蛋白质剪切及其应用

蛋白质剪切是一种翻译后修饰事件 ,它将插入前体蛋白的中间的蛋白质肽段 (Intein ,internalproteinfrag ment)剪切出来 ,并用正常肽键将两侧蛋白质多肽链 (Extein ,flankingproteinfragments)连接起来。在此过程中不需要辅酶或辅助因子的作用 ,仅需四步分子内反应。Intein及其侧翼序列可以通过突变产生高度特异性的自我切割用于蛋白质纯化、蛋白质连接和蛋白质环化反应 ,在蛋白质工程方面有广泛的应用前景。     

杆状病毒AcMNPV p48基因在昆虫细胞中的表达

【目的】p48(ac103)基因在昆虫杆状病毒中高度保守,暗示其具有重要的生物学功能。为了研究该基因的功能,我们首先对该基因的表达特征进行描述。【方法】以杆状病毒代表种——苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)的p48基因为研究对象,利用Bac-to-Bac杆状病毒表达载体系统分别构建了在P48蛋白N-端和C-端融合HA-标签,并且携带绿色荧光蛋白基因和多角体蛋白基因的重组Bacmid。将重组Bacmid转染Sf9细胞,收集含病毒的上清去感染Sf9细胞,在感染后不同时间点收集细胞进行SDS-PAGE电泳,利用商业化的HA抗体进行Western blot分析以检测融合蛋白在昆虫细胞中的表达情况。【结果】用C-端融合HA-标签的重组病毒感染细胞后12h即可检测到一条43kDa左右、能与HA抗体发生特异性结合的蛋白条带,该特异性蛋白的表达一直持续到病毒感染后96h。从感染后48h起一直到96h,均能检测到另外一条约26kDa的蛋白条带也能与HA抗体发生特异性结合。在N-端融合HA-标签的重组病毒感染的细胞中没有检测到与HA抗体特异结合的蛋白。【结论】结果表明,p48基因是个晚期基因,在病毒感染的晚期表达,并且该蛋白在昆虫细胞中表达时N-端可能被剪切。     

《分子细胞》：多聚嘧啶串结合蛋白研究进展

来自武汉大学生命科学学院,加州大学圣地亚哥分校的研究人员采用CLIP—seq技术。在基因组水平认识了可变剪接调控蛋白PTB（多聚嘧啶串结合蛋白）结合靶标pre—mRNA的特征,揭示出该蛋白通过结合在pre-mRNA的不同位置而对可变外显子的剪接实行正负双向调控的机制,从而打破了已写入教科书的、认为PTB是可变剪接抑制蛋白的传统观念。这一研究成果公布在《分子细胞》（Molecular Cell）封面上。     

抗人前列腺干细胞抗原单克隆抗体可变区基因的5＇RACE扩增及序列分析

目的：克隆并分析抗人前列腺干细胞抗原单克隆抗体轻链和重链的可变区基因。方法：从分泌抗人前列腺干细胞抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株中提取总RNA,根据小鼠IgG恒定区序列设计特异性引物,通过5’RACE法扩增其轻链和重链的可变区基因,克隆入pMD18-T载体,测序并分析其可变区序列。结果：3株抗人前列腺干细胞抗原单克隆抗体的重链可变区基因序列全长均为423bp,编码141个氨基酸残基;轻链可变区基因序列全长均为393bp,编码131个氨基酸残基;在GenBank中对氨基酸序列进行比对分析,均符合小鼠IgG可变区基因的特征;根据Kabat法则对3株抗体轻链和重链可变区氨基酸序列进行分析,确定了3个抗原互补决定区、4个框架区和前导肽。结论：通过5＇RACE法得到了3株抗人前列腺干细胞抗原单克隆抗体轻链与重链可变区基因,为进一步研究抗体三维结构、人源化改造奠定了基础。     

可变剪接调控植物开花的作用机制进展

开花是植物生长发育的关键转折,与种子生产和作物产量密切相关。开花转变受到复杂的基因网络调控,许多开花相关基因通过可变剪接产生多种转录本,调控开花时间。文中从多个角度系统地综述了可变剪接调控植物开花的分子机制,并对将来的研究进行了展望。     

超声剪切波弹性成像联合血清脂联素、尿激酶型纤溶酶原激活物对甲状腺结节良恶性的鉴别价值

摘要 目的：探讨超声剪切波弹性成像（SWE）联合血清脂联素（AFN）、尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）鉴别甲状腺结节良恶性的价值。方法：选择2020年1月至2022年12月我院收治的行甲状腺外科切除手术治疗的127例甲状腺结节患者,所有患者术前接受SWE检查,检测血清AFN、uPA水平,记录术后病理结果,并根据术后病理结果将患者分为恶性组和良性组。分析SWE参数联合血清AFN、uPA鉴别甲状腺结节良恶性的价值。结果：经术后病理检查证实,恶性结节21例（恶性组）,良性结节106例（良性组）。恶性组弹性模量最大值（Max）、弹性模量最小值（Min）、弹性模量平均值（Mean）,血清uPA水平高于良性组（P＜0.05）,血清AFN水平低于良性组（P＜0.05）。Max、Mean、Min、AFN、uPA鉴别甲状腺结节良恶性的曲线下面积分别为0.609、0.754、0.600、0.777、0.701,联合Max、Mean、Min、AFN、uPA鉴别甲状腺结节良恶性的曲线下面积为0.935,高于各指标单独鉴别。结论：恶性甲状腺结节患者SWE参数Max、Mean、Min和血清uPA水平增加,AFN水平降低,联合SWE参数和血清AFN、uPA可提高对甲状腺结节性质的鉴别效能。     

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乳腺良恶性病变剪切波弹性成像的典型表现及其鉴别诊断价值

目的:观察乳腺良恶性病变的剪切波弹性成像(SWE)的典型表现,探讨SWE对乳腺良恶性病变的鉴别诊断价值。方法:选取2017年6月～2019年6月我院收治的162例行SWE检查的乳腺肿块患者,经组织活检或病理证实良性肿块105例(良性组)、恶性肿块57例(恶性组)。对比良、恶性组SWE的典型表现、SWE参数[最大值(Emax)、最小值(Emin)、平均值(Emean)、标准差(SD)、病灶与邻近脂肪弹性比值(SWE-Ratio)]的差异,分析SWE鉴别诊断乳腺良恶性病变的价值。结果:恶性组乳腺肿块"硬边征"检出率、Ⅲ型～Ⅴ型弹性图像检出率、Emax、Emean、SD、SWE-Ratio均高于良性组(P0.05),Emin低于良性组(P0.05)。Logistic多元回归分析结果显示,"硬边征"、Emax、Emean、SWE-Ratio与病理诊断乳腺肿块性质独立相关(P0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线分析结果显示,"硬边征"、Emax、Emean、SWE-Ratio鉴别诊断乳腺良恶性病变的曲线下面积(AUC)分别为0.923、0.686、0.873、0.879。结论:SWE是诊断乳腺良恶性病变的有效影像手段,SWE的"硬边征"、SWE-Ratio、Emean对乳腺良恶性病变具有较高的鉴别价值。