原位染色检测慢病毒载体转录通读方法的建立

慢病毒载体作为基因导入系统已被多次应用于基因治疗试验当中,近年来受到了广泛关注。转录通读是慢病毒载体应用过程中存在的潜在不安全因素之一。为了进一步完善慢病毒载体转录通读的检测方法,使检测结果更加直观准确,在已建立的在转录水平检测其转录通读的基础上,进一步模拟病毒载体整合入基因组的状态,于原病毒载体3'-LTR后插入经密码子优化的Lac Z报告基因。经转染细胞后进行原位染色,发生通读现象的细胞会被染成蓝色,从而在蛋白质水平直观地体现慢病毒载体的通读情况,说明所建立的方法是准确可行的。所得结论与q RTPCR方法在转录水平检测的结果是平行相一致。原位染色检测法的建立为慢病毒载体转录通读的检测、提高慢病毒载体生物安全性的研究提供了技术支持。     

仔猪人工感染猪繁殖与呼吸综合征病毒后宿主细胞凋亡动态变化规律的研究

28日龄长白仔猪滴鼻人工感染猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),于接种后8h、24h、30h、3d、5d、7d、9d、11d、14d、21d、28d、35d和42d各随机剖杀2头,取各组织器官,利用原位末端标记(TdT-mediated dUTP nick end la-beling,TUNEL)法检测PRRSV感染仔猪后所产生的细胞凋亡情况。结果表明,PRRSV在体内可诱导肺脏、淋巴结(肺门淋巴结、肠系膜淋巴结、腹股沟淋巴结)、扁桃体、脾脏、肝脏、胰脏、十二指肠、胸腺、肾脏、子宫、睾丸、附睾、大脑和小脑等组织的细胞发生凋亡,发生凋亡的靶细胞主要是各种巨噬细胞、单核细胞以及生殖细胞。感染后8h即可检测到细胞凋亡,且凋亡细胞数目随着感染时间的延长在感染后第7d达到高峰,以后逐渐减少,至感染后42d时仍能检测到少量凋亡细胞。     

植物修复在抗生素污染治理中的应用研究进展

抗生素的环境污染问题日益严峻,如何对抗生素污染的水体和土壤进行有效的原位处理已然成为亟待解决的问题.植物修复是具有处理成本低、二次污染可控、易于后续处理、不破坏土壤和河流生态环境等优势的绿色、原位修复技术,已被证明是可用于抗生素污染治理的处理技术之一.因此,通过文献搜索和总结分析,作者们对植物修复在抗生素污染治理中的应...     

原位PCR技术研究鼻咽癌组织中bcl-2／JH融合基因

为研究bcl-2／JH融合基因与鼻咽癌发生的关系,应用兰套式原位PCR技术对41例石蜡包埋鼻咽癌组织中bcl-2/JH融合基因进行检测。结果发现41例癌组织中bcl-2／JH融合基因阳性6例,阳性率为14.6%,bcl-2基因的两个热点断裂区mbr和mcr与免疫球蛋白重链JH形成的融合基因mbr-JH和mcr-JH各占50％。bcl-2／JH融合基因形成与癌组织学分级和转移间无明显关系（P＞0.05）。本表明bcl-2/JH融合基因与鼻咽癌发生可能有一定关系,其中mbr-JH和mcr-JH同为bcl-2基因在鼻咽癌的两个重要基因异常改变形式。     

粒单系造血祖细胞(CFU-GM)琼脂半固体培养的原位固定及鉴定染色

用粒单系造血祖细胞（CFU－GM）体外琼脂半固体培养法,琼脂块原位固定,Wright染色与细胞化学和免疫细胞化学技术,对培养人的骨髓CFU－GM进行集落性质鉴定,结果表明：Wright染色能区别集落的性质及细胞的分化程度：CFU－GM的细胞中PAS、POX呈阳性反应;CD14、CD15分别在单核细胞和粒细胞的胞浆或胞膜上表达。该方法对鉴定细胞集落类型、集落中细胞的分化与成熟程度是简便可靠的手段。     

腹腔镜根治性膀胱全切除联合回肠原位新膀胱术对膀胱癌患者免疫功能和生活质量的影响

目的:探讨腹腔镜根治性膀胱全切除联合回肠原位新膀胱术对膀胱癌患者免疫功能和生活质量的影响。方法:选取2016年7月到2017年8月在我院进行治疗的膀胱癌患者90例,患者均采用根治性膀胱全切除联合回肠原位新膀胱术治疗,其中50例行开放性根治性膀胱全切除联合回肠原位新膀胱术,作为对照组;40例行腹腔镜根治性膀胱全切除联合回肠原位新膀胱术,作为观察组。记录患者围手术期指标及并发症,比较两组患者的尿动力学指标和免疫功能变化情况以及SF-36量表评分。结果:观察组患者的手术时间长于对照组,术中出血量、住院时间、胃肠功能恢复时间均短于对照组(P<0.05)。两组患者的膀胱容量、最大尿流率、充盈期膀胱压力、排尿时最大膀胱压、最大尿道压、残留尿量和总并发症发生率比较无差异(P>0.05)。术后3 d,两组患者的CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+水平均有所下降,CD8^+水平有所上升(P<0.05),且观察组的CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+水平高于对照组,CD8^+水平低于对照组(P<0.05)。术后1个月两组患者的生理职能、生理机能、健康状况、躯体疼痛、社会功能、精力、情感职能以及精神健康评分均有增加(P<0.05),且观察组的生理职能、健康状况、精力、情感职能以及精神健康评分明显高于对照组(P<0.05)。结论:与开放手术相比,腹腔镜根治性膀胱全切除联合回肠原位新膀胱术手术时间更长,但术中出血量少,患者术后恢复快,且手术对患者的免疫功能影响较小,可显著提升患者的生活质量。     

可注射更昔洛韦温敏型原位凝胶剂的研究

目的：构建温敏型三嵌段共聚物,研究其理化性质以及用其制备的可注射更昔洛韦温敏型原位凝胶剂的制剂特性。方法：以聚乙二醇（PEG）作为亲水嵌段,丙交酯（LA）和β- 丁内酯（β-BL）的无规共聚物PBLA 作为疏水嵌段,采用开环聚合法合成温敏型三嵌段共聚物PBLA-PEG-PBLA,并对其理化性质进行表征,考察其溶液的胶凝温度/ 临界凝胶浓度、流变学性质、通针性和溶蚀行为以及以更昔洛韦作为模型药物、用其制得的可注射载药温敏型原位凝胶剂的体外释放特性。结果：合成的PBLA-PEG-PBLA 嵌段共聚物重均分子质量在6 000 左右,多分散系数为1.5 左右;其溶液临界凝胶浓度（g?mL-1）为5%~10%,质量浓度（g?mL-1）在10%~25% 时胶凝温度为31~35 ℃,接近并略低于体温;其凝胶在低温下储能模量与黏度较小,当温度接近相转变温度后两者迅速增大;其载药凝胶剂累计释放量经拟合显示遵循一级动力学方程,并呈扩散释药机制。结论：较低质量浓度[10%~15%（g?mL-1）] 的PBLA-PEG-PBLA 更符合玻璃体注射要求,更适用于制备可注射载药温敏型原位凝胶剂。     

膨润土联合磷酸氢二铵原位钝化修复汞污染土壤田间试验

以贵州万山汞矿区污染农田为试验田,研究添加膨润土、磷酸氢二铵、膨润土+磷酸氢二铵混施对土壤中汞的形态分布以及四季菜心的产量和汞含量的影响。结果表明,与对照土壤相比,添加膨润土、磷酸氢二铵、膨润土+磷酸氢二铵混施都能增加四季菜心地上部分和根系的干重,而且膨润土+磷酸氢二铵混施处理的四季菜心可食部分和根系生物量最大,分别增加4.7和4.8倍。与对照相比,膨润土+磷酸氢二铵混施能显著降低四季菜心地上部分和根系汞含量,其他处理无明显降低趋势。土壤中添加3%膨润土+0.5%磷酸氢二铵的混施处理四季菜心中汞含量最低。通过分析修复前后土壤汞的形态变化特征发现,膨润土+磷酸氢二铵混施能显著降低土壤中的有效态汞(溶解态与可交换态和特殊吸附态汞)和铁锰氧化态汞含量,而有机结合态汞和残渣态汞含量无显著变化。本研究结果可为汞污染土壤修复提供一定技术指导。