虹鳟生长激素cDNA在酵母中的表达

采用聚合酶链式反应（ Ｐ Ｃ Ｒ） 技术对虹鳟生长激素ｃ Ｄ Ｎ Ａ 进行改造。将改造后的基因克隆到含酵母 Ｐ Ｇ Ｋ 启动子的大肠杆菌酵母穿梭质粒ｐ Ｍ Ａ９１ ,转化酿酒酵母 Ｙ３３ ,构建表达鱼生长激素的酵母工程菌 Ｙ３３（ｐ Ｍ Ａｒ Ｇ Ｈ１６） ,并在酵母中获得表达,表达量约占细胞可溶性蛋白总量的３ ％ 。表达产物作为饲料添加剂投喂罗非鱼,具有明显的促进生长作用     

幽门螺杆菌HspA融合蛋白口服疫苗的构建

构建表达幽门螺杆菌的保护性抗原分热休克蛋白A亚单位(HspA）和霍乱毒素B亚单位（CtxB）的重组融合蛋白的生物工程菌株,以此制备幽门螺杆菌的口服疫苗。用PCR方法扩增hspA和ctxB两个目的的基因片段,将它们分别克隆至pSK（＋）质粒上,然后插入含T7启动子ET－22b（＋）的表达载体中,构建嗓基因的表达质量pET－hct,转化E.coliBL21(DE3）,经IPTG诱导表达融合蛋白HCT。经测序,hspA-ctxB(hct)融合基因片段由726bp组成,可以编码242个氨基酸残基的多肽。经SDS－PAGE和免疫印迹分析检测发现,融合基因表达的蛋白质相对分子质量约为30kD。融合蛋白经镍离子柱纯化、复性后,和HspA共同标记同位素^125I,然后给小鼠灌胃,结果观察到HCT组小鼠血清中的^125I的放射量要明显高于HspA组（P＜0．001）,且吸收峰值时间明显提前。融合蛋白中的CtxB可明显促进小鼠对HspA的吸收,HCT融合蛋白可以作为预防和治疗幽门螺杆菌感染的侯选口服疫苗。     

2型糖尿病药物治疗进展

随着社会经济的发展和人民生活水平的提高,糖尿病患病率日渐增高,我国目前糖尿病总人数超过4000万。糖尿病患者处于临床糖尿病诊断前期可长达12年,事实上大部分患者是出现糖尿病急性或慢性并发症后才得到诊断和治疗。     

幽门螺杆菌重组vacA-CtxB蛋白的原核表达及免疫学研究

目的原核表达幽门螺杆菌pQE-vctB(含H.pylori细胞空泡毒素毒性片段与霍乱毒素B亚单位的融合基因)在E.coil DH5α中诱导表达,以获得重组蛋白,鉴定其抗原性和免疫原性,为制备防治H.pylori感染的口服疫苗奠定基础。方法 (1)pQE-vctB转化E.coli DH5α,IPTG诱导表达重组蛋白VCTB,Western blot分析抗原性,镍离子柱纯化。(2)重组蛋白VCTB口服免疫小鼠,ELISA检测小鼠血清特异性IgG、小肠冲洗液IgA,以鉴定其免疫原性。结果重组蛋白VCTB经SDS-PAGE分析相对分子量(Mr)约为40kD,亲和层析后可获得纯度为92%以上的蛋白。Western blot分析显示能与VacA抗血清反应。ELISA检测显示,免疫小鼠的血清特异性抗体IgG,肠粘液IgA显著高于VacA对照组(P0.01)。结论 vacA和ctxB融合基因原核表达质粒转化E.coli DH5α表达菌获得了重组蛋白VCTB,表达量较高,纯度较高,有良好的抗原性和免疫原性,口服免疫小鼠可明显提高其免疫效果,产生较高水平的IgA,可用于制备防治H.pylori感染的口服疫苗。     

利用转基因植物生产乙肝口服疫苗

乙型肝炎危害全球大部分地区,由于没有切实可行的治疗方法,因此,控制和预防乙直炎便极其重要。转植物可表达外源乙肝表面抗原蛋白并保持自然状态的免疫一,产生的疫苗不需纯化就可供口服使用,所以,本文提出,利用转基因的生产廉价疫苗系统有巨大的前景,可代替微生物疫苗生产系统。     

口服sST2质粒DNA在炎症性肠病小鼠中的免疫水平

目的制备口服可溶性ST2(Soluble ST2,sST2)质粒,观察其对于小鼠炎症性结肠黏膜免疫应答水平。方法提取小鼠脾脏总RNA,扩增sST2基因,并克隆至pcDNA3.1/myc-His A载体,构建pcDNA3.1-sST2-myc-His A质粒,借此转染COS-7细胞,使之表达sST2-myc-His A融合蛋白。利用脂质体LipofectamineTM2000包裹,制备口服sST2质粒,经灌胃给予用葡聚糖硫酸钠(Dextran sulfate sodium,DSS)诱生溃疡性结肠炎的C57BL/6实验小鼠,并用组织病理学方法观察结肠黏膜组织形态变化。用Real-time PCR检测sST2基因表达,用免疫印迹检测sST2质粒融合蛋白的表达;用ELISA检测小鼠肠固有层淋巴细胞培养上清中细胞因子(IL-4、IL-5和IL-13)的分泌水平。结果Real-time PCR检测到sST2基因的正确表达,经双酶切及测序鉴定,证明质粒pcDNA3.1-sST2-myc-His A构建成功,免疫印迹试验在转染的COS-7细胞检测到sST2-myc-His A融合蛋白的表达,其相对分子质量与预期的相符;观察到结肠黏膜组织形态发生的变化;Real-time PCR结果显示,sST2质粒组在结肠黏膜组织内sST2的表达水平明显高于pcDNA3.1组和生理盐水组(P0.01);ELISA结果显示sST2质粒组结肠固有层淋巴细胞培养上清中IL-4、IL-5和IL-13的分泌水平高于pcDNA3.1组和生理盐水组(P0.05)。结论实验成功制备口服sST2质粒;该质粒可抑制小鼠炎症性结肠黏膜组织内Th2型免疫应答。     

用于口服活菌苗的伤寒沙门氏突变菌株的体外特性

<正>通常所用的非胃肠的伤寒死菌苗,已证明具有明显的保护作用,但常有严重的不良反应。因此,发展新的低反应原性的菌苗,特别是口服活菌苗已有一段时间的进展。几株减毒的伤寒沙门氏菌株已被作为口服活菌苗的候选者。GalE Ty21a用于自愿者和在现场试验中,没有出现任何不良反应,且显示了中等水平的保护。营养缺陷型突变株541Ty和543Ty,用于自愿者亦无不良反应,且可诱导体液抗体反应和介导细胞免疫。通过EX462的免疫原性突反株GalE保留了对人体的毒性。     

口服补液盐治疗儿童急性腹泻轻中度脱水的疗效研究

目的:观察口服补液盐治疗儿童急性腹泻轻中度脱水的临床疗效。方法:选取我院儿科收治的63例急性腹泻伴轻中度脱水症状患儿,采取随机数表法分为两组,其中对照组32例患儿予标准口服补液盐,而治疗组31例患儿予补液盐溶液。对比治疗前后两组患儿血浆内Na+、K+、Cl-离子水平,临床症状恢复时间及改善情况。结果:治疗后,两组患儿的电解质水平均有所改善,治疗组患儿Na+、K+及Cl-水平均优于对照组,差异有统计学意义(P0.05);治疗组患儿口渴、头晕、乏力及腹痛症状的恢复时间均较对照组明显缩短,差异有统计学意义(P0.05)。治疗组临床总有效率明显优于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:口服补液盐能明显改善儿童急性腹泻而致的轻中度脱水症状,减少静脉输液对患儿造成的负面影响,值得在临床上进行推广。