率37%;调整后的比值比为客观缓解率0.37(9%CI,0.18-0.77;P=0.010)和临床获益率0.28(95%CI,0.14-0.59;P=0.014)。单因素分析没有提前接受曲妥珠单抗治疗组中位总生存率较长(P=0.012)。多因素分析发现总生存率没有显著差异(P=0.19)。结论:当曲妥珠单抗用于转移性疾病,没有提前接受曲妥珠单抗治疗的HER2+乳腺癌患者临床结果优于提前接受曲妥珠单抗治疗的患者。     

人tBID蛋白的表达纯化及其偶联的新型分子探针对前列腺癌细胞的促凋亡作用研究

目的:以PQE-30为原核表达载体,构建PQE30-tBID重组表达载体,表达和纯化目的蛋白tBID,并利用金磁纳米微粒将tBID蛋白与人HER2抗体偶联成分子探针Anti HER2-Gold Mag-tBID,以探究其对前列腺癌细胞的促凋亡作用。方法:根据tBID的基因序列设计特异性的上下游引物,利用普通PCR扩增目的基因tBID,构建重组表达载体PQE30-tBID,将其转化到BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,经SDS-PAGE凝胶电泳和Western Blot鉴定分析,验证目的蛋白tBID的表达,并对其进行纯化。利用金磁纳米微粒与蛋白质之间的静电相互作用以及疏水相互作用,将人HER2抗体与tBID蛋白偶联在其表面,构建分子探针Anti HER2-Gold Mag-tBID。流式细胞术检测该分子探针与前列腺癌PC-3细胞的特异性亲附结合能力,通过Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒分析分子探针对PC-3细胞的促凋亡作用。结果:普通PCR扩增后得到了411 bp的DNA片段,经双酶切鉴定以及菌液测序,表明重组表达载体PQE30-tBID构建成功。促凋亡蛋白tBID成功地在大肠杆菌中表达,蛋白相对分子量约15 KD,经过纯化,得到了纯度较高的tBID蛋白。经过与金磁纳米微粒的偶联,成功构建出一种新型的分子探针Anti HER2-Gold Mag-tBID。该分子探针可与PC-3细胞特异性结合,且经Annexin V-FITC染色分析可见PC-3细胞发生明显凋亡,凋亡率达62.9%,与未处理组(3.79%)和对照组(4.33%)相比,具有显著的统计学差异。结论:PQE30-tBID重组表达载体能在大肠杆菌中高效表达,且成功得到了纯度较高的人促凋亡蛋白tBID。经金磁纳米微粒偶联,该蛋白能够与人HER2抗体重组成新型的分子探针,且能特异性地靶向前列腺癌PC-3细胞并显著促进其凋亡。     

从叶片表皮细胞结构讨论尾稃草属与臂形草属的分合问题

尾稃草属Urochloa Beauv.与臂形草属Brachiaria Griseb.的外部形态很相似,中外禾本科分类学者对这两属分合问题存在不同看法。为此取该两属的国产11种,67份材料作叶片表皮细胞结构的观察研究,共拍摄显微照片22张。 制片方法:参见南京中山植物园研究论文集,1980年版。 两属11种叶片表皮的微形态特征的共性是硅细胞为哑铃形、节结形或十字形,气孔辅卫细胞为圆屋顶形,显示本两属应隶属于黍亚科Panicoideae,黍族Paniceae,雀稗亚族Paspalinae之下。但其脉间细胞结构可分析归纳如下:     

广西野生蔗及其近缘植物营养器官内部结构的初步研究

广西野生蔗及其近缘植物营养器官内部结构基本相同。但割手密叶片下表皮具有明显的气孔窝斑茅等则无。斑茅茎节间的维管束分布较均匀,河八王茎中央没有维管束分布,割手密与蔗茅茎中维管束的分布。居于二者之间。     

三角帆蚌外套膜细胞的超微结构

用透射电镜观察了三角帆蚌(Hyriopsis cumingii Lea)外套膜细胞的超徽结构。外套膜内表皮细胞中,有具纤毛的柱状细胞,顶端具小分泌泡的杯状细胞,胞质中含大分泌泡以及线粒体聚集成群的柱状细胞四类。各类表皮细胞的细胞质电子密度和内含物均有差异。细胞核呈椭圆或棒形。线粒体和高尔基体多分布在细胞核上方细胞的游离端。各类细胞游离表面都密生微绒毛,其中内表皮的柱状细胞还着生有纤毛,但无分泌泡。其余几种表皮细胞在细胞顶部都具有大小不等,电子密度不同的分泌泡。在外表皮中只观察到一般的柱状表皮细胞和胞质中具有成群线粒体的细胞两类。另外,外表皮细胞中具有较多的溶酶体。从三角帆蚌外套膜表皮细胞超微结构来看,内、外表皮都具有分泌和吸收机能。内表皮的纤毛柱状细胞有运动功能,而外表皮细胞有较强的消化吸收功能。