化学发光蛋白芯片用于检测肝癌患者血清CA19-9水平的方法研究

目的:探讨一种简单、有效、低成本、低耗时的化学发光蛋白芯片方法用于检测血清中的糖链抗原19-9(Carbohydrate Antigen19-9,CA19-9),以有助于对原发性肝癌的早期辅助诊断。方法:预先在醛基芯片上包被鼠源CA19-9单克隆抗体,建立CA19-9抗体蛋白芯片,共筛选出46份肝癌血清和32份正常健康人血清,然后用蛋白芯片方法进行检测,并以化学发光成像对检测结果进行判定。结果:24份肝癌血清的CA19-9水平高于37 U/m L,22份肝癌血清的CA19-9水平低于37 U/m L;30份正常人血清CA19-9含量低于37 U/m L,2份正常人血清的CA19-9含量为37 U/m L;灵敏度为52.17%,特异性为93.75%,ROC曲线下面积0.688[95%CI:0.566,0.811]。结论:本研究成功的建立了血清CA19-9的化学发光蛋白芯片检测方法。     

蝮蛇毒和眼镜蛇毒对全血化学发光的影响

目的研究蝮蛇毒和眼镜蛇毒对吞噬细胞的免疫抑制作用。方法以氢化可的松为阳性对照物,用化学发光法测定样品清除非细胞体系产生的活性氧,以及样品对酵母多糖诱导的全血化学发光的抑制作用。结果蝮蛇毒和眼镜蛇毒对非细胞体系产生的Ｏ·２和Ｈ２Ｏ２的清除作用都较弱;对全血化学发光有抑制作用,特别是酵母多糖起刺激作用之前加入蛇毒的抑制作用强于酵母多糖起作用之后加入蛇毒的抑制作用。这提示,这两种蛇毒使吞噬细胞的吞噬免疫功能下降,造成吞噬细胞的呼吸爆发减弱,导致活性氧产生不足,化学发光强度下降。眼镜蛇毒的这种免疫抑制作用比氢化可的松还强。结论蝮蛇毒和眼镜蛇毒具有氢化可的松样的免疫抑制作用,其中眼镜蛇毒可能具有作为临床免疫抑制剂使用的价值。     

化学发光法检测体外HBV复制

目的:建立化学发光法检测体外HBV复制水平的方法,研究其灵敏度和稳定性.方法:用HBV DNA重组质粒pCH9转染到人肝癌细胞株HepG2和Huh7中,5d后收集细胞并抽提其HBV复制中问体DNA,转印后以地高辛标记HBV DNA为探针进行杂交,用化学发光法检测杂交结果,同时进行探针灵敏度的检测.结果:转染后HepG2和Huh7细胞提取HBV DNA中检测出较强的复制中间体的信号,分别为松散环状DNA(rcDNA),双链线性DNA(dslDNA),单链DNA(ssDNA),探针检测的灵敏度可达到lpg,接近同位素法检测的灵敏度.整个实验重复3次获得同样结果.结论:成功建立了稳定的化学发光法检测体外HBV复制水平的方法.     

UVA诱发的1O2和O2-·产生与脂质过氧化水平关系的研究

紫外A(UVA,320 nm-400 nm)诱发的脂质过氧化反应是通过活性氧(ROS)介导的。在UVA照射之后,单线态氧(1O2)和超氧阴离子(O2-.)是细胞内最初产生的ROS,它们进一步生成过氧化氢(H2O2),羟自由基(.OH)等其它自由基。为了探讨UVA照射后最早生成的1O2和O2-.与细胞氧化损伤后果的关系,我们采用一种特异性检测1O2和O2-.的高灵敏度化学发光探针MCLA(2-methyl-6-(4-methoxyphenyl)-3,7-dihydroimid-azo[1,2-α]pyrazin-3-one hydrochloride)检测人外周血淋巴细胞经UVA照射后的化学发光变化。发现不同剂量UVA照射后,细胞MCLA化学发光变化和MDA浓度变化一致。结果表明UVA照射后1O2和O2-.的水平与由此引发的脂质过氧化损伤存在正相关关系。因此,MCLA化学发光方法可望作为一种检测UVA诱发脂质过氧化水平的简单快速方法。     

沉淀敲出法快速发现霍山产铁皮石斛生物碱及其组分抗氧化活性在线测定

为了给霍山产铁皮石斛药效物质基础研究及抗氧化活性物质快速发现提供依据,在预实验基础上,采用鲁米诺-双氧水发光体系作为羟自由基清除活性评价平台,HPLC-UV-CL联用在线测定了铁皮石斛生物碱部位各组分清除自由基活性。以磷钼酸、碘-碘化钾为沉淀试剂敲出总生物碱提取物中生物碱组分,对比敲出前后HPLC图谱变化,确定铁皮石斛的生物碱组分。结果表明,在本实验条件下,霍山产铁皮石斛中检出的5种生物碱中有4种可降低鲁米诺-双氧水发光体系的发光值。HPLC-UV-CL可用于铁皮石斛生物碱清除自由基活性快速测定。实验结果可为铁皮石斛质量控制、抗氧化活性成分定向分离的研究提供依据。     

化学发光法测定葡萄糖

葡萄糖在葡萄糖氧化酶作用下氧化生成葡萄糖酸和过氧化氢,用化学发光法可以测定生成的过氧化氢,从而知道葡萄糖的含量。本法所需样品量少,快速方便,灵敏度较比色法高,适用于大量样品的分析,如血糖,也可用于测定葡萄糖氧化酶、过氧化物酶、过氧化氢以及金属离子等。测定方法包括葡萄糖的氧化和发光强度的测量两个步骤。     

人血PMN呼吸爆发中活性氧测定的探讨——化学发光法

本文利用辣根过氧化物酶作为生理pH条件下PMN-鲁米诺化学发光催化系统。借以提高测定活细胞发光灵敏度。选用不同自由基清除剂对爆发反应中活性氧的生成影响进行了初步探讨。超氧化物歧化酶对细胞发光抑制较过氧化氢酶显著,Con A诱导的发光亦较其他刺激物为低,提示超氧化物阴离子系细胞爆发反应中含量水平较高,且对发光影响较大的活性氧。     

肝素结合蛋白单克隆抗体制备及应用

[目的]制备抗肝素结合蛋白(HBP)单克隆抗体,并应用抗体构建HBP磁微粒化学发光(CLIA)检测方法.[方法]采用细胞融合技术制备抗体、间接ELISA法测定效价、SDS-PAGE测定抗体纯度、分子互作仪测定亲和力,通过分子互作仪筛选抗体配对,建立磁微粒化学发光检测方法,并对其灵敏度、特异性等分析性能进行评估.[结果]...     

血栓调节蛋白化学发光免疫分析检测方法的建立*

目的:建立并评价基于板式化学发光免疫分析(CLIA)平台的血栓调节蛋白(TM)定量检测方法。方法:以链霉亲和素包被微孔板,加入待检血浆,偶联生物素和辣根过氧化物酶的配对抗体组成分析体系,采用双抗体夹心模式,建立TM抗原定量检测方法,并对其进行条件优化和性能评价。结果:生物素化抗体和酶标抗体的工作浓度分别为0.5 μg/mL和0.75 μg/mL,加样后的孵育时间选为15 min,最低检测限为0.2 TU/mL,该检测方法的检测范围为1~200 TU/mL,批间和批内精密度(CV)均小于8%,37 ℃ 10天稳定性良好,207份临床血浆测值与希森美康测值相关性较高(R²>0.96)。结论:建立了TM板式化学发光定量检测方法,且各项性能指标良好,可满足临床检测的需要。     

尿酸酶—一鲁米诺化学发光传感器

研制了依赖于鲁米诺化学发光反应和固定化尿酸酶柱的测定血清尿酸的生物传感器。其测定血清样品响应时间４７ｓ。测定每份样品需时１．５ｍｉｎ,样品体积１７ｕｌ。工作曲线的线性范围１￣２０ｍｇ／ｄｌ。批内不精密度３．２２％￣４．３６％;批间６．１８％￣７．８％。测定值回收率为９３％￣１０９％。与医院常规酶试剂盒方法比较相关系数ｒ＝０．９９０９。固定化尿酸酶柱室温使用,４℃冰箱保存,连续使用５个半月测定样品２