锤头状核酶对转化生长因子β1 RNA的体外剪切作用

为研究转化生长因子β1（TGFβ1）在造血调控中的关键作用, 构建针对抗转化生长因子β1的锤头状核酶, 并对它的体外剪切活性进行探讨. TGFβ1 cDNA部分基因片段其克隆入T载体中, ３２Ｐ标记TGFβ1体外转录物, 变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化获得靶RNA.计算机设计抗TGFβ1的锤头状核酶, 并把合成的核酶基因片段克隆入pGEM-9Zf(-)中T7启动子的下游, 凝胶电泳纯化回收３２Ｐ标记核酶的体外转录物.在不同条件下进行核酶的剪切反应, 变性PAGE, 放射自显影.活性的Rz445在37℃时具有良好活性, Km为29.55 nmol/L, Kcat为0.1533 min－1, 突变型核酶Rz445m没有剪切活性.制备的Rz445在体外具有良好的特异催化剪切活性, 并有望胞内抑制TGFβ1表达, 从而在干细胞移植中应用.     

一个新的RNF6剪切子spg2的克隆和鉴定

环指蛋白是一类含有环指基序的锌指蛋白,它们主要作为毋泛素连接酶,与成泛素结合酶相结合,促进靶蛋白的降解．应用cDNAarray技术,通过对成人和胚胎睾丸进行基因表达谱分析,获得一在成人睾丸中高表达,胚胎睾丸中低表达的环指结构基因RNF6的不同剪切子spg2．它的全长cDNA的可读框为2055个碱基,编码685个氨基酸残基,其羧基端含有一环指结构．NCBIBLAST显示该基因定位于人13号染色体,含有5个外显子．多组织mRNA表达水平研究显示,它在成人睾丸中高表达,胚胎睾丸中低表达．本研究推测spg2可能通过它的环指结构参与人类睾丸的发育．     

真核基因可变剪接研究现状与展望

mRNA前体(pre-mRNA)的可变剪接是控制基因表达和产生蛋白质多样性的重要机制,是功能基因组时代的研究重点之一。生物信息学在识别可变剪接基因及其结构、分析可变剪接的功能和调控方式等方面具有重要作用。除了耗时的实验研究,识别可变剪接基因及其结构主要通过EST、mRNA等转录数据与基因组序列进行比对,获得同一基因的不同结构方式。分析蛋白质产物可对可变剪接的功能进行预测;潜在调控元件的统计分析则可为可变剪接调控机制的研究提供必要的数据。转录数据的时空信息以及比较基因组学对理解可变剪接信息的精确调控将提供重要资料。可变剪接及其调控机制的深入研究将为基因组和蛋白质组之间的对接提供重要的桥梁。     

LncRNA的结构、功能及其与疾病的关系

70%的人类基因组能够被转录,而其中仅有1%～2%的转录本能够编码蛋白,余下98%均为非编码RNA（non-coding RNA,ncRNA）.在ncRNA中,长度大于200核苷酸称为长链非编码RNA（long non-coding RNA,LncRNA）,占全部ncRNA的80%～90%．LncRNA除了数量庞大以外,还具有表达量较低、物种间保守性较差及细胞表达特异性等特点,使LncRNA结构及作用机制等研究充满挑战．目前关于LncRNA的研究主要集中于功能方面．LncRNA能够广泛参与生物体的各种生理及病理过程,如表观遗传学调控、癌症、神经系统功能等．LncRNA作用机制众多,能够以分子诱饵、分子向导、分子支架及信号通路的调节剂等多种角色参与调节机体各种生物学过程．解析LncRNA的分子结构、深入研究其在生物体生理及病理过程中所发挥的作用,并揭示其作用机制,不仅能够加深对生物体生理及病理过程的认识,同时也能给某些疾病的诊断、防治提供新的思路及解决途径．本文综述了近年来有关LncRNA结构、功能及作用机制相关研究进展,以期为后续LncRNA相关研究提供参考.     

三种树脂粘接剂对纯氧化铝粘接强度的影响

目的:测定试件经过喷砂、硅溶胶热处理及与硅烷偶联剂结合的表面处理后,三种树脂粘接剂与纯氧化铝贴面的剪切强度。方法:选取高纯度的α-Al_2O_3纯氧化铝试件30个,将其随机分为A(可乐丽菲露SACTM复合树脂粘接剂)、B(Vorilink N树脂粘接剂)、C(RelyXTM Unicem树脂粘接剂)三组,每组10个。与试件粘接,在恒温水浴37℃的环境下静置24 h后测试其剪切粘接强度。扫描电子显微镜下观察各试件粘接界面的破坏形式。结果:Vorilink N粘接强度为(18.37±2.11)、RelyXTM Unicem粘接强度为(9.98±1.22),SACTM树脂粘接材料粘接强度最好,为(25.91±2.97),显著高于Vorilink N树脂粘接剂和RelyXTM Unicem树脂粘接剂,差异具有统计学意义(P0.05)。A组全部为混合破坏,B组出现了粘接剂的内部破坏,C组既有混合破坏也有界面破坏和粘接剂的内部破坏。扫描电镜图显示A、B两组的粘接断面上有很多树脂残留,C组表面相对光滑树脂残留很少。结论:不同树脂粘接剂对纯氧化铝试件的粘接强度有影响,SACTM粘接剂的粘接效果最好。     

甲型H1N1流感病毒血凝素单克隆抗体轻链和重链可变区基因的巢式PCR扩增及序列分析

目的：采用巢式PCR对甲型H1N1流感病毒血凝素单克隆抗体的轻链和重链基因进行扩增,对获得的基因进行序列分析,并找出克隆鼠Igκ轻链和重链可变区基因的通用方法。方法：设计22对扩增鼠Igκ轻链可变区和重链可变区基因的引物,对6株鼠抗人甲型H1N1流感病毒血凝素单克隆抗体的轻链和重链可变区基因进行克隆并测序,与NCBI公布的鼠免疫球蛋白序列比对分析。结果：巢式PCR方法可以有效避免单克隆抗体克隆过程的假基因,并且得到的单克隆抗体的氨基酸序列均符合鼠免疫球蛋白可变区特征。结论：建立了克隆鼠免疫球蛋白轻链和重链可变区基因的通用方法,为后期克隆鼠源性单克隆抗体的可变区基因提供了基础,并为研究甲型H1N1流感病毒血凝素与抗体的结合位点提供了实验数据。     

Intein介导的重组昆虫毒素BmK IT在大肠杆菌中的可溶性表达、纯化及活性分析

为获得重组蝎昆虫毒素BmK IT,通过PCR方法在BmK IT基因的3′端融合了编码6个组氨酸残基的核苷酸序列,将其插入原核表达载体pTWIN1的内含肽 Ssp DnaB Intein基因下游的多克隆位点（MCS）。将获得的表达质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）中,用IPTG诱导融合蛋白表达。用Ni-NTA亲和层析柱从菌体裂解液中纯化了CBD-Intein-BmK IT^his6融合蛋白,并在柱上诱导Intein自剪切,成功去除融合子CBD-Intein。通过Superdex 75凝胶过滤层析获得了纯度达95%以上的BmK IT^his6蛋白,该蛋白不仅具有正确的二级结构而且有生物活性。     

剪切波弹性成像在乳腺实性病变良恶性鉴别中的诊断价值

目的:探讨剪切波弹性成像在乳腺实性病变良恶性鉴别中的诊断价值。方法:收集2012年3月-2013年6月于我院收治的乳腺实性病变患者54例,共65个病灶,先后给予乳腺二维超声检查与剪切波弹性成像检查,采用弹性模量值与钼靶BI-RADS分级方法诊断,比较两种方法诊断的准确性。结果:良性病灶组弹性最小、最大值以及平均值、标准差与恶性病灶组比较差异具有统计学意义(P0.05);ROC曲线分析显示,在乳腺实性病变良恶性的鉴别中,弹性最大值明显优于平弹性均值;剪切波弹性成像对乳腺实性病变良恶性鉴别的敏感度、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值高于二维超声技术(P0.05)。结论:剪切波弹性成像在乳腺实性病变良恶性鉴别中具有良好的诊断价值,能够提高诊断的准确性。