谷氨酸棒杆菌SYPS-062 L-丝氨酸脱水酶活性分析及其基因敲除对L-丝氨酸积累的影响

以谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum) SYPS-062基因组DNA为模板,扩增得到L-丝氨酸脱水酶(L-SerDH)的编码基因sdaA。将其克隆到表达载体pET-28a(+),并在E.coli BL21(DE3)中诱导表达,对纯化的L-SerDH进行了酶活测定,并与来自C.glutamicum ATCC13032的重组L-SerDH进行了比较,结果显示,两种不同菌株来源的重组L-SerDH降解L-丝氨酸的酶比活力差异并不显著。在此基础上敲除菌株SYPS-062 的sdaA基因,探讨该基因对C.glutamicum SYPS-062生长及产酸的影响。通过构建自杀型重组质粒pK18mobsacB-△sdaA,电击转入C.glutamicum SYPS-062中,以同源重组的方式获得了sdaA基因缺失突变株,并用PCR方法对突变株C.glutamicum SYPS-062△sdaA进行了验证。与出发菌株相比,突变菌株生长缓慢,单位菌体L-丝氨酸的产量(Y_P/X)提高了15.13%。     

保加利亚乳杆菌微胶囊化工艺研究

目的制备保加利亚乳杆菌微胶囊,提高菌株的酸、热耐受性及降低菌体的分离成本。方法以保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)为研究对象,海藻酸钠(SA)为壳材、CaCl2为固化剂,制备保加利亚乳杆菌微胶囊;包埋率、颗粒平均化程度、机械强度等为考核指标,研究保加利亚乳杆菌微胶囊化的工艺。结果当海藻酸钠浓度为0.75%、CaCl2浓度为3%、电压为600V、泵速为1.96mL/min、震动频率为80Hz时,微胶囊化包埋效果最佳,经固定化后的菌微胶囊保持了良好的保加利亚乳杆菌的活性,微囊化保加利亚乳杆菌经过2次连续发酵后的产酸量分别达到59.4g/L和55.8g/L。结论本研究为工业化生产乳酸提供了一条具有经济价值的途径。     

耐氧双歧杆菌及其B-CW对荷瘤鼠TNF-α的体内诱导

本文采用放射免疫方法（ＲＩＡ）,检测荷Ｓ１８０肿瘤小鼠外周血中ＴＮＦ－α的含量,观察双歧杆菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）及其细菌壁（ＣｅｌＷａｌｓｏｆＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ,Ｂ－ＣＷ）的免疫调节作用,探讨其抗肿瘤机制。结果表明该菌及其Ｂ－ＣＷ均可明显地促进机体产生ＴＮＦ－α,发挥抗肿瘤作用     

母牛分支杆菌菌苗治疗糖尿病合并初治肺结核的临床分析

目的 探讨母牛分支杆菌菌苗（简称微卡）治疗糖尿病合并肺结核的疗效。方法 同期选取40例糖尿病合并肺结核初治患者,随机分为A、B组。A组以常规抗痨治疗（2HRZE／4HR）,B组在常规抗痨治疗的基础上加用微卡治疗2月。结果 B组结核病灶消散吸收、空洞完全或部分闭合、痰结核菌阴转速度均明显快于A组（P〈0．05）,且不良反应少见。结论 微卡可用作糖尿病合并肺结核的免疫治疗。     

利用农杆菌介导的瞬时表达系统研究CYC类TCP蛋白的亚细胞定位

CYCLOIDEA（CYC）类TCP基因在豆科与玄参科植物中都参与了两侧对称花型的发育,但它们的具体功能有明显的差异。通过在豌豆花瓣中建立农杆菌EHA105介导的瞬时表达系统,观察到豆科植物百脉根和玄参科植物金鱼草的CYC类TCP蛋白亚细胞定位有明显区别。     

双歧杆菌的多功能

曾有研究发现广西巴马县长寿老人肠道内双歧杆菌（Bifidobacterium sp．）数量高于一般人,说明双歧杆菌对人体健康具有奇妙的功效。日本研究人员发现每天摄人大量双歧杆菌有助于预防流感,并对27名65岁以上老人进行了研究,最初6周让每位老人每天服用含1000亿个双歧杆菌的粉末（注：相当于1L酸奶的双歧杆菌含量）,其间给他们接种了流感疫苗。从第7周开始,研究人员将27人分成两组,其中一组继续按照前6周的剂量服用双歧杆菌,另一组则服用安慰剂。最后,服用安慰剂的研究对象中有5人患上流感,而继续服用双歧杆菌的一组则无一人发病。血液检查结果显示,自始至终服用双歧杆菌的人体内白细胞数量多于另一组。结果表明双歧杆菌能提高老人的免疫力,即使疫苗作用减弱,也能降低他们受流感病毒侵扰的机率。     

工程菌P.pastoris GS115(pPIC9K-lac2)的构建及诱导表达漆酶的研究

用PCR法扩增枯草芽孢杆菌的漆酶基因lac2.构建表达质粒pPIC9K-lac2.通过电转法将lac2基因重组于P.pastoris基因组,筛选高G418抗性和高表达漆酶的转化子作为工程菌GS115(pPIC9K-lac2).在发酵罐中发酵GS115(pPIC9K-lac2)表达重组蛋白.在50 L发酵罐中加入20 L无机盐发酵培养基.在发酵的第一阶段连续24 h补加50％甘油-0.8％ PTM4增殖P.pastoris,然后用甲醇-0.8％ PTM4诱导49 h.在发酵过程中,通过调节搅拌的频率和通气量,将溶氧维持于20％ ～30％,用氨水维持pH 5.0.放罐时生物量为A600=266.5,表达漆酶1097.5U/L发酵液.     

单核增生性李氏杆菌溶血素的原核表达及其单克隆抗体的制备

为了深入研究单核增生性李氏杆菌(LM)致病机理,从其基因组中克隆李氏杆菌溶血素基因hly,并将其与原核表达载体连接在大肠杆菌BL21中表达携带His标签的李氏杆菌溶血素(LLO)融合蛋白,经镍柱纯化得到重组LLO蛋白作为免疫原并免疫小鼠。取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞(Sp2/0)进行融合,经过3次亚克隆后获得3株稳定分泌针对LLO蛋白单抗的杂交瘤细胞株,分别命名为Anti-LLO1、Anti-LLO2、Anti-LLO3;经ELISA测定其细胞培养上清效价分别为1:3.6×104、1:6.4×104、1:1.6×104,腹水效价分别为1:2×107、1:2×107、1:1×107;亲和力解离常数(Kd)分别为6.18×10-11、7.50×10-11、6.27×10-11;3株单抗的IgG亚类均为IgG1。经Westernblotting鉴定证明,该3株抗体均能特异地识别李氏杆菌LLO蛋白,该单抗的制备为深入研究LM的致病机理奠定了基础。     

水稻白叶枯病广谱抗性基因Xa21导入两用不育系培矮64S

以克隆的Xa21基因为外源基因,成熟胚愈伤组织为转化受体,应用农杆菌介导法对水稻两用型核不育系培矮64S进行转化,获46株转基因植株。PCR和Southern分析结果表明,Xa21已整合到受体基因组。用稻白叶枯病病原菌(Xanthomonasoryzaepv.oryzae)菲律宾小种6号接种鉴定,结果表明大多数转基因植株获得了抗病性。已整合的Xa21基因能够稳定地遗传,在所检测转基因株系的T1代中,Xa21基因显示3:1的分离。     

魔芋粉酶解产物与低聚果糖对双歧杆菌的促生长作用比较研究

由枯草芽胞杆菌以摩芋粉为底物经发酵培养获得的β-甘露聚糖酶酶活力达10U／ml,用该酶液水解魔芋粉制备含有低聚糖的魔芋粉酶解产物。在无碳源的GAM基础培养基中,添加不同量的魔芋粉酶解产物对双歧杆菌具有明显的促生长作用,其促生长作用与低聚果糖相当,均以2％的浓度增殖效果最明显,与不加低聚糖的对照组相比,活菌数可以提高几倍到十几倍。