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61.
云芝发酵液经超声波细胞破碎,离心和大孔树脂脱色得上清液.上清液再经DEAE-52、Mono Q离子交换层析和UltroGel ACA-54凝胶过滤分离得到一种胃蛋白酶抑制剂.它的成分是蛋白质,经UltroGel ACA-54凝胶过滤和SDS-PAGE鉴定为单亚基,相对分子量为22.31 kDa.该抑制剂热稳定性良好,对胃酶有很强的抑制作用,半抑制浓度IC50值为29.26 μg/mL,抑制类型属于非竞争和反竞争混合型抑制模式,其Ki值为0.996 μmol/L. 相似文献
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63.
64.
一种pH稳定的黄色漆酶的快速纯化和性质特征 总被引:1,自引:0,他引:1
通过丙酮沉淀和 DEAE- cellulose DE52 柱层析, 快速、有效地从一株白腐菌 Trametes sp. SQ01 的发酵液中纯化了漆酶。纯化的漆酶并非传统漆酶那样呈现蓝色, 而是一种黄色蛋白。以 ABTS 为底物时, 该酶的最适 pH 和温度分别是 pH 4.5 和 70°C, Km 为 0.029 mmol/L。T. SQ01 漆酶在 pH 3.0~11.0时, 酶活相对稳定, 在 pH 5.0 时最为稳定, 是目前报道的 pH 稳定性最好的漆酶。低浓度的金属离子(1 mmol/L) Cu2+、Mg2+ 、Ca2+ 和Co2+ 对漆酶有促进作用, 而高浓度(5 mmol/L)的Co2+、Zn2+、 Mn2+、Mg2+ 却抑制漆酶酶活。SDS 对该酶有激活作用, 当其浓度为1 mmol/L时, 漆酶相对酶活达到128%。DTT对漆酶强烈抑制, 即使是浓度为1 mmol/L, 亦可完全抑制漆酶酶活。纯化后的漆酶对亮蓝(RBBR) (100 mg/L)的脱色能力显著, 0.5 U/mL 的漆酶在 10 min内即可达到 80%的脱色率。T. sp. SQ01 漆酶的快速纯化以及高效脱色的能力表明该酶在染料脱色降解方面有着广阔的应用前景。 相似文献
65.
膜荚黄芪种子中2种几丁质酶的分离纯化及活性测定 总被引:2,自引:0,他引:2
运用传统的层析技术对膜荚黄芪种子中两种几丁质酶进行分离纯化,并对分离纯化中各个步骤得到的蛋白进行了活性研究.结果表明:(1)粗提液的硫酸铵沉淀经再生几丁质亲和柱和凝胶过滤层析Sephadex G-75得到几丁质酶A.(2)粗提液的硫酸铵沉淀经离子交换色谱DE-52、CM、凝胶过滤层析Sephadex G-75得到几丁质酶B.(3)几丁质酶A、B的比活性分别为35.6 U/mg和4.1 U/mg.(4)从膜荚黄芪种子中分离纯化的几丁质酶A和B均为糖蛋白,含糖量分别为6.1%和5.8%.(5) SDS-PAGE显示,几丁质酶A、B的分子量分别为35.5 ku、39.6 ku;凝胶过滤层析测定几丁质酶A、B的分子量分别为36.9 ku、40.8 ku;表明几丁质酶A、B均为单亚基蛋白. 相似文献
66.
[目的]分离纯化(Lactobacillus paracasei)HD1.7所产生的细菌素并分析其特性.[方法]细菌素Paracin1.7的纯化采用色谱技术,其分子量检测采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),利用琼脂扩散法测定细菌素活力.[结果]Paracin 1.7分离于我国传统发酵食品酸菜发酵液中,其产生菌为副干酪乳杆菌.Paracin 1.7可以抑制其它微生物的生长,为细菌素.该菌在稳定期可产生大量Paracin 1.7.经过阳离子交换层析、凝胶过滤层析以及高效液相色谱(HPLC),对该细菌素进行了初步纯化,并经Tricine-SDS-PAGE检测其分子量大约为11 kDa.Paracin 1.7抑菌谱较广,其抑菌范围包括Proteus,Bacillus,Enterobacter,Staphylococcus,Escherichia,Lactobacillus,Microccus,Pseudomonas,Salmonella,Saccharomyces,其中有些为食品源致病菌.该细菌素在酸性及高温下稳定,对几种蛋白质酶敏感.该细菌素对敏感菌株的作用方式为抑菌.在4℃保存4个月后,Paraein 1.7的抑菌活性保持稳定.[结论]基于细菌素Paracin 1.7的性质,该细菌素可用作食品防腐剂. 相似文献
67.
人脑神经元特异性烯醇化酶的纯化方法 总被引:1,自引:0,他引:1
采用改良的Grace层析方法,经一次DEAE-Sephadex A50柱层析即从人脑中纯化了神经元特异性烯醇化酶,比活力为92.1U/mg,纯化倍数为59.4.该酶纯化后,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单一蛋白质谱带.此外,还测定了其部分理化性质,其亚单位分子量为45000,等电点pI为4.7,氨基酸组成分析表明其为一种酸性蛋白质;对2-磷酸甘油酸的Km值为5.6×10-4mol/L. 相似文献
68.
【目的】为进一步研究镰刀菌Q7-31T产生的植物细胞壁降解酶的酶系信息。【方法】以1%(W/V)蛋白胨为氮源,0.5%(W/V)燕麦秸秆为碳源,20°C、120 r/min振荡培养3 d,诱导发酵培养菌株,获得的粗酶液经过Sephacry S-100凝胶柱层析和DEAE琼脂糖弱阴离子交换柱层析,最终得到纯化的内切葡聚糖酶,并对其进行酶学性质分析及串联质谱鉴定。【结果】研究表明:Egn21的分子质量为44.25 kDa,等电点为4.91;酶学特性研究显示:Egn21降解羧甲基纤维素的最适反应温度为40°C,在45°C以下比较稳定。该酶最适pH为6.0,在pH为5.0–8.0条件之间比较稳定。Co~(2+)、Zn~(2+)和Mg~(2+)对其没有明显作用,而Fe~(2+)、Ca~(2+)、K~(+)、Na~(+)和Mn~(2+)对酶活性有抑制作用,Hg~(2+)会使酶失去活性。【结论】从Q7-31T中分离纯化得到的内切葡聚糖酶Egn21,经过酶学特性与串联质谱鉴定结果显示其属于GH5家族。 相似文献
69.
重组含有Epstein-Barr病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)基因的杆状病毒在昆虫细胞中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
用杆状病毒表达系统重组病毒,在昆虫细胞中表达了完整的含有EBV-LMP1基因3个外显子开放读码框架的长2.3kb的cDNA片段。用重组病毒感染Sf9细胞,用免疫荧光染色,结果表明:48小时表达重组蛋白,72小时细胞较完整,免疫荧光染色强阳性,96小时后细胞出现破碎。我们采集72小时的组织培养上清和细胞破碎裂解液,分别采用SDS-PAGE、HPLC分子筛法,用免疫蛋白印迹法实验证明,表达的蛋白能被抗LMP1的单克隆抗体所识别,测定表达蛋白的分子量为60kD。经蛋白含量扫描图分析,采用Sephadex-75柱初步纯化表达的LMP1蛋白,将后者进行裸鼠体内致瘤实验,未见肿瘤生长。 相似文献
70.
β-葡萄糖苷酶的分离纯化和性质研究 总被引:12,自引:0,他引:12
β-葡萄糖苷酶是纤维素酶的重要组分之一,它不仅可水解纤维二糖和寡糖,更可解除纤维二糖对β-1,4-内切葡聚糖酶和外切葡聚糖酶的抑制,提高水解速率和程度.利用SephadexG-150和DEAE-SephadexA-50层析法从黑曲霉变异株L-22中分离提纯了β-葡萄糖苷酶,该酶是由两个分子量相同的亚基组成的二聚体,每个亚基分子量为203kD.该酶最适pH为4.8,pH稳定范围在3.6~6.4;最适温度是60℃,温度稳定范围为4~60℃;酶分子含糖量为8.35%.它是一个酸性β-葡萄糖苷水解酶,专一性地水解β-糖苷键.而不水解α-糖苷键,对短链底物表现了相对高的活力.用动力学分析和共价化学修饰方法探讨了与该酶活力有关的必需基团.由pH对lgVm和lgVm/Km的影响,推测出酶活性部位至少有两个可解离基团为酶活性所必需,它们在酶-底物复合物中的pKes1和pKes2的值分别为4.0和5.6,在游离酶中的pK值分别为4.2和5.9.由此可初步判断这两个可解离基团可能为组氨酸和含羧基的氨基酸,它们与酶的催化和底物结合可能有关. 相似文献