肺炎衣原体单克隆抗体的研制和应用

目的:以杂交瘤技术制备抗肺炎衣原体(Cpn)单克隆抗体,用于衣原体感染的诊断及相关疾病的研究。方法:以进口Cpn抗原免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠的脾脏细胞与SP2/0细胞融合,用间接ELISA法筛选抗体阳性杂交瘤细胞。收集接种过杂交瘤细胞的小鼠腹水,分别用ELISA法检测抗体效价、用免疫琼脂扩散试验鉴定单抗的类别、用微量荧光免疫试验(MIF)检测单抗的种属特异性。用克隆表达的主要外膜蛋白(MOMP)通过Dot-ELISA法分析单抗的特异性。通过建立直接免疫荧光法(DIF)检测病人和正常人外周血单核细胞(PBMC)标本,并进行统计处理。结果:小鼠脾脏细胞与SP2/0细胞的融合率为61.46%(236/384),最终获得4株稳定分泌Cpn单抗的细胞株。用ELISA法检测小鼠腹水,效价高者可达1∶100000。免疫琼脂扩散试验鉴定为IgG类单抗,扩散效价达1∶128。自制单抗能与重组MOMP发生结合反应,表明其为抗CpnMOMP抗体。自制单抗与进口单抗类似,即与鹦鹉热衣原体(Cps)出现一定程度的交叉反应,而与沙眼衣原体(Ct)则无交叉反应。对240份PBMC标本用自制单抗和进口单抗同时检测Cpn抗原,2种单抗检测均阳性的共86份,经SPSS软件分析两者具有较好的一致性。DIF检测显示,心血管疾病和呼吸道疾病Cpn抗原阳性检出率分别为69.34%(95/137)和72.06%(49/68),与正常人标本Cpn抗原阳性率相比,均具有显著性差异。结论:获得IgG类抗CpnMOMP单抗,自制Cpn单抗的特异性和敏感性均与进口单抗具有较好的一致性。PBMCCpn抗原检测的统计分析证实,对于动脉粥样硬化等某些疾病的发生和发展,Cpn感染可能是重要的原因之一,但其中的因果关系还有待深入研究。     

一步法定点突变技术快速构建bsh基因突变启动子

目的：建立一种高效便捷的定点突变方法,为基因表达调控以及蛋白质结构和功能的研究提供技术支撑。方法：以构建单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）中编码胆碱水解酶（bile salt hydrolase,BSH）的bsh基因突变启动子为例,采用一对完全互补并带有突变位点的引物扩增携带bsh基因启动子的重组质粒DNA全序列,通过DpnⅠ消化PCR产物中剩余的甲基化的模板DNA,酶切后的PCR产物直接转化大肠杆菌,从而获得含有突变启动子的重组质粒。结果：通过一步法定点突变技术成功构建了bsh基因的三种突变启动子。结论：该方法简单高效,只要把握好对引物设计,高保真的DNA聚合酶、模板DNA的浓度以及PCR扩增程序的选择,突变成功率可以达到100%。     

美国马里兰罗克维尔生物技术研究实验室(有限公司)研制一套测定人体血液里抗EB病毒(EBV)的抗体水平的商品酶免疫测定(EIA)仪

<正> EB病毒是传染性单核细胞增多症的一种病原体,也是鼻咽癌和Burkitts淋巴瘤的一种病毒。这套新仪器是根据通过单克隆抗体分离出的一些特异性病毒抗原研制的。据报道,这套仪器所利用的EIA技术可以提供很大数量的样品供技术员每小时分析使用,并用分光光度测定法测定其结果,与前测定系统比较,用这种分光光度测定得出的分析结果具有更高的客观     

RPLU术对重度肾积水的上尿路结石患者尿ET-1、AQP-1、MCP-1水平的影响

摘要 目的：探讨后腹腔镜下输尿管切开取石术（RPLU）对重度肾积水的上尿路结石患者尿内皮素-1（ET-1）、水通道蛋白-1（AQP-1）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）水平的影响。方法：收集2018年4月~2019年11月我院收治的106例重度肾积水的上尿路结石患者为研究对象,按照随机数字表法分为对照组和研究组,每组53例,对照组采用输尿管镜取石术治疗,研究组采用RPLU术治疗,对比两组手术情况,手术前后血红蛋白、肾功能、尿ET-1、AQP-1、MCP-1水平,手术并发症发生情况。结果：研究组手术时间及住院时间多于对照组,结石清除率高于对照组,比较差异有统计学意义（P<0.05）;两组术中出血量、术后排气时间比较差异无统计学意义（P>0.05）。术后,两组血红蛋白较术前无显著差异（P>0.05）。术后,两组血肌酐及血尿酸氮均下降,两组比较差异无统计学意义（P>0.05）。术后,两组尿ET-1、AQP-1、MCP-1水平均下降,两组比较无统计学意义（P>0.05）。两组并发症总发生率比较无统计学意义（P>0.05）。结论：RPLU术是治疗重度肾积水的上尿路结石清除率高,创伤小,可作为重度肾积水伴上尿路结石安全、有效的术式。     

五种鲤科幼鱼外周血白细胞形态和细胞化学的研究

鱼类外周血白细胞同高等脊椎动物血液中的白细胞一样,是机体细胞和体液免疫的重要成分,是快速诊断疾病的有效指标。       

辽宁省食品中单核细胞增生李斯特菌污染调查分析

目的 分析2019年辽宁省市场出售食品的单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)污染情况,初步确定该菌易引起的高危食品种类,为食品风险监测提供参考。方法 从我省13个监测点中共抽取753份不同种类食品样本,根据国标法GB4789.30-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验》对样本进行L.monocytogenes菌株的分离及生化鉴定。结果 样品中检出L.monocytogenes 22株,检出率为2.9%(22/753)。污染最严重的是冷冻鱼糜制品9.4%(12/128),其次为预制半成品3.6%(8/221)和熟肉制品1.0%(2/196)。结论 辽宁省市售食品存在不同程度L.monocytogenes污染,尤以冷冻鱼糜制品污染较为突出,应继续加强对市售食品L.monocytogenes的检测及监管能力。     

不同诱导因子对人外周血单个核细胞P2X7受体表达的作用

ATP激活P2X7受体可产生一系列的白细胞功能反应,因此P2X7受体的表达调控引起我们的兴趣。然而P2X7受体在正常人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)、单核细胞中的表达调控机制尚未阐明。本文用半定量RT-PCR方法检测多种细胞因子、细菌抗原、丝裂原对P2X7受体表达的诱导作用,探索P2X7受体的诱导表达模式。结果表明,单个核细胞和单核细胞可检出P2X7受体的表达;白细胞介素2、4、6(interleukin-2、-4、-6,IL-2、IL-4、IL-6)、肿瘤坏死因子仪(tumour necrosis factor-α,TNF-α)等细胞因子和金黄色葡萄球菌CowanⅠ株(Staphylococcus aureus Cowan strainⅠ,SAC)、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)能上调PBMC的P2X7受体表达,而γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、粒-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)、巨噬细胞集落刺激因子(macmphage colony-stimulating factor,M-CSF)和植物血凝素(phytohemagglutinin-M,PHA-M)等则没有作用;LPS和M-CSF可以提高单核细胞的P2X7受体表达,IFN-γ、TNF-α、GM-CSF作用较弱,但是这些因子的预处理并不能增强LPS对P2X7受体表达的诱导。炎症因子促进P2X7受体的表达,提示P2X7受体可能在对抗细菌感染的免疫反应中起一定作用,这有待于进一步研究。     

产单核细菌李氏菌毒力因子的分子遗传学研究进展

产单核细菌李氏菌（ＬＭ）是重要的食品卫生污染菌，其毒力由多基因决定。本文就其已发现的产毒基因们点、基因克隆、重组和表达、毒力 调控以及基因产物的功能作一简介 。     

P48—Triggered transmembrane signaling transduction of human monocytes：modilization of calcium ion and activation of protein kinase C（PKC）

P48 is a cytokine which induces monocyte differentiation and the induction of cytotoxic activity.In this study,the signal transduction events involved in the stimulation of monocytes with the membrane form of P48 (mP48) were investigated.Monocyte stimulation with mP48 was found to involve the mobilization of intracellular calcium(Ca^2 ) and the activation and translocation of PKC from the cytosol to the membrane.Membane P48 induced a rapid rise of intracellular Ca^2 in a dose dependent maner.Similarly,the stimulation of monocytes with P48 was found to involve the activation and translocation of PKC.The translocation of PKC was rapid(within 0-5min) yet transient with PKC activity returning to control levels by 8 min.The functional role of protein kineses in P48 induced TNF secretion was studied using various kinese inhibitors.The PKC inhibitors,H-7 and sphingosine,were found to inhibit P48 induced TNF secretion with 50% inhibition at 5μM.HA1004,which inhibts cyclic nucleotide-dependent kinase(PKA,Ki 1.2μM),did not inhibit TNF secretion.H-8(PKA inhibitor) was found to be an effective inhibitor of TNF secretion only at high concentrations(30μM).The Calmodulin-dependent kinase inhibitor,W7(Ki 12μM) was found to be effective at concentration above 5μM.These findings suggest that P48-triggered TNF secretion involves transmembrane Ca^2 signaling and the subsequent activation of at least two protein kineses,PKC and CaMK.