应用TGGE技术分析人肠道中双歧杆菌的组成

用温度梯度凝胶电泳(TGGE)技术结合16SrDNA克隆、测序,对健康人肠道中双歧杆菌的组成进行了分析。10例健康人肠道双歧杆菌的TGGE分析显示:人肠道内双歧杆菌的组成具有宿主特异性,不同人肠道双歧杆菌种的多样性和种类不同。通过对一健康儿童肠道双歧杆菌属特异性PCR扩增产物的测序及TGGE电泳行为的分析发现,该个体双歧杆菌TGGE图谱中的条带分别代表Bifidobacteriumbifidum、B.infantis、B.longum、B.adolescentis、B.pseudocatenulatum等种和一新种,其中B.pseudocatenulatum(假小链双歧杆菌)是大多数个体共有且较优势的种类。用传统培养方法只检出B.pseudocatenulatum和B.longum两种。基于双歧杆菌属特异性PCR基础上的TGGE方法结合16SrDNA克隆文库分析可较灵敏、直观地反映人肠道中双歧杆菌的组成。     

LRRC4基因转染U251细胞的比较蛋白质组学分析

LRRC4是我室自主克隆的一个脑组织优势表达基因.前期研究结果表明,外源性LRRC4基因转染至U251细胞,可明显地抑制U251细胞的增殖、黏附、趋化和侵袭等生物学行为. 因此,LRRC4亦是一个脑胶质瘤抑制性基因.为了进一步了解LRRC4在胶质瘤发生发展中的调控作用,本研究采用荧光差异凝胶电泳（2D-DIGE）和质谱分析技术获得了LRRC4转染U251细胞的11个差异表达蛋白质,并用Western 印迹证实了U251细胞在转染LRRC4基因前后热休克蛋白27、stathmin 1和S100钙结合蛋白A11的差异表达变化. 这些差异蛋白质涉及细胞代谢、增殖、转录、信号转导等众多事件,表明LRRC4基因转染U251细胞后可能通过调控这些蛋白质的表达而参与细胞的增殖、黏附、趋化和侵袭等生物学过程.     

锰胁迫对商陆(Phytolacca acinosa)保护酶的影响

对室内栽培的商陆(Phytolacca acinosa)幼苗分别经4、12、36mmol/L的锰(Mn2 )溶液处理30d后,用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分离了根和叶片过氧化物酶(POD)同工酶和超氧化物歧化酶(SOD)同工酶,并测定了其酶活性.结果表明:(1)经不同浓度的Mn2 溶液处理,根POD同工酶(RP1)消失,而12、36mmoL/L Mn2 溶液处理根新的POD同工酶(RP5,RP8)出现,根POD酶活性出现先降低后升高的变化趋势;叶片POD同工酶(LP)有3种,与对照的相同,但其酶活性随Mn2 浓度增加而随之升高.(2)12、36mmol/L Mn2 溶液处理,根新的SOD同工酶(RS5-RS7)出现,SOD酶活性上升;36mmol/L Mn2 溶液处理,叶片SOD同工酶(LS2-LS5)消失,叶片SOD酶活性下降.推断,商陆根和叶片同工酶的表达调控的机制不同.认为,商陆在Mn2 胁迫中,POD发挥更重要的作用.     

辐射对大麦过氧化物酶同工酶谱影响的初步研究*

γ射线处理大麦种子后其幼苗组织中过氧化物酶同工酶谱发生较大的变化。在偏负极端RfO.29-0.38出现新的酶带区,酶带数目随辐射剂量的增加而增加。低剂量辐射后在该区出现1-2条新同工酶带,以RfO.29 和Rf0.34酶带为主;较高剂量辐射后在该区出现2-3条新酶带,Rf为0.29、0.34或Rf0.29、0.34、0.38。研究结果表明这一带区的过氧化物酶同工酶谱与辐射损伤有一定的关系,其变化特点能反映出供试品种的辐射敏感性。     

生态毒理基因组学和生态毒理蛋白质组学研究进展

将基因组学和蛋白质组学知识整合到生态毒理学中形成了生态毒理基因组学和生态毒理蛋白质组学.通过生态毒理基因组学和生态毒理蛋白质组学的研究能够在基因组和蛋白质组水平更深入理解毒物的作用机制,寻找更敏感、有效的生物标记物,形成潜在的强有力的生态风险评价工具.介绍了生态毒理基因组学和生态毒理蛋白质组学的研究进展,以及DNA芯片技术和2D-凝胶电泳技术在持久性有毒污染物的生态毒理学研究中的应用.     

应用终末荧光产物的发光效应检测聚丙烯酰胺凝胶上的β-内酰胺酶

本文利用β-内酰胺抗生素经β-内酰胺酶水解后,产生终末荧光产物具有发光效应的原理,首次建立了一种检测聚丙烯酰胺凝胶电泳或等电聚焦电泳后凝胶上β-内酰胺酶的方法。该法快速、简便、灵敏、经济,便于推广,实验证明这种方法可以代替传统的Nitrocefin染色法。     

蛋白质组研究新前沿：定量蛋白质组学

在过去几年里,蛋白质组研究取得了令人鼓舞的进展,2DE-MS途径的自动化,多维色谱整合串联质谱的使用,弥补了一些用双向凝胶电泳分离蛋白质的技术缺陷;从稳定同位素标记到ICAT战略的提出,为准确定量在细胞或组织中发挥重要调节功能的低丰度蛋白质提供了一个较为理想的方法。同时,蛋白质芯片技术的不断发展,也极大的丰富了定量蛋白质组学的研究。就定量蛋白质组学及其相关技术研究进展作一简要综述。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳的一种辅助辨型方法

聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)是实验室常用的基本鉴定方法之一.但由于做胶方式以及各实验室仪器设备良莠不齐,经过一系列纷繁复杂的操作,电泳结果未必尽如人意.其中凝胶带型的判断就是一个较为困惑的问题,一般的聚丙烯酰胺胶跑出的条带总体上都有弧度,越是靠近凝胶两侧越是严重.在本实验中,我们设计了一种较为简单易行的方案,即将难以区分的条带样品做成混合样marker来辅助辨型,通过调整电压和凝胶浓度来达到区分条带的目的.我们用该方案可以将相差0～3 bp大小的条带区分开来.     

利用蛋白酶产生菌固态发酵去除豆粕中抗原蛋白

从实验室保藏的菌种中,筛选出固态发酵所需的高产蛋白酶菌株,进行豆粕发酵。以抗源蛋白去除情况作为考察指标,通过条件优化发现,在豆粕水分质量分数为45%,颗粒直径在1.0-2.0 mm,发酵温度35℃,发酵时间为50 h时,抗原蛋白的去除率在90%以上。通过十二烷基磺酸钠（SDS）聚丙烯酰胺凝胶电泳,发现抗源蛋白得到有效降解,分解为相对分子质量小于10 000的肽类物质。     

乙草胺对农田土壤细菌多样性的影响

在实验室条件下 ,将农田土壤分别用终浓度为 1 0mg、5 0mg和 1 0 0mg g土壤的乙草胺处理 4 0d后 ,检测可培养的异养细菌的多样性和细菌物种多样性。可培养的异养细菌的多样性依据在LB平板上的菌落形态来研究 ,细菌物种多样性则通过基因组DNA的提取 ,纯化 ,1 6SrDNA片段的扩增和变性梯度凝胶电泳 (DGGE)的分离来研究 ,香农多样性指数 (H) ,丰度 (S)和均匀度 (EH)等指标用于评价细菌多样性。实验结果表明 ,与对照土壤相比 ,处理土壤中上述两种类型的细菌多样性均降低 ,而且 ,不同处理浓度对土壤细菌多样性的影响也不同。将DGGE图谱中的条带回收并测序 ,结果显示乙草胺对土壤中的Proteobacteria的α Proteobacteria和γ Proteobacteria影响明显 ,表明乙草胺会在一定程度上改变土壤细菌多样性