包埋前原位TUNEL标记凋亡淋巴细胞的电镜观察

目的用包埋前原位尾端标记技术在电子显微镜下发现小鼠淋巴结生发中心早期凋亡细胞。方法用GA,PA,PLP分别固定淋巴组织,将其分别切成50μm切片,TUNEL染色,制成1μm切片光镜确认,着色部位制成超薄切片,在电镜下,进行比较观察。结果GA固定的组织中细胞核的TUNEL染色,虽然表面清晰可见,但对组织渗透性较差;PA固定的组织清晰度稍差,但渗透性最好,在电子显微镜下观察效果满意,PLP固定染色效果差,在细胞凋亡的早期,用PA染色时凋亡的细胞核内,可见尚未出现凋亡的生发中心细胞核形态学改变以及核染色质浓缩的核。结论以PA固定的组织,用包埋前技术、TUNEL染色的方法具有简便,染色清晰,易分辨,特异性强的特点,且未见标本损坏现象。     

作用于HBV（adr亚型）RNA的tRNA—包埋锤头状核酶的研究

设计了针对ＨＢＶ（ａｄｒ亚型）ＲＮＡ的二个锤头状核酶（ＲＳ３和ＲＣ２）,并将其插入ｔＲＮＡ反密码环中（ＲｔＳ３和ＲｔＣ２）,以增加其稳定性。实验表明,虽然插入ｔＲＮＡ中的核酶与裸露核酶相比,催化活性有所下降,但在胎牛血清和ＨｅｐＧ２细胞抽提液中的稳定性却明显提高。因此,ｔＲＮＡ－包埋核酶有可能提高在体内的抗病毒能力。     

石蜡包埋组织的DNA提取及其在免疫球蛋白基因重排分析中的应用

基因重排分析在淋巴瘤诊断中具有重要意义.文章应用改良DNA提取方法,从30例淋巴增生性病变石蜡包埋组织获得的DNA虽有不同程度的降解,但适于PCR扩增Ig重链基因重排分析;约1/3病例提出高分子量DNA,可用于DNA印迹杂交.因此,石蜡包埋组织同样可为某些疾患,如淋巴瘤疑难和罕见病例的回顾性分子病理学研究提供基因诊断的DNA来源.     

甲醛固定石蜡包埋组织4种DNA提取方法的比较分析

本研究以10例甲醛固定石蜡包埋组织（FFPET）作为疑难检材,将其制成蜡膜,分别以二甲苯-Chelex100法、脱蜡液-Chelex100法、脱蜡液-Vazyme FastPure FFPE DNA Isolation试剂盒（简称FP试剂盒）、脱蜡液-北京天根石蜡包埋组织基因组提取试剂盒法（简称天根试剂盒）提取DNA,进行紫外分光光度计测定（浓度、纯度）及短串联重复序列（STR）分型检测（23个常染色体）,通过比较分析FFPET在4种不同提取方法中的提取质量、STR分型质量和检出率,从而寻求一种高效简便、经济实用、方便快捷的甲醛固定石蜡包埋组织中DNA提取方法。结果表明：应用4种方法提取的石蜡包埋组织蜡膜DNA经紫外分光光度计测定后显示,应用2种Chelex100法提取的DNA浓度高于2款试剂盒,试剂盒提取的DNA的纯度优于另外2种方法,以上差异均具有统计学意义（P<0.05）;FP试剂盒提取DNA的平均浓度和纯度均优于天根试剂盒,无显著性差异（P>0.05）;STR分型普遍存在不同基因座和同一基因座不同等位基因之间的扩增不均衡,呈现前高后低状态;STR平均检出率为FP试剂...     

石蜡包埋组织芯片制作的探讨

组织芯片(tissue chip)技术是将数十个到上百个的组织样本整齐有序地排列在同一张载玻片上而形成的微缩组织切片,又称组织微阵列(tissue microarray)技术.     

常温和低温下保存小新月菱形藻的包埋-脱水法

用包埋.脱水法在常温和低温下保存小新月菱形藻(Nitzschla closterium f.minutissima),探讨了温度、光(暗)、含水量,密封袋内空间体积和密封袋外膜材质等因素对保存效果的影响.结果表明,小新月菱形藻在4℃下暗保存6个月后的最高存活率达到80.4%.而且,保存后的藻细胞经过恢复培养后,其生长力可达到保存前的水平.包埋.脱水法操作简单.无需复杂设备,在藻类种质保存中有广阔的应用前景.     

不同组织在石蜡包埋中的方法和体会

在石蜡切片制作过程中,组织包埋是一重要环节,不同组织和病变的包埋则有所不同,包埋位置直接影响切片和对病变的观察,现将我们在工作中的包埋方法和体会介绍如下：     

采用常规电泳设备建立CLARITY透明脑技术

目的:CLARITY是一种全新的组织形态学研究技术,在脑结构与功能研究中具有重要用途。探讨能否采用常规电泳设备开展该项技术。方法:从ICR雌性小鼠取得新鲜脑组织,依次进行多聚甲醛组织固定、聚丙烯酰胺水凝胶包埋、SDS电泳洗涤,通过拍照记录结果。结果:多聚甲醛固定和水凝胶包埋后的脑组织呈乳白色,柔软富有弹性;电泳洗涤后的脑组织从周边开始逐渐透明化,至洗涤第10 d时呈现均匀的半透明状态,可用于三维神经网络原位分析。结论:研究结果为采用常规电泳设备开展CLARITY技术提供了基础数据。     

修饰血红蛋白作为红细胞代用品的研究进展和挑战

血源紧缺和病毒污染问题推动了血液代用品的研究,以血红蛋白为代表的红细胞代用品成为研究的重点。为克服血红蛋白直接使用的毒副作用,各种修饰技术得到了迅速发展,其中包括双阿司匹林交联、戊二醛交联、棉子糖交联、聚乙二醇偶联、脂质体包埋、生物可降解高分子包埋等。其中一些技术已经形成规模化制备工艺,产品进入临床试验,有的已在个别国家上市。鉴于这项研究意义重大,我国有关研究已经起步并正在迅速发展,各国同行的研究有重要的参考价值,因此有必要对近年来血红蛋白作为红细胞的代用品研究状况进行分析,明确面临的挑战,这将有利于发展更全面和有效的研究方案,以期取得突破性进展。     

染色体DNA琼脂糖包埋法辅助的ExoCET技术克隆放线菌天然产物生物合成基因簇

【目的】本研究旨在通过将琼脂糖包埋染色体DNA的方法与ExoCET重组技术相结合,建立放线菌天然产物生物合成基因簇的捕获方法。然后将克隆基因簇导入通用底盘宿主中,实现目标生物合成基因簇的异源表达。【方法】首先,利用低熔点琼脂糖包埋技术制备菌株的染色体基因组总DNA,再用限制性内切酶消化含有染色体DNA的琼脂块,获得线性化的DNA样品;然后利用ExoCET重组技术,以p15A线性载体片段将目标基因簇线性片段进行捕获;再通过PCR-targeting的方法向目标质粒中引入所需的接合转移DNA元件。接着,将改造质粒通过接合转移导入到Streptomyces coelicolor M1252宿主中,获得不同的重组菌株。最后,对不同的菌株进行发酵并提取化合物,最后进行活性检测以及质谱检测。【结果】通过该方法,从菌株S.lincolnensisNRR2936中成功获得了林可霉素生物合成基因簇(lmb-BGC),从菌株Nonomuraea nitratireducens WYY166^T中克隆得到了2个核糖体肽类化合物的生物合成基因簇(nioblantin,niob-BGC和nitblantin,nitb-BGC),并实现了lmb-BGC在天蓝色链霉菌M1252中的成功表达。【结论】本研究通过将低熔点琼脂糖包埋技术与ExoCET重组技术进行合理整合,定向克隆得到了林可霉素以及2个新颖的羊毛硫肽类化合物的生物合成基因簇。然后,分别对重组质粒改造后,在天蓝色链霉菌M1252宿主中进行表达,分别获得重组菌株MJX01、MJX02和MJX04。最后,利用质谱以及活性测试的手段对发酵提取物进行了检测,确定了林可霉素生物合成基因簇在天蓝色链霉菌M1252中成功表达。本研究为通过基因簇克隆和异源表达发掘新化合物奠定了基础。