STD门诊生殖器溃疡性疾病的病原学研究

目的 了解生殖器溃疡性疾病（GUD）的发病率、病因及其与HIV感染的关系。方法 用暗视野显微镜检查（D-F）、梅毒血清学试验（STS）、酶免疫法（EIA）检测HSV抗原和HD培养等方法检测322例生殖器溃疡标本中TP、HSV和HD,并进行血清HIV抗体检测。结果 在8 999例STD门诊患者中,GUD患者322例（3.58%,322/8 999）;在322例GUD患者中,梅毒85例（26.4%,85/322）,生殖器疱疹74例（26.09%,84/322）,软下疳0例（0,0/322）,病因不明的GUD为153例（47.52%,153/322）;其中GUD患者的HIV感染率为1.86%（6/322）,梅毒患者的HIV感染率为4.70%（4/85）,生殖器疱疹患者的HIV感染率为1.19%（1/84）,其他GUD的HIV感染率为0.65%（1/153）。比较三者的HIV感染率发现,梅毒的HIV感染率高于生殖器疱疹和其他GUD患者（4.70%vs1.19%,χ^2=0.24,P＞0.05,OR=3.04,95%CI=0.31-29.93;4.70% vs 0.65%,χ^2=1.29,P＞0.05,OR=5.63,95%CI=0.58-55.06）,但两者差异无显著性;GH患者的HIV感染率与其他GUD患者的HIV感染率相比,差异无显著性（1.19% vs 0.65%,χ^2=0.00,P＞0.05,OR=1.85,95% CI=0.11-30.00）。结论 在性病门诊中,GUD的主要病因为梅毒和生殖器疱疹,且存在混合性感染;梅毒与HIV的感染有一定关系.     

可复制性单纯疱疹病毒在抗肿瘤方面的应用

单纯疱疹病毒是肿瘤生物治疗中常用的病毒载体之一,可复制性单纯疱疹病毒以其溶瘤效率高、特异性好、可行性强成为近年来研究的热点。其中对溶瘤性单纯疱疹病毒突变株G207的研究开展得早,其溶瘤效果、靶向性及安全性都得到了确认,这也带动了可复制性单疱病毒应用的发展,目前已研究出多种溶瘤单纯疱疹病毒突变株。本文就近几年可复制性单纯疱疹病毒在抗肿瘤方面的研究现状加以综述,以探讨其临床治疗肿瘤的潜在价值及可行性。     

Split内含肽高效介导转录激活因子的胞内融合

Sprit内含肽可以通过反式剪接作用介导两个蛋白片段的共价连接．基于这一原理,利用来自于Synechocystis sp．strain PCC6803的天然sprit内含肽DnaEs作为蛋白剪接元件,通过其反式剪接作用介导了四环素阻遏蛋白（TetR）与1-型单纯疱疹病毒（HSV）的转录活化域（VP16）的共价连接,形成融合蛋白TV．应用RT-PCR技术以及荧光显微镜成像技术分别在mRNA转录水平与蛋白表达水平上研究了DnaEs的剪接活性,结果证明在细胞内DnaEs可以介导融合蛋白TV的产生．同时也对融合蛋白TV的转录活性进行了研究,并将其与通过重组DNA表达得到的同种蛋白的转录活性进行了比较,发现DnaEs介导的融合蛋白与基因重组得到的同种蛋白转录活性相似．此外,还研究了四环素类似物Dox对TV转录活性的调控,结果表明Dox可以明显抑制其转录活性．DnaEs介导转录激活因子融合,并启动下游报告基因表达的实验方法,为深入开展DnaEs的应用研究提供了重要实验依据．     

格尔德霉素抗病毒作用的相关基因研究

格尔德霉素(Geldanamycin,GA)作为一种苯醌安莎霉素类抗生素,能与热休克蛋白90特异性结合,具有广谱的抗病毒作用.为了从转录水平上研究GA抗病毒的分子机制,本研究以单纯疱疹病毒Ⅰ型(Herpes simplex vi-rus type 1,HSV-1)为对象,在确定药物有效抗病毒作用的基础上,采用基因芯片技术分析了在HeLa细胞中病毒感染和药物处理对细胞表达谱的影响,并筛选出GA抗病毒作用的可能相关基因.同时用半定量RT-PCR方法对GA诱导上调、HSV-1诱导下调的基因(ACTG1、RAN、SODl)以及GA诱导下调、HSV-1诱导上调的基因(HYALl)进行了验证.研究GA抗病毒作用对细胞表达谱的影响,有利于深入理解药物的抗病毒机制.     

单纯疱疹病毒Ⅱ型CTCF结合位点抑制启动子功能

为了找到CTCF在单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)中的结合位点,并探讨其基因表达调控作用。对比HSV-1与HSV-2全基因组中CTCF结合序列区别;生物信息学分析HSV-2全基因组;Jaspar在线预测CTCF结合位点;依据CTCF结合的序列特点预测结合位置;PCR扩增预测位点并插入pGL3-promoter构建重组载体;重组载体转染人胚胎肾细胞(293T)双荧光检测验证预测位点转录调控效应。预测得到三个CTCF结合位点分别位于潜伏相关转录本(LAT)上游(CTUL)、下游(CTa’m)及内含子(CTRL)位置;扩增目的片段并构建重组载体,双酶切及测序验证成功;双荧光检测显示LAT内含子(pGL3-promoter-CTRL)及下游(pGL3-promoter-CTa’m)结合位点重组载体转染组与pGL3-promoter载体转染组相比,荧光强度明显减弱,差异有统计学意(P0.001),但与pGL3-basic组相比,并没有完全沉默荧光霉素的表达;上游结合位点重组载体(pGL3-promoter-CTUL)转染组与pGL3-promoter相比无明显差异(P0.05)。HSV-2LAT序列内含子及下游序列上存在CTCF结合位点,具有减弱基因启动子功能的效应,可能在HSV-2维持潜伏中发挥作用。     

魔芋低聚糖硫酸酯的制备及抗病毒活性研究

从酶解魔芋干粉中提取分子量在1500左右的葡甘露低聚糖Apkos,采用吡啶-氯磺酸法制备了它的硫酸酯衍生物S-Apkos,其硫含量为8.28%,取代度(Ds)为0.57.用Vero细胞和单纯疱疹病毒2型(HSV-2)考察硫酸酯化前后低聚糖的抗病毒活性.结果表明,本身无抗HSV-2活性的Apkos硫酸酯化后产生了抗病毒活性,500～4000μg/ml的SApkos能很好地抑制HSV-2引起的Vero细胞病变,而在500μg/ml及以上浓度条件下能完全抑制HSV-2在Vero细胞单层中形成病毒空斑.     

单纯疱疹病毒糖蛋白D的表达及免疫学鉴定

单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)是TORCH综合征的病原体之一.新生儿可通过宫内、产道和出生后等多种途径感染,大部分患儿呈现症状,如皮炎、角膜炎、口唇疱疹,也可发生涉及多个器官的播散性感染,严重者出现疱疹性脑膜炎,并常导致婴幼儿死亡.目前尚无全身用的特效药物和有效的防范措施.HSV包膜糖蛋白D(glycoprotein D,gD)是极为保守的免疫原性蛋白,在体内可诱导高滴度的中和抗体,因此gD基因成为近些年来诊断研究的靶基因.本文尝试将gD蛋白在酵母菌中表达,并分析其抗原性,为建立快速易行的重组抗原诊断试剂盒奠定基础.此外,利用该表达系统表达的HSV gD蛋白,可为HSV基因工程重组疫苗的研制提供依据,对优生优育、提高人口出生质量具有重要的理论及实际意义.     

Ⅱ型单纯疱疹病毒基因组无性繁殖系的建立

本文对HSV-2基因组进行了分子克隆,以自己组建的具有单一Bgl Ⅱ酶切位点的质粒pHO-314为载体,建立了HSV-2基因组E、G、H2、J、L、N、O、P等8个Bgl Ⅱ片段的无性繁殖系,其中包括完整的TK基因,特异性糖蛋白基因和转化基因。克隆的Bgl Ⅱ片段占全部HSV-2基因组的50％以上。     

单纯疱疹病毒2型糖蛋白D成熟肽基因毕赤酵母表达载体的构建及序列分析

构建单纯疱疹病毒2型包膜糖蛋白D成熟肽基因毕赤酵母表达载体,并对序列进行分析,为进行高抗原性的真核表达重组gD蛋白奠定基础。采用PCR扩增HSV2-gD成熟肽基因,将该段基因克隆于pGEM-T克隆载体,转化鉴定后,与巴斯德毕赤酵母表达载体(pPIC9K)酶切连接,转化大肠杆菌DH5α,筛选测序确定构建了pPIC9K?gD的真核表达载体,对克隆的序列进行分析,预测表达产物的理化特性及抗原性。结果显示,获得的重组的酵母表达载体pPIC9K-gD,测序结果证实为HSV2-gD成熟肽基因,序列分析其高度保守,预测蛋白分子量40.63kD,等电点pI为7.15,包含完整成熟肽分值达1.7的多个抗原决定簇。成功构建了HSV2-gD成熟肽基因的毕赤酵母表达载体。