巨型引物PCR法对抗CD3改型单链抗体

亲和力是影响改型单链抗体应用于临床的重要因素之一.利用巨型引物PCR定点诱变方法,设计并化学合成出两组含多个突变位点的简并引物,在第一轮PCR中使用简并引物分别扩增出含突变碱基的两条特异性的DNA片段,即巨型引物,将其经琼脂糖凝胶电泳分离纯化后,作为3′和5′的两端引物应用于第二轮PCR反应中.通过改变标准PCR反应条件,调整引物与模板的浓度,扩增出特异性较强的目的DNA条带.PCR产物经回收后,进行DNA测序.测序结果表明利用该方法扩增得到特异的抗CD3改型单链抗体的突变体库.     

Nuclear apoptosis induced by isolated mitochondria

We isolated and purified mitochondria from mouse livers and spinach leaves.When added into egg extracts of Xenopus laevis,they caused nuclei of mouse liver to undergo apoptotic changes.Chromatin condensation,margination and DNA ladder were observed.After incubating isolated mitochondria in some hypotonic solutions,and centrifuging these mixtures at mgh speed,we got mitochondrial supernatants.It was found that in the absence of cytosolic factor,the supernatant alone was able to induce apoptotic changes in nuclei.The effective components were partly of protein.DNA fragmentation was partly inhibited by caspase inhibitors AC-DEVD-CHO and AC-YVAD-CHO.Meanwhile,caspase inhibitors fully blocked chromatin condensation.Primary characterization of the nuclear endonuclease(s) induced by mitochondrial supernatants was also conducted.It was found that this endonuclease is different from endonuclease G,cytochrome c-induced nuclease,or Ca^2 -activated endonuclease.     

吡咯喹醌对烟草幼苗中IAA和玉米素加玉米素核苷及核酸含量？…

经吡咯喹啉醌（ＰＱＱ）喷施叶片和灌根处理的烟草幼苗中ＩＡＡ、玉米素（Ｚ＋－玉米素核苷（ＺＲ）和核酸含量明显增加,根据活力增大。     

核酸荧光探针新进展

核酸荧光探针新进展田少敏阮康成（中国科学院上海生物化学研究所,上海２０００３１）关键词核酸荧光探针核酸荧光探针作为核酸标记的工具,具有方便、快速、灵敏和安全等特点,近年来得到很大发展,不但种类明显增加,性质上也有进一步改善。下面就笔者得到的最新资料,...     

鱼体内锌,镉和核酸的变化及其相互关系研究

锌和钢对鱼体的生长发育产生重大影响。锌参与RNA和蛋白质的合成,并参与胰岛素的贮藏。鲤的缺锌症表现为生长减慢,食欲降低和死亡率增高。钢被认为是动物体非必需的元素,不仅降低RNA和蛋白质的合成速度,而且可能破坏核糖核蛋白体［‘］。迄今为止关于草鱼Ctenopharyngodonidellus（C．＆V．）在生长过程中Zn、Ch和核酸的含量变化及其与生长之间的关系,被了解的程度还相当有限。作者采集水库中天然生长的草鱼,测定不同体长的草鱼肌肉中Zn、Cd和核酸的含量,通过回归分析探讨草鱼在不同生长阶段中Zn、Cd和核酸的含量变化特点,并…     

三链核酸稳定性和生物学功能的研究进展

近10年来三链核酸的研究发展迅猛,已经成为分子生物学和基因工程的一个前沿领域.综述了最近在三链核酸稳定性和生物学功能方面的研究进展.较为详细地讨论了影响三链稳定性的各种内源和外源因素如：寡聚脱氧核苷酸(ODN)的长短 、序列、碱基修饰、骨架结构以及温度、酸度、离子强度 、配基等,同时对三链核酸的生物学功能进行了初步的总结,这些功能包括：控制基因转录,保护靶序列防止酶切,充当分子剪刀进行特定位点切割等.     

流行性出血热尸检组织中热休克蛋白70mRNA的定位及分布

应用核酸原位分子杂交技术研究了国内不同地区３０例流行性出血热患者尸检组织中病毒ＲＮＡ及ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ细胞内定位,同时观察了汉坦病毒感染的ＶｅｒｏＥ６细胞中ＨＳＰ７０的表达情况。结果表明,热休克蛋白７０ｍＲＮＡ在多数组织中均可检测到,分布与病毒ＲＮＡ一致,并且与组织的病理损害有关;体外实验的结果也表明在出血热病毒感染的细胞中有ＨＳＰ７０的高表达。提示热休克蛋白与汉坦病毒的致病以及流行性出血热的发病机理有关。     

马立克氏病病毒强毒GA株基因组BamH Ⅰ-L片段的序列分析

马立克氏病病毒（Ｍａｒｅｋ’ｓｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓ,ＭＤＶ）是一种能诱导鸡淋巴组织增生或淋巴肿瘤的细胞结合性疱疹病毒,由此而引起的马立克氏病（Ｍａｒｅｋ’ｓｄｉｓｅａｓｅ,ＭＤ）也是迄今为止唯一可以利用疫苗进行有效控制的肿瘤性疾病。鉴于此,作为研...     

基因扩增产物的固相杂交-酶联显色方法的建立

建立基于基因扩增技术的简便、快速的病毒核酸定量检测方法．将标记有生物素的寡核苷酸引物所扩增的病毒基因产物,与通过共价键结合在微孔反应板上的特异性探针进行快速杂交,然后通过辣根过氧化物酶标记的抗生物素进行酶联显色,读取光密度值．应用本方法对血清中乙型、丙型肝炎病毒核酸定量检测,灵敏度分别可达１－５拷贝／反应．此方法简便、快速、特异性好、敏感性高、半定量指标客观,可广泛应用于肝炎病毒感染的临床诊断和疗效评价．     

小檗胺对大鼠糖尿病性白内障模型中DNA损伤修复及致障过程的影响

利用链脲佐菌素（ＳＴＺ）引起的大鼠糖尿病性实验性白内障模型,观察小檗胺对晶状体上皮细胞ＤＮＡ损伤、修复及致障过程的影响．发现ＳＴＺ对照组在腹腔注射ＳＴＺ后３～４ｄ开始出现有显著意义的ＤＮＡ单链断裂（ｓｉｎｇｌｅｓｔｒａｎｄｂｒｅａｋｓ,ＳＳＢ）,并持续存在于发病全程直至晶状体完全混浊．而在注射ＳＴＺ后１２ｈ再腹腔注射３．４８ｍｇ／ｋｇ体重,１．７４ｍｇ／ｋｇ体重小檗胺后,一周后才出现有显著意义的ＳＳＢ．３．４８ｍｇ／ｋｇ体重组在５周后白内障形成率明显低于ＳＴＺ组的同时,ＳＳＢ也恢复到对照水平,而１．７４ｍｇ／ｋｇ体重组第７周才恢复到对照水平．提示抗氧化药物小檗胺能在一定程度上阻止白内障发生过程中的ＤＮＡ损伤．