单纯疱疹病毒的PCR直接基因分型

本文利用ＰＣＲ技术建立一种对ＨＳＶ直接基因分型的方法。在ＨＳＶ－Ⅰ、Ⅱ两型的ＤＮＡ多聚酶基因上设计了一条两型共同的上游引物（ＨＤＰ－Ｂ）和两条型特异的下游引物（ＨＤＰ－１、ＨＤＰ－２）。三条引物共同组成一个扩增反应体系,在ＨＳＶ－Ⅰ产生５４３ｂｐ条带,ＨＳＶ－Ⅱ产生３７２ｂｐ条带,据此在基因水平上对ＨＳＶ进行分型。５株不同来源的ＨＳＶ（２株Ⅰ型,３株Ⅱ型）分型结果与病毒分离及血清学方法完全一致。该反应体系与其它来源的ＤＮＡ不产生特异反应,敏感性可达１ｆｇ。应用该法对１５１份临床可疑ＨＳＶ感染的标本进行检测并分型,结果与免疫学方法完全一致。     

帕金森病单纯淡漠的临床特征及发生机制

帕金森病(Parkinson disease,PD)是常见的神经变性疾病,除静止性震颤、运动迟缓、肌强直、步态和姿势障碍等运动症状外,近年研究发现其还存在神经精神、睡眠、感觉及自主神经障碍等多种非运动症状。PD单纯淡漠是不伴痴呆和抑郁的淡漠,其与运动症状及多种非运动症状相关,严重影响患者的日常生活能力及生活质量。PD单纯淡漠的发生涉及神经解剖、神经病理、神经生化及神经免疫炎症等机制。本文将对PD单纯淡漠的临床特征及发生机制进行阐述。     

基因修饰乳酸乳球菌作为药物发送载体系统治疗黑色素瘤初探

[目的]探讨携带自杀基因单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)的重组乳球菌静脉注射后靶向实体肿瘤组织定殖及联合更昔洛韦(GCV)治疗小鼠黑色素瘤的可能性。[方法]荷瘤小鼠静脉注射乳球菌3d或7d后,将小鼠脾肺肝肾器官和肿瘤组织细胞匀浆后涂布于筛选培养基上,以乳酸菌数量的评价静脉发送乳球菌靶向定殖肿瘤细胞的可能性。以携带HSVtk的重组乳酸乳球菌经静脉途径处理荷瘤小鼠后,通过观测小鼠肿瘤体积变化及小鼠存活率评价相关抗肿瘤效果。[结果]静脉注射乳酸乳球菌3d后在小鼠脾肺肝肾和肿瘤组织内均有乳球菌检出,而7d后仅在肿瘤组织中发现有乳酸乳球菌的分布。与对照相比,静脉注射LL-HSV-tk联合GCV处理能显著抑制小鼠体内肿瘤的生长。[结论]静脉发送携带治疗性分子的乳酸乳球菌能靶向实体肿瘤组织定殖并抑制肿瘤的生长。     

2型单纯疱疹病毒体外感染周期的研究进展

2型单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus type 2,HSV-2)是引起生殖器疱疹的主要病原体。生殖器疱疹主要表现为生殖器和肛周皮肤黏膜疱疹或溃疡,是一种慢性、复发性、难以治愈的性传播疾病,临床治疗多以抑制病毒复制的核苷类药物阿昔洛韦及其衍生物更昔洛韦、喷昔洛韦等为主。这些药物对缓解症状、缩短病程有一定作用,但难以达到根治的目的,长期应用易产生耐药,且对其合并症基本无效。作用于HSV-2其他感染周期的药物成为人类探索的新领域。HSV-2感染宿主细胞是一个复杂的多阶段过程,包括黏附、穿入、核转运、基因组复制、衣壳组装、子代病毒释放等多个步骤,涉及多种细胞和病毒蛋白的活性。本文对HSV-2体外感染周期详细步骤及其分子机制作一综述,以期深入了解其感染机制,并为研制作用于不同感染阶段的抗HSV-2药物提供参考。     

女性阴道单纯感染和多重感染的鉴别诊断

目的 调查临安市女性阴道感染类型及其所占比例.方法 采用“白带常规+需氧菌阴道炎/细菌性阴道病联合测定技术”对随机选取的1 000例就诊女性的阴道分泌物进行检测.结果 检出阴道感染患者763例,单纯感染患者257例(占患病人数的33.68％),多重感染506例(占患病人数的66.32％).单纯感染患者中,需氧菌阴道炎(AV)患者115例,细菌性阴道病(BV)患者67例,细胞溶解性阴道病(CV)患者12例,外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)患者48例,滴虫性阴道炎(TV)患者15例;多重感染患者中,AV+ BV患者244例,AV+ VVC患者63例,AV+ TV患者18例,BV+ VVC患者162例,BV+ TV患者19例.结论 女性阴道多重感染和AV发病率较高,临床应引起高度重视.     

靶向UL27shRNA抑制Ⅱ型单纯疱疹病毒在HEK293细胞中的复制

按照shRNA(small hairpin RNA)设计原则,针对Ⅱ型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 2, HSV-2)的UL27基因序列保守区域筛选设计、合成4条干扰靶序列并构建表达UL27序列特异性siRNA(short interfering RNA)的质粒载体pGPU6/GFP/Neo．通过脂质体介导重组表达载体转染HEK293细胞 (human embryonic kidney 293 cell)再接种HSV-2．采用实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR)技术检测UL27各组的mRNA转录水平,终点滴定法检测细胞上清液中的病毒滴度,四甲基偶氮唑盐(four methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)法测定细胞存活率,Western印迹法检测蛋白表达效果．结果显示,UL27shRNA75组对UL27基因mRNA表达抑制效果最佳,同时能显著抑制感染细胞的CPE(cytopathic effect, CPE),降低上清液中的病毒感染滴度,提高细胞的生存率,抑制UL27基因的蛋白表达．提示本研究构建的pGPU6/GFP/Neo-UL27表达载体能在细胞水平上不同程度地干扰HSV-2 UL27基因表达,抑制HSV-2在HEK293细胞中复制．     

Expression of HSV-1 ICPO Antigen Peptide in Prokaryotic Cells and Preparation of Specific Antibody

As an immediate-early protein of herpes simplex virus, infected-cell polypeptide 0 （ICP0） exhibits complicated interactions with host cells, and its regulatory function on gene expression is of great importance. Since the ICP0 encoding sequence contains many rare codons which are absent in E.coli, and ICP0 is highly unstable in prokaryotic cells, expression of entire ICP0 in prokaryotic cells has never been reported. In order to further investigate the function of ICP0, a recombinant plasmid was constructed by subcloning a cDNA fragment encoding an amino-terminal of 105 residues of the ICP0 protein into pGEX-5x-1 vector. The resulting GST-105 fusion antigen peptide was expressed with high efficiency in E.coli. Antibodies prepared after the immunization of mice with purified fusion protein can recognize not only the denatured ICPO protein, but also the native ICPO protein with normal biological conformation.     

us3基因的缺失对单纯疱疹病毒1型毒力和抗凋亡功能的影响

利用CRISPR/Cas9系统使单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1) ul7、ul41、LAT 基因缺失构建M3减毒株(M3株),在M3株基础上通过缺失 us3 得到M4突变株(M4株)。本研究旨在分析野毒株(McKrae株)、M3株与M4株在毒力和抗细胞凋亡方面的差异。结果表明,McKrae组出现明显的临床症状,且100%死亡(P<0.001),而M3、M4组未出现临床症状。M4组小鼠组织中病毒载量明显低于McKrae组和M3组;病理学检测表明,McKrae组出现蛛网膜出血、胶质小结等现象,而M3、M4组未见病理损伤,M4组炎性因子表达与McKrae、M3组相比也显著下降(P<0.01);免疫后M4组较M3组出现高水平的中和抗体、γ干扰素(interferon γ,IFN-γ)和白细胞介素4(interleukin 4,IL-4)抗原特异性T细胞;McKrae株再次感染时,M4组小鼠组织中病毒载量明显低于对照组和M3组;在人急性T细胞淋巴瘤细胞中,M4株相比McKrae株和M3株可明显诱导细胞凋亡。