抗体类药物非聚糖翻译后修饰的LC-MS表征分析

抗体类药物往往存在复杂多样的翻译后修饰(post-translational modifications, PTMs),由此产生高度的异质性。PTMs表征是抗体类药物研发的重要组成部分。尤其在早期研发阶段,高质量的结构表征可以为药物筛选、药物发现、工艺开发和优化提供指引和依据。基于液相色谱-质谱联用(LC-MS)技术的表征分析手段可快速、准确地识别PTMs,已成为抗体类药物PTMs分析及结构表征的有力工具。该文综述了抗体类药物非聚糖PTMs的鉴定成果,内容包括修饰类型、修饰位点、修饰所在区域、表达系统信息及潜在影响,并对LC-MS表征分析策略进行了一定的探讨,希望为抗体类药物早期研发阶段的表征分析提供参考。综述的非聚糖PTMs均通过LC-MS或LC-MS/MS技术得到了鉴定。     

双针刺疗法在孕足月初产妇催产中的应用效果及对应激反应和内源性神经递质的影响

摘要 目的：研究双针刺疗法在孕足月初产妇催产中的应用效果及对应激反应和内源性神经递质的影响。方法：选取2020年3月~2022年5月期间我院妇产科收治的孕足月初产妇102例。根据随机数字表法分为对照组（51例）和研究组（51例）。产妇在临产宫口开至3 cm（T0）后,对照组不予以任何镇痛方法干预,研究组给予双针刺疗法干预。比较两组催产疗效、产程情况、宫颈成熟指标、应激反应和疼痛、内源性神经递质指标的变化情况。结果：研究组的临床总有效率高于对照组（P<0.05）。研究组的总产程、第一产程、第二产程、第三产程时间均短于对照组（P<0.05）。研究组的宫颈口扩张、宫颈管消退、先露位置、宫颈硬度、宫口位置大于对照组（P<0.05）。两组宫颈口开10 cm（T1）的血糖、皮质醇水平升高,但研究组低于对照组（P<0.05）。两组T1的视觉疼痛模拟（VAS）评分、P物质（SP）、β-内啡肽（β-EP）、神经肽Y（NPY）升高,但研究组低于对照组（P<0.05）。结论：孕足月初产妇采用双针刺疗法可提高催产疗效,促进宫颈成熟,缩短产程时间,同时还可减少内源性神经递质的释放,减轻产妇应激反应。     

过表达IDO骨髓间充质干细胞对腹腔异位移植心脏模型大鼠炎症反应、T细胞亚群和NF-κB/NLRP3通路的影响

摘要 目的：探讨过表达吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）骨髓间充质干细胞（BMSCs）对腹腔异位移植心脏模型大鼠炎症反应、T细胞亚群和核因子（NF）-κB/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）通路的影响。方法：慢病毒载体及基因开启技术构建过表达IDO大鼠BMSCs,建立60只大鼠腹腔异位移植心脏模型,造模成功后,随机分为4组,每组各15只。空白组建模后未给予任何处理,吗替麦考组喂养吗替麦考40 mg/kg,空白-BMSCs组在腹腔异位移植心脏术后3 d,经尾静脉注射空白-BMSCs,IDO组在腹腔异位移植心脏术后3 d,经尾静脉注射过表达IDO-BMSCs（每只400 μL,10⁶个细胞）。检测并对比四组心功能、血清心肌酶、炎症因子、T细胞亚群、心脏病理变化以及NF-κB/NLRP3通路相关蛋白表达情况。结果：IDO组射血分数差值、环比收缩（FS）差值大于空白组、吗替麦考组、空白-BMSCs组（P＜0.05）,血清肌钙蛋白I（cTnI）、肌酸激酶同工酶（CK）-MB、白细胞介素（IL）-1α、IL-1β、IL-2、γ干扰素（IFN-γ）、IL-18水平以及脾脏组织CD40、CD86、CD80、MHC II、CD45RA、CD45RA+CD45RB,心脏组织NF-κB、NLRP3、半胱氨酸蛋白酶-1（Caspase）-1表达低于空白组、吗替麦考组、空白-BMSCs组（P＜0.05）,血清IL-10、TGFβ1、TGFβ3水平以及脾脏组织CD274、Treg表达高于空白组、吗替麦考组、空白-BMSCs组（P＜0.05）。HE染色结果显示IDO组炎症细胞浸润较空白组、吗替麦考组、空白-BMSCs组明显减少。结论：过表达IDO-BMSCs可减轻免疫和炎症反应,改善移植心脏功能,可能与其抑制NF-κB/NLRP3信号通路的激活有关。     

蛋白质N端豆蔻酰化修饰的基因工程表达偶联加工系统

对酵母ＮＭＴ基因在大肠杆菌中表达进行较详细的研究,进而构建了复制子为ｐ１５Ａ并含卡那霉素抗性基因的相容性表达质粒ｐＫＺＭＴ,将其与表达质粒ｐＣＺｍＣα１共转化进大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）Ｆ′,进行双质粒表达偶联加工修饰研究,其中ｐＣＺｍＣα１表达底物蛋白小鼠ｃＡＭＰ依赖的蛋白激酶催化亚基α（ＰＫＡ-ｍＣα）。ＳＤＳＰＡＧＥ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析表明,双质粒表达系统中,ＰＫＡ-ｍＣα都得到了稳定的高表达,尤其在２３℃低温诱导表达时,表达产物的可溶性部分明显增多;而酵母ＮＭＴ被控制在有利于活性功能的可溶性低水平表达。［^３Ｈ］ｍｙｒｉｓｔｉｃａｃｉｄ标记测定及放射自显影的结果显示,在大肠杆菌中表达的重组ＰＫＡ-ｍＣα被豆蔻酰化修饰。     

双水相电泳分离蛋白质的研究

近几年来,随着生物技术的迅速发展,制备型电泳技术的研究得到了重视。然而由于技术上的原因,大规模的制备型电泳技术的研究还未能取得突破。阻碍电泳放大的一个主要问题是由于电加热作用而导致的热对流对电泳分离的破坏。为解决这一问题,人们提出了许多方法。例如,在太空的微重力环境下进行电泳,应力稳定自由流动电泳,循环等电聚焦和区带电泳,色谱电泳和等电膜等电聚焦等。这些方法在电泳放大上都取得了一定的进展,但各有其局限性。最近,Clark提出利用双水相的液液界面阻止热对流的设想,为开发大规模的制备型电泳技术开辟了一条新途径、Raghava Rao等在两种双水相体系上施加电场后成倍地缩短了分相时间。Levine和Bier采用U型管电泳装置研究了双水相体系中血红蛋白的电泳迁移率,观测到界面有阻滞作用。Clark在柱型电泳装置中进行了一组双水相萃取肌红蛋白的简单实验。在10mA的恒电流下电泳40min之后,肌红蛋白的分配系数为7.5,而当电场反向后,分配系数变为0.04,界面阻力并不显著,两者结论并不一致。     

抗体库的发展及未来

抗体库的出现为制备人源性单抗开辟了一条行之有效的途径．虽然该技术问世只有短短几年的时间,但其筛选系统已有了很大的改进;现已能够快速地从抗体库中筛选出各种具有不同用途的抗体．从而克服了传统杂交瘤技术的某些局限性．文章就抗体库的发展及其应用前景进行了概述.     

检测香蕉花叶心腐病病原CMV的PAS—ELISA方法的改进

作为一种快速、敏感的免疫学方法,ELISA已被广泛地用于植物病毒的研究与应用性检测方面。在实验室中用PAS-ELISA检测香蕉花叶心腐病病原CMV已被证明是一种获得无CMV组培苗的有效手段。在香蕉无病毒组培苗工厂化大批量生产中,我们应用此法作为质量控制的手段之一,剔除病苗,保证产品不带CMV,获得一定成效。但同时我们也发现,香蕉组织中含有引起非特异性吸附反应的物     

用单克隆抗体作芜菁花叶病毒不同分离物外壳蛋白抗原结构的比较研究

用芜菁花叶病毒辽宁分离物（ＴｕＭＶ－ＬＮ）,山东分离物（ＴｕＭＶ－ＳＤ）和榨菜分离物（ＴｕＭＶ－ＺＣ）作抗原,分别免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,经脾细胞与ＳＰ２／Ｏ－Ａｇ１４骨髓细胞融合,共获得７个单克隆抗体分泌细胞株,为研究３个分离物的抗原差异,用胰蛋白酶消化ＴｕＭＶ的外壳蛋白（ＣＰ）。分别形成４、２和１条降解带,经ＳＤＳ－１５％ＰＡＧＥ后,转移至硝酸纤维薄膜上,用３个分离物的抗血清和７种单隆抗体分别做     

人抗E．Coli J5噬菌体抗体制备的初步研究

以E．Coli J5株对合人Ig基因的噬菌体抗体库进行淘筛富集,免疫印迹筛选,以及ELISA检测,结果获得4株能与E．Coli J5株结合的阳性克隆,且阳性克隆结合抗原的活性可分别被E．Coli J5株、E．Coli Rc-LPS和抗E．Coli J5株核心糖脂域MAb抑制．PCR检测表明,4株阳性克隆均分别带有约660bp大小的重链和轻链基因片段．SDS－PAGE与蛋白质印迹的结果显示,经IPTG诱导的阳性克隆能表达分子量约为50000大小的蛋白,提示该4株阳性克隆能够表达具有一定抗原结合活性的人源Fab片段．