十三烷1,13-二羧酸的发酵研究

热带假丝酵母(C.tropicalis)NP-6-126是经过紫外线和亚硝酸反复诱变筛选培育出来的,它是生产十三烷1,13一二羧酸(DC_(15)的优良生产突变株,尿素和硝酸钾浓度对其产酸有明显影响。尿素浓度在0.15％～0.21％范围内对产酸有利,尤其是0.18％最佳,浓度增大,明显抑制DC_(15)的产生和积累;硝酸钾的加入,也明显促进DC_(15)产量的提高,0.6％～0.9％硝酸钾浓度较合适。于16L自动控制罐发酵7d,DC_(15)达到130g/L,放大到2500L罐,在最佳条件下,连续5批,发酵6d,DC_(15)产量平均达到176g/L,正十五烷(nC_(15)转化率平均为52.5％,后处理总收率平均为80.6％,DC_(15)的纯度平均为95.83％。     

原噬菌体PBSX阻遏基因及其温度敏感型等位基因的克隆分析

本研究利用聚合酶链式反应技术,成功地克隆了枯草芽孢杆菌缺陷型原噬菌体ＰＢＳＸ阻遏基因及其温度敏感型等位基因。核苷酸序列分析发现,野生型及其温度敏感型阻遏基因之间的碱基变异较大,但却存在几乎完全相同的开放读框,尤其是开放读框ｏｒｆⅠ,可能编码着１１３个氨基酸的阻遏蛋白,并且还推定了开放读框的启动区和核糖体结合位点。通过互补实验,证实了野生型阻遏基因的产物能够抑制温度诱导ＰＢＳＸ原噬菌体,表明克隆的基因有着正常的生物活性。     

钙调素对细胞周期的调节

RC3细胞是一种用真核表达载体1~(CaM)转染NIH 3T3细胞建成的可调钙凋素(Calmodulin,CaM)高表达细胞模型。通过分子杂交及蛋白免疫印迹方法证实在地塞米松(Dexamethasome,DXM)作用下,RC3细胞可高表达CaM。CaM的过表达使G_1期细胞减少,S期细胞增加;CaM拮抗剂三氟拉嗪(trifluoperazine,TFP)则使G_1期细胞增加,S期细胞减少。高表达CaM使细胞分裂指数提高,G_2期细胞减少,有丝分裂前期细胞增加,M中期细胞比例下降。而TFP处理则使分裂指数下降,G_2期细胞增加,M前期细胞减少,M中期细胞增加。实验结果表明CaM在G_1/S、G_2/M和M中期/M后期3个位点上对细胞周期进行调控;通过加速G_1至S期,G_2至M期和M中期至M后期的进程,使细胞倍增时间缩短,促进细胞增殖。本工作表明,RC3细胞作为CaM表达可调细胞模型,是研究细胞周期调控的有力工具。     

以融合蛋白形式在大肠杆菌中表达人MCP－1

将编码人单核细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）的基因亚克隆到大肠杆菌表达载体ｐＥＸ３１Ａ中,在大肠杆菌中表达出ＭＳ２／ＭＣＰ－１融合蛋０白,该表达产物约占菌体总蛋白的１５％左右,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表明,表达产物可与ＭＣＰ－１抗体特异反应。采用琼脂糖平板法进行活性测定表明,表达产物具有明显的单核细胞趋化活性,说明Ｎ端融合一段细菌蛋白对ＭＣＰ－１有无趋化活性可能没有影响。     

薄层扫描法测定绞股蓝中人参皂甙Rb_1

用高效薄层扫描法测定了绞股蓝中人参皂甙Ｒｂ_１的含量,并进行分离、纯化,再用酸解法水解,测得其结合糖为葡萄糖。     

Na_2SO_3和NaHCO_3对叶绿体CF_1－ATPase活力作用的机制

Ｎａ２ＳＯ３对热－ＤＴＴ活化的游离ＣＦ１及类囊体膜上ＣＦ１－ＡＴＰａｓｅ活力均有显著的促进作用,ＮａＨＣＯ３亦有明显的促进作用。Ｎａ２ＳＯ３和ＮａＨＣＯ３的促进作用与它们解除Ｍｇ２＋的抑制作用有关。从ＮａＨＣＯ３和Ｎａ２ＳＯ３及它们与Ｍｇ２＋之间的竞争性关系,表明三者是结合在酶的同一部位上。Ｎａ２ＳＯ３可明显降低热－ＤＴＴ活化的游禹ＣＦ１－ＡＴＰａｓｅ催化反应的活化能,这可能与促进产物ＡＤＰ的释放有关。     

L-异亮氨酸和甘氨酸对大肠杆菌表达与分泌邻苯二酚2,3-双加氧酶的作用

证实了甘氨酸与L-异亮氨酸对大肠杆菌表达邻苯二酚2,3-双加氧酶(CatO_2ase)的促进作用和甘氨酸促使该酶分泌至胞外培养基中的作用.产酶量高低和分泌量多少与培养基种类、甘氨酸和L-异亮氨酸的浓度以及培养时间等因素有关.在甘氨酸存在的情况下,胞壁对溶菌酶的敏感性有所增加,超微形态似有变化,还存在其他物质的伴随分泌,故甘氨酸可能是引起细胞壁结构的改变而导致邻苯二酚2,3-双加氧酶等胞内容物被动分泌至胞外.     

LFA—1／ICAM—1在ConA诱导的小鼠胸腺细胞活化中的作用

用抗ＬＦＡ－１／ＩＣＡＭ－１粘附分子单克隆抗体和ＣｏｎＡ联合刺激小鼠胸腺细胞,初步研究了该膜分子在经ＴＣＲ／ＣＤ３介导的胸腺细胞活化信号传导以及胸腺细胞亚群选择中的作用。在ＣｏｎＡ刺激系统中,抗ＡＬＦＡ－１／ＩＣＡＭ－１单抗均能抑制胸腺细胞的增殖应答,且以抗ＬＦＡ－１单抗均能抑制胸腺细胞的增殖应答,且以抗ＬＦＡ－１单抗的作用更为显著,而在ＰＡＭ加钙离子载体Ａ２３１８７刺激体系中,抗ＬＦＡ－１单抗却     

3-氰基吡啶水合酶的反应条件及影响因子

研究了芳腈水合酶催化水合3-氰基吡啶生成尼克酰胺的反应条件及影响因子.酶反应的最适pH为8.0,最适温度为25℃.酶在pH8.5于25℃保温4小时或在25—30℃于pH8.0保温3小时是稳定的.反应液中加入Fe~(3 )(1.5 mmol/L)可使酶活力增加 50%,而加入NH_4~ (300 mmol/L)则使酶活降低了67%.Ag~ 和 Hg(2 )”强烈地抑制酶反应活性,在浓度均为 5mmol/L时,抑制率分别为99.7%和100%.NaCN(50 mmol/L)和苯甲腈(100 mmol/L)对酶活性的抑制率分别为78%和85%.该酶作用于 3-氰基吡啶的Km为62.5 mmol/L,V_(max)为85.8 μmol·min~(-1)·mg~(-1).