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慢病毒载体作为基因导入系统已被多次应用于基因治疗试验当中,近年来受到了广泛关注。转录通读是慢病毒载体应用过程中存在的潜在不安全因素之一。为了进一步完善慢病毒载体转录通读的检测方法,使检测结果更加直观准确,在已建立的在转录水平检测其转录通读的基础上,进一步模拟病毒载体整合入基因组的状态,于原病毒载体3'-LTR后插入经密码子优化的Lac Z报告基因。经转染细胞后进行原位染色,发生通读现象的细胞会被染成蓝色,从而在蛋白质水平直观地体现慢病毒载体的通读情况,说明所建立的方法是准确可行的。所得结论与q RTPCR方法在转录水平检测的结果是平行相一致。原位染色检测法的建立为慢病毒载体转录通读的检测、提高慢病毒载体生物安全性的研究提供了技术支持。 相似文献
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63.
28日龄长白仔猪滴鼻人工感染猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),于接种后8h、24h、30h、3d、5d、7d、9d、11d、14d、21d、28d、35d和42d各随机剖杀2头,取各组织器官,利用原位末端标记(TdT-mediated dUTP nick end la-beling,TUNEL)法检测PRRSV感染仔猪后所产生的细胞凋亡情况。结果表明,PRRSV在体内可诱导肺脏、淋巴结(肺门淋巴结、肠系膜淋巴结、腹股沟淋巴结)、扁桃体、脾脏、肝脏、胰脏、十二指肠、胸腺、肾脏、子宫、睾丸、附睾、大脑和小脑等组织的细胞发生凋亡,发生凋亡的靶细胞主要是各种巨噬细胞、单核细胞以及生殖细胞。感染后8h即可检测到细胞凋亡,且凋亡细胞数目随着感染时间的延长在感染后第7d达到高峰,以后逐渐减少,至感染后42d时仍能检测到少量凋亡细胞。 相似文献
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65.
污染底泥原位覆盖技术综述 总被引:12,自引:0,他引:12
从污染底泥的危害入手,提出简单、有效且低成本的底泥原位覆盖技术.该技术将无污染的清洁材料铺盖到污染底泥上,通过覆盖材料对污染物的阻隔、稳固和吸附作用来有效控制底泥污染物.覆盖材料的粒径、比表面积和孔隙率、密度等特性关系到材料的吸附能力和对底泥污染物的阻隔和稳固作用,从而决定覆盖效果.选取覆盖材料及确定最佳覆盖厚度需要依据材料的这些特性.本文分析了原位覆盖技术的优缺点及适用条件和适用范围.介绍了几种常用的原位覆盖工程的施工方式及每种方式的优缺点,列举了大量的国内外覆盖工程实例,并就覆盖技术在我国良好的应用前景进行了分析. 相似文献
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目的 建立肺原位移植耐紫杉醇肿瘤动物模型以及耐药机制的研究.方法 利用本实验室已经获得的耐紫杉醇肺癌细胞株(A549-Taxol),测定其耐药指数和细胞对抗癌药物的敏感性后,采用穿刺法将约为每毫升5×106细胞注入小鼠肺部,3周后统计存活率以及成瘤率并且观察小鼠状态.RT-PCR和Western Blot技术检测肿瘤中... 相似文献
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为研究bcl-2/JH融合基因与鼻咽癌发生的关系,应用兰套式原位PCR技术对41例石蜡包埋鼻咽癌组织中bcl-2/JH融合基因进行检测。结果发现41例癌组织中bcl-2/JH融合基因阳性6例,阳性率为14.6%,bcl-2基因的两个热点断裂区mbr和mcr与免疫球蛋白重链JH形成的融合基因mbr-JH和mcr-JH各占50%。bcl-2/JH融合基因形成与癌组织学分级和转移间无明显关系(P>0.05)。本表明bcl-2/JH融合基因与鼻咽癌发生可能有一定关系,其中mbr-JH和mcr-JH同为bcl-2基因在鼻咽癌的两个重要基因异常改变形式。 相似文献
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69.
粒单系造血祖细胞(CFU-GM)琼脂半固体培养的原位固定及鉴定染色 总被引:5,自引:0,他引:5
用粒单系造血祖细胞(CFU-GM)体外琼脂半固体培养法,琼脂块原位固定,Wright染色与细胞化学和免疫细胞化学技术,对培养人的骨髓CFU-GM进行集落性质鉴定,结果表明:Wright染色能区别集落的性质及细胞的分化程度:CFU-GM的细胞中PAS、POX呈阳性反应;CD14、CD15分别在单核细胞和粒细胞的胞浆或胞膜上表达。该方法对鉴定细胞集落类型、集落中细胞的分化与成熟程度是简便可靠的手段。 相似文献
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