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161.
采用PCR方法改变了表达构建物pRL-rhTNF中的结构,即去掉rhTNFα cDNA 3’端非翻译区序列110bp(命名为pRL—rhTNα2),转人大肠杆菌后,观察数个阳性转化子的表达情况,并与原型pRL—rhTNFα的表达进行比较。结果表明,去掉3’端非翻译区的pRL—rhTNFα能稳定表达rhTNFα,其发酵及纯化产品的生物学特征均等同于原型的,且其表达量比原型的有提高.提示3'端非翻译区序列对表达有影响。3'端非翻译区内存在一个相似于 TA的重复序列——TTTA TTA七聚体。这可能是本研究中影响TNFα表达量的原因之一。 相似文献
162.
蛋白质翻译过程中,翻译的起始步骤是非常重要的.真核生物的翻译起始主要是通过依赖帽子结构的扫描机制进行的.近几年在翻译的研究工作中发现,在一些动物病毒中,蛋白质合成通过一种不同于扫描机制的内部起始机制起始翻译.用内部起始机制翻译的mRNA的5′端非翻译区有一个相对保守的结构,它在内部起始过程中具有重要作用,一些特异的蛋白质因子能够促进在特定位点起始翻译. 相似文献
163.
用针对引导序列的5′-引物和针对恒定区的3′-引物,常规PCR程序只使所选5株单抗10个可变区cDNA中的4个得到放大.新设计的程序增设了一个反应时相:94℃ 1 min,37℃ 6-8min,循环1-3次,只加入5′-引物,补充3′-引物后,转入常规PCR循环,10个可变区cDNA均获放大.此程序被命名为“单引物预掺入PCR”. 相似文献
164.
作者将获得的抗3株金属螯合四肽单克隆抗体的轻,重链可变区基因,通过linker连接成单链基因,并在其后插入编码CGRP的N端前十三肽的39bp基因片段,组成Lv-linker-Hv-CGRP,将该基因克隆入分泌表达载体pTC01中,获得实物。 相似文献
165.
人粒-巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)是一种重要的造血生长因子.利用基因重组技术构建两个hGM-CSF的E.coli表达菌株,一个为在不改变氨基酸顺序的前提下,对mRNA翻译起始区核苷酸顺序进行优化突变(hGM-CSF(M)),另一个为未突变的对照(hGM-CSF(N)).经酶切电泳、DNA测序、SDS-PAGE和Westernblot等分析鉴定,证明两者均能表达特异性的14.6kDhGM-CSF,但hGM-CSF(M)的表达水平较hGM-CSF(N)提高了1.26倍,占菌体总蛋白的16.9%.mRNA翻译起始区二级结构预测分析表明,优化突变后生成自由能ΔG从原来的-10.2提高至-9.4Kcal,AUG从部分配对状态变为非配对状态. 相似文献
166.
mRNA翻译起始区的结构改变对几个外源基因翻译的影响 总被引:4,自引:0,他引:4
为观察mRNA翻译起始区结构与基因表达的关系,利用密码子的简并性,在不改变表达产物氨基酸序列的前提下定点突变几个外源基因的5′端若干位点,使基佤表达载体重组后转录形成的mRNA翻译起始区结构发生改变。经SDS-PAGE等分析证实这些改变大大提高了外源基因的表达水平,RNAdotblot表明突变与非突变基因转录水平差别不大,表达水平的提高主要由于翻译效率的提高,mRNA翻译起始区二级结构预测提示其生 相似文献
167.
以分泌小鼠抗人纤维蛋白降解产物D-双聚体单克隆抗体杂交瘤细胞株的mRNA为模板,用小鼠免疫球蛋白轻链可变区基因的通用引物,通过RT-PCR扩增基因,与载体重组后,经酶切鉴定和核苷酸序列分析,证明克隆含抗D-双聚体单抗的轻链可变区基因,长度为330 bp. 相似文献
168.
大鼠肝再生过程中肝再生刺激物及其mRNA的动态变化 总被引:5,自引:0,他引:5
本实验先制备大鼠肝再生模型,在该模型中大鼠成活率达95%以上,肝再生情况良好,适合于进行下一步的研究。随后,通过耐热性和肝细胞特异性的检测,初步认为从该模型中所提取的活性成分即为肝再生刺激物(HSS)。用3H胸腺嘧啶核苷测定HSS及其mRNA体外翻译产物的生物活性,结果表明二者在肝再生过程中均存在动态变化,但前者在肝部分(2/3)切除后72h活性最高,后者则在24h达高峰。这一结果为后续的分子克隆工作奠定了基础。 相似文献
169.
热休克反应中蛋白质合成抑制的机制 总被引:3,自引:0,他引:3
热休克反应中蛋白质合成抑制的机制郭兴中徐仁宝(第二军医大学病理生理学教研室,上海200433)关键词热休克反应翻译剪接生物体在不利环境如热休克等各种应激情况下,细胞内分子水平的反应主要是热休克蛋白基因的大量、快速、短暂地表达,因而产生大量热休克蛋白(... 相似文献
170.
即使职业完全与科学不沾边的中国人,大多也听说过中国引以为傲的胰岛素研究。但如果不在晶体学或者相关领域内,知道多萝西、霍奇金这个名字的人就不多了,包括身为科学记者、自以为对科学人物颇有了解的我自己。上海科技教育出版社的总编潘涛最初向我提议翻译多萝西传记的时候,我茫然地说不曾听说过这个人。等到对她的生平略有了解,并知道了她与中国胰岛素研究的联系后,茫然就变成了诧异。 相似文献