一次PCR扩增单纯疱疹和巨细胞病毒基因的检测方法

宫内感染是影响优生优育质量的一个重要因素,由病毒引起的宫内感染主要有以下四类病原：ＨＳＶ、ＣＭＶ、ＴＯＸＯ和风疹病毒（ＲＶ）,其中ＨＳＶ和ＣＭＶ的感染率较高。孕期这两种病原的感染会影响胎儿的正常发育,严重的可导致流产甚至胎儿畸形。目前已有针对这两种病...     

妇女生殖道单纯疱疹病毒Ⅱ型和人乳头瘤病毒的感染及其相关关系的研究

为探讨妇女生殖道单纯疱疹病毒Ⅱ型（ＨｅｒｐｅｓＳｉｍｐｌｅｓＶｉｒｕｓ２,ＨＳＶ２）和人乳头瘤病毒（ＨｕｍａｎＰａｐｉｌａｍａｖｉｒｕｓ,ＨＰＶ）的感染及其相关关系,我们应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对４８例患有性病、生殖道感染的妇女和３９例正常妇女进行了下生道ＨＳＶ２、ＨＰＶ的检测。ＨＳＶ２在实验组和对照组妇女中的感染率分别是７２９％和２５６％,两组有极显著性差异（Ｐ＜００１）;ＨＰＶ在实验组和对照组妇女中的感染率分别是５３３％和３３３％,两组无显著性差异（Ｐ＞００５）;两组中ＨＳＶ２、ＨＰＶ双阳性率分别是４５８％（２２／４８）和２３１％（９／３９）,有显著性差异（Ｐ＜００５）;在两组共８７份标本中,ＨＳＶ２和ＨＰＶ双阳性者占３１例,阳性率是３５６％。统计学分析表明：ＨＳＶ２和ＨＰＶ感染之间有极显著的相关性（Ｘ２＝２４０８,Ｐ＜００１）。研究表明：患有生殖系感染和性病妇女其ＨＳＶ２或ＨＰＶ和ＨＳＶ２混和感染的机率显著高于正常妇女,ＨＳＶ２和ＨＰＶ的感染具有协同作用。由于这两种病毒均与宫颈癌的发生有关,它们在生殖道中感染的相互作用机理有待于进一步研究。     

超声引导下经皮穿刺聚桂醇注射液与无水乙醇硬化治疗单纯性肝囊肿的疗效对比研究

目的:探讨并对比超声引导下经皮穿刺聚桂醇注射液与无水乙醇硬化治疗单纯性肝囊肿的疗效。方法:选择2014年5月至2016年9月我院收治的60例单纯性肝囊肿患者为研究对象,按随机数字表法分为两组。实验组30例在超声引导下给予聚桂醇注射液进行硬化治疗,对照组30例在超声引导下给予无水乙醇进行硬化治疗。比较两组患者临床有效率、不良反应发生率;于术前及术后24 h检测并对比两组患者血常规指标水平;于术前、术后1周及术后1月检测并对比两组患者总胆红素(TBIL)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、胆碱酯酶(CHE)及白蛋白(ALB)。结果:实验组总有效率为93.33%,对照组总有效率为90.00%,两组总有效率比较,差异无统计学意义(P0.05)。术前、术后24 h两组各项血常规指标对比,差异均无统计学意义(P0.05)。与术前相比,术后1周实验组患者血清TBIL、ALT、AST、ALP、CHE及ALB均无明显变化(P0.05),对照组患者血清ALT和AST升高(P0.05)。与术后1周相比,术后1个月实验组患者血清ALT、ALP降低,CHE升高(P0.05),对照组ALT、AST及ALP降低,CHE升高(P0.05)。术后1周实验组患者血清ALT和AST水平明显低于对照组(P0.05),TBIL、ALP、CHE及ALB均无明显差异(P0.05);术后1月实验组患者血清ALT水平明显低于对照组,ALB水平明显高于对照组(P0.05),TBIL、AST、ALP及CHE均无明显差异(P0.05)。实验组不良反应发生率为16.67%,低于对照组的30.00%,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:超声引导下经皮穿刺聚桂醇注射液与无水乙醇治疗单纯性肝囊肿均具有较好的疗效,但聚桂醇注射液作为硬化剂的不良反应率明显低于无水乙醇,对肝功能的损伤也较无水乙醇小。因此对于单纯性肝囊肿的硬化治疗,聚桂醇注射液是一种安全有效的硬化剂,值得在临床上推广。     

甘草甜素抗单纯疱疹病毒I的实验研究

目的旨在观察甘草甜素对HSV-1的抑制作用,为临床更为有效的治疗单纯疱疹病毒性脑炎探索新的药物。方法分体外及体内实验两个部分。体外培养Vero细胞,在病毒吸附Vero细胞后加入甘草甜素,观察空斑形成单位来评价甘草甜素对HSV-1的抑制作用;建立单纯疱疹病毒性脑炎小鼠模型,于小鼠腹腔内给药。通过观察实验组和对照组的小鼠死亡率来评价甘草甜素在体内对HSV-1的抑制作用。结果甘草甜素能明显抑制病毒所致的空斑形成,IC50为0．56mM;实验组小鼠的死亡率明显低于对照组。结论甘草甜素能明显的抑制单纯疱疹病毒I型的复制,能明显降低单纯疱疹病毒性脑炎小鼠的死亡率。     

单纯疱疹病毒的研究现状与展望

本文对单纯疱疹病毒潜伏与复发机理、疫苗的研究现状以及它在基因治疗载体方面的应用等,就近年来国内外单纯疱疹病毒研究的现状与进展作简要综述。     

HSV-2 miR-H4-5p负调节CDKL2基因表达并抑制Act D引起的Vero细胞凋亡

单纯疱疹病毒Ⅱ型（herpes simplex virus Ⅱ,HSV-2）编码的microRNA-H4-5p (miR-H4- 5p)可与病毒神经毒力蛋白ICP34-5mRNA互补结合并抑制其表达,从而降低病毒感染对细胞的毒力作用,以减弱细胞对病毒的免疫作用．但miR-H4-5p是否可靶向作用于宿主细胞基因目前仍不十分清楚．本研究证明,miR-H4-5p可通过靶向细胞周期依赖性激酶（cyclin- dependent kinase like 2, CDKL2）基因表达抗防线菌素D（actinomycin D, ActD）诱导的非洲绿猴肾上皮细胞（African green monkey kidney cells ,Vero）细胞凋亡．生物信息学方法在线预测miR-H4-5p潜在靶基因CDKL2的结合位点,并构建双萤光素酶报告系统检测miR-H4-5p靶向作用. 数据表明,miR-H4-5p可有效抑制萤光素酶的表达．qPCR和Western印迹数据表明,miR-H4-5p 可在 mRNA水平和蛋白水平抑制CDKL2表达．构建过表达载体pmR- mcherry/miR-H4-5p（cherry/H4-5p）,将cherry/H4-5p与pmR-mcherry空质粒转染至Vero细胞,转染24 h后加入终浓度为1 μg/mL放线菌素D诱导细胞凋亡．MTT法、流式细胞术和Western印迹检测Bax、Bcl-2表达.数据表明,miR-H4-5p可抑制ActD诱导的Vero细胞活性降低．本实验提示,miR-H4-5p可通过靶向调节宿主细胞基因抑制细胞凋亡,可能以此方式共同参与HSV 2潜伏感染的建立．但是这种抑制凋亡作用的通路及其机制目前仍不清楚,miR-H4-5p是否可靶向更多的宿主基因仍需要进一步实验验证．     

基于CRISPR-Cas9系统的HSV-1基因治疗载体的快速构建北大核心CSCD

基因改造的1型单纯疱疹病毒(HSV-1)载体在肿瘤溶瘤病毒治疗及基因转导中具有广泛的应用前景。本研究报道一种基于CRISPR-Cas9系统的高效快速的重组HSV-1载体构建方法。首先,双顺反表达靶点g DNA和Cas9核酸酶的基因编辑质粒与同源重组模板质粒共转染Vero细胞后,用亲本株感染细胞;然后,Cas9对胞内病毒基因组定点切割,诱导外源基因同源重组,修复至病毒基因组指定位点。通过PCR、Western印迹、免疫荧光等方法证明,相比于传统自发同源重组的构建方法,该方法能显著提升病毒重组率(4.1%vs 1.1%)。同时,本研究建立了一种新的单克隆病毒纯化方案,简化了阳性病毒筛选步骤。本研究结果提供了一种高效快速的重组HSV-1构建方法,这对于HSV-1相关基因治疗及其病理机制研究将具有重要意义。     

单纯疱疹病毒2型衣壳支架蛋白ICP35原核表达载体的构建及其表达特性分析

本研究旨在构建单纯疱疹病毒2型(herpes simplex virus type 2,HSV-2)衣壳支架蛋白ICP35的原核表达载体,并分析其在HSV-2增殖中的表达特性。以HSV-2基因组DNA为模板,采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增HSV-2 ICP35的编码基因UL26.5,并克隆至原核表达载体pET-32a(＋),转化大肠埃希菌BL21(DE3)进行诱导表达,将纯化的重组ICP35免疫家兔后获得抗体,采用免疫荧光检测ICP35在HSV-2增殖中的表达特性。结果显示,HSV-2 UL26.5基因的PCR产物大小约为1 065 bp,原核表达重组蛋白的相对分子质量约为6.3×10⁴,免疫家兔的血清抗体可特异性识别HSV-2 ICP35。免疫荧光检测结果显示,HSV-2 ICP35可在感染后8 h出现于细胞核周围,12 h表达量进一步增加并向细胞核内聚集,16 h后在细胞核、细胞质内均可检测到聚集成斑点状的衣壳支架蛋白。结果表明,HSV-2 ICP35原核表达载体的成功构建及对其在HSV-2增殖中表达特性的分析,将为研究UL26.5基因的功能、蛋白相互作用、病毒与宿主的相互作用及筛选药物靶标等奠定基础。