光果甘草毛状根培养过程中对活性氧清除能力和总黄酮含量的变化

采用化学发光法, 分析了光果甘草(Glycyrrhiza glabra L.)毛状根培养过程中对3种活性氧(ROS: O-2(÷)、HO·和H-2O-2)清除能力的动态变化, 并测定了培养过程中总黄酮含量的动态变化. 实验结果表明, 毛状根在对数生长期(20～28 d)对3种ROS都有很强的清除能力,在生长停滞期(29～40 d)对HO·和H-2O-2的清除能力仍维持较高的水平,而对O-2(÷)的清除能力随培养时间的延长逐渐下降.总黄酮含量在对数生长期呈现增加的趋势,至31 d时达到最高含量(0.78%),随培养时间的延长含量逐渐降低.     

罗氏海盘车（Asterias rollestoni Bell）体腔细胞及免疫功能的初步研究

目的:本文在体外条件下观察了罗氏海盘车体腔细胞的形态特征.方法:采用镜下观察和化学发光法并在液体闪烁仪(LS-5801)检测.结果:观察发现罗氏海盘车的体腔细胞可分成:大颗粒细胞(桑椹细胞)、小颗粒细胞、大透明细胞、小透明细胞、柳叶形细胞、兼性大细胞和杆状颤动体;体腔细胞的浓度范围是:5.62～10.00 × 106个/mL.吞噬观察中发现小颗粒细胞伪足明显、吞噬力强,在不同温度下吞噬率和吞噬指数不同,14℃下最高,分别为:62.6%和2.06.体腔细胞在吞噬过程中也会产生呼吸爆发现象,产生活性氧(O2)、(H2O2)、(OH.)、(1O2)等.在适宜条件下,体腔细胞吞噬酵母的化学发光规律随时间移动为一条有单峰值的曲线;在不同环境条件下,pH=6.81时,化学发光最明显;在外界诱导物刺激下,酵母悬液浓度为1.00× 107cell/mL时,化学发光最明显.结论:罗氏海盘车体腔细胞发挥了重要的免疫功能.     

2种治疗药物监测结果分析

目的:通过对治疗药物(462例地高辛、171例氨茶碱)的血药浓度监测,提出个体化给药建议,以有效指导临床合理用药。方法:用全自动微粒子化学发光免疫分析系统(EMIA)测定地高辛和氨茶碱在病人体内的血药浓度,进行血药浓度监测。结果:浓度在有效范围内比例逐年上升,低于治疗范围的比例较高,高出治疗范围的比例较低,我院共监测地高辛血药浓度462例,在有效血药浓度范围(0.8μg·L~(-1)～2μg·L~(-1))248例,有效率为53.7%;氨茶碱血药浓度171例,在有效血药浓度范围(10mg·L~(-1)～20mg·L~(-1)) 83例,有效率为48.5%。结论:该方法快速、敏感、简便,本研究提示在应用地高辛和氨茶碱等安全范围窄的药物时,应注意血药浓度监测(TDM),并密切注意患者的生理、病理、联合用药等影响因素。     

模拟表位结合夹心化学发光法检测抗A和抗B效价

目的:获得A/B血型抗原的模拟多肽,并将其与夹心化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay, CLIA)相结合,以开发更有效的方法来测量A/B抗体的效价。方法:分别用NaM87-1F6和HEB-29对噬菌体12肽库进行三轮淘选。对经酶联免疫吸附实验(ELISA)确定的阳性菌斑进行测序分析,根据其氨基酸组成合成模拟多肽,并通过竞争性ELISA、凝集抑制等方法检测其抗原性。随后将获得的模拟多肽与CLIA结合,检测A、B抗体效价,制作标准曲线以及与现有的微柱凝胶法(CAT)进行相关性对比。结果:经过三轮淘选和相关鉴定后得到13个与抗A抗体和19个与抗B抗体特异性相互作用的噬菌体克隆,其中分别有9个(MTRIQLRMMRLH)和12个(PQMSRHRMRMLP)展示相同的氨基酸序列,据此合成的多肽分别命名为MTR和PQM。竞争性ELISA结果表明,MTR能够特异性拮抗A抗体和A抗原的替代多肽的免疫结合;PQM能够特异性拮抗B抗体和B抗原的替代多肽的免疫结合。凝集抑制实验表明MTR/PQM可以特异性抑制A/B型红细胞与抗A/B之间的相互作用。结合模拟肽的夹心CLIA具有较宽的线性范围(2-2048)和良好的线性相关系数(对于A抗体R~2=0.9566,对于B抗体R~2=0.9762)。基于CLIA方法和CAT测得的抗体滴度结果高度相关(P0.001)。结论:MTR和PQM有良好的A或B抗原性,具有成为其人工替代品的潜能。模拟多肽与夹心CLIA相结合能够实现对A、B抗体滴度的定量检测,且其结果准确可靠。     

植物中活性氧的检测方法

主要对超氧阴离子自由基(O2-·)、过氧化氢(H2O2)等活性氧的检测方法,包括化学发光法、分光光度法、荧光染色法,EPR波谱学方法、DAB组织染色法和电子显微技术检测法等进行了综述,并简单介绍了最近发展起来的一些新技术。     

子痫前期循环系统标志物sFlt-1的重组表达及化学发光检测方法的建立

目的：表达可溶性fms样酪氨酸激酶-1(soluble fms-like tyrosine kinase-1,sFlt-1)重组蛋白,建立针对sFlt-1的化学发光检测方法。方法：构建pcDNA3.4-sFlt-1-His*6表达载体,转染至HEK293细胞进行重组表达。利用链霉亲和素-生物素亲和体系及双抗体夹心法,实现对sFlt-1的定量检测。结果：该方法的最低检测限为2 pg/mL,线性范围为20～40 000 pg/mL,平均回收率为92%,批内及批间精密度变异系数(variable coefficient, CV)均小于10%,与珀金埃尔默sFlt-1检测试剂盒进行比对的相关系数R²为0.925 2。结论：获得了具有天然生物活性的sFlt-1蛋白,建立了具有良好性能的sFlt-1检测方法,后续进一步开发可应用于子痫前期的诊断筛查。     

人C-反应蛋白磁微粒化学发光酶免疫测定法的建立

人C-反应蛋白(C-reactive protein, CRP)是炎症以及各种相关疾病如病毒感染、心血管疾病等诊断、治疗和预后的临床检测指标。为了建立一种快速、准确的CRP定量免疫测定方法,将表达纯化的重组CRP作为抗原免疫小鼠,获得了5株稳定分泌抗体的单克隆抗体细胞株,采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay, DAS-ELISA)初步鉴定筛选的抗人CRP单克隆抗体,并分别选择m Ab 9D6和m Ab 9G4作为捕获抗体与检测抗体,建立用于人CRP检测的化学发光酶免疫测定法(chemiluminescence enzyme immunoassay, CLEIA),最后通过测定分析临床血清CRP样本,评价CLEIA的性能。结果显示,基于9D6/9G4-AP单克隆抗体对的CLEIA测定范围为0.176 7～500μg/L (可扩展至100 mg/L);所建立的CLEIA与医院采用的免疫散射比浊法(R2:0.949 6, P<0.000 1)表现出良好的相关性,且Bland...     

增强化学发光免疫分析技术

将抗体或抗原以共价键或其它形式与酶偶合,形成酶标记抗体或酶标记抗原。酶标记抗原或抗体保留免疫学活性和酶学活性,因而既有抗原抗体反应的特异性,又有酶促反应的生物学放大作用。     

氧离子辐射对体外人精子自化学发光,运动性,顶体反应和存活率的影响

Effects of 16O+6 ion irradiation with different doses on human sperm spontaneous chemiluminescence (SCL), motility, acrosome reaction (AR) and viability were examined. Spermatozoa were irradiated with 0, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 8, 16, 32, or 64 Gy 16O+6 ion beam at the energy of 3.17 MeV/u. After irradiation, samples were analyzed by SCL measurement at 1, 2 and 3 h of incubation; motility was determined by the transmembrane migration method within 2 h of incubation; the percentage of AR and viability was evaluated by the triple-stain technique at 3.5 h of incubation. The results showed: sperm SCL was significantly increased with irradiation doses and the lowest effective dose was 0.5 Gy; compared with controls, the transmembrane migration ratio of spermatozoa progressively elevated with irradiation doses at 0.5, 1, and 2 Gy; the percentage of sperm AR markedly increased in 0.5-4 Gy irradiation and the optimal dose was 2 Gy, and then significant decreased with further increase of irradiation doses; the viability had no significant change within 0.25-8 Gy, but was progressively decreased at 16, 32 and 64 Gy. These data suggested that heavy ion at low doses increased motility and AR, whereas had deleterious effects at higher doses, which are associated with free radical reactions induced by heavy ion irradiation.     

6个不同产地的太子参对超氧自由基清除作用的研究

采用邻苯三酚自氧化一化学发光体系,应用智能化学发光法对６个不同产地的太子参物的超氧自由基清除能力进行测定。研究结果表明６个不同产地的太子参均具清除超氧自由基的作用,其中以安徽广德产地的太子参抑制自由基能力最强,其半数抑制率达０．５０４６４ｇ／ｍｌ。研究表明,各产地太子参均具稳定的非酶类清除超氧自由基的ＳＯＤ样作用物质。本文对快速检测不同产地的同种药用植物抑制超氧自由基的能力并筛选其优质资源提供了研