意蜂蜂王浆超氧化物歧化酶的分离纯化及部分性质

以意蜂Apis mellifera蜂王浆为材料,经过硫酸铵分段盐析,DEAE-Sepharose 柱层析和Sephacryl S-200凝胶过滤,得到纯化的超氧化物歧化酶(SOD),纯化倍数104.00,比活力53.05 U/mg。该SOD经SDS-PAGE显示单一蛋白带。温度对该酶活力的影响较小。Cu、Zn、Fe和Mn等元素含量测定发现该酶只含有Cu和Zn。酶经圆二色谱测定后,其α螺旋、β折叠和无规则卷曲蛋白构型的含量分别为26.1%、53.8%和22.0%。等电聚焦电泳测得酶的等电点为4.69、4.85和5.01。NR/R单向和双向SDS-PAGE表明该酶含有链内二硫键。氨基酸组成分析发现该酶由约402个氨基酸残基组成,其中Asp、Gly、Leu、Ala、Glu和Val的含量较高。脲可抑制SOD活性,并使其紫外光谱发生变化,荧光发射峰强度变小。溴乙酸（BrAc）抑制酶的活力,使其紫外光谱发生变化,荧光发射峰强度变小。二巯基苏糖醇（DTT）使酶的活力发生变化,紫外吸收峰增大,荧光发射峰变小。     

养殖乌鳢类立克次体分离纯化的初步研究

1989年,Fryer等从导致智利海水养殖Coho salmon(Oncorhynchus kisutch)90%死亡率的病鲑组织感染的鲑细胞系中首次分离得到一种类立克次体(Kickettsia like organism,RLO)并命名为Piscirickettsia salmonis gen.nov.,sp.nov.。近十年来,这种被日益重视的、专性细胞内寄生的RLO(细胞内的细菌),已被证实为导致鱼类严重传染性疾病的致病因子.2001-2002年,作者首次发现湖北省某养殖场淡水养殖乌鳢(Op hiocep halus argus C.)突发性大规模发病死亡系RLO感染引起。由于乌鳢细胞系的建立尚在进行之中,因此从病变组织直接进行RLO的分离、纯化对进一步开展病原体分类及快速、准确的诊断技术等分子生物学研究至关重要。       

原代小鼠肝脏细胞的高效分离纯化与培养

目的：建立一种能稳定获得高活力和高纯度原代小鼠肝脏细胞的分离、纯化及培养方法。方法：应用改良的Seglen 二步法原位灌注和机械离心分离肝脏细胞,并用改良的高糖DMEM培养基进行培养。台盼蓝拒染法检测接种时肝脏细胞的存活率,倒置显微镜动态观察肝脏细胞形态变化,应用免疫荧光技术对肝脏细胞进行Albumin 染色。结果：每只小鼠可获取肝脏细胞的总产量平均为1.35× 10^6 / g体重,肝脏细胞存活率＞ 90%。倒置显微镜下观察贴壁前肝细胞直径为35.14 滋m± 4.35 滋m,肝脏细胞在接种后3 h基本完成贴壁;肝脏细胞接种后24h,所有肝脏细胞均强阳性表达成熟肝脏细胞标志物Albumin,肝细胞纯度＞ 95%。结论：改良的分离纯化及培养方法能稳定获得高产量、高活率及高纯度的小鼠肝脏细胞。     

细菌非编码小RNA的筛选及鉴定方法

细菌非编码小RNA（smallnon．codingRNAs,sRNAs）是一类长度为50～500nt、不编码蛋白质的功能RNA,在应对胁迫、毒力产生和新陈代谢等生命过程中起重要的调控作用。其主要通过碱基配对与靶mRNA发生作用,导致mRNA翻译和稳定性改变,从而在转录后水平调节基因的表达,最终影响细菌各种生命活动。近年来,利用生物信息学和分子生物学技术,已在细菌中筛选并鉴定得到了几百个sRNA。该文对细菌sRNA的筛选和鉴定方法作一简要综述。     

人工海水胁迫下小麦种质资源的耐盐性筛选与鉴定

利用人工配制的海水筛选耐盐性较好的小麦品种,为沿海滩涂地区的小麦耐盐育种提供重要信息。本研究利用人工海水处理的方法,对363份小麦种质资源进行了芽期耐盐性初步鉴定,筛选出芽期耐盐性为1级的小麦种质28份。进一步对芽期耐盐性较好的48份小麦种质进行了苗期耐盐性鉴定,并对其耐盐指标进行隶属值模糊评价分析,从中鉴定出了2个苗期耐盐性较强的小麦种质,分别为淮麦31和红壳洋麦。依据来源的不同,发现小麦种质资源的芽期耐盐性大小依次为地方品种>育成品种>国外引进品种。小麦芽期与苗期的耐盐性相关分析表明,二者相关性极低(r=-0.0051)。     

2016-2018年兰州市某医院急性下呼吸道感染患儿RSV分离及流行病学特征分析

目的 对2016-2018年甘肃省妇幼保健医院门诊和住院急性下呼吸道感染患儿进行呼吸道合胞病毒(Respir-atory syncytial virus,RSV)的分离及流行病学特征分析.方法 收集患儿呼吸道分泌物425份,在Vero细胞上进行3代盲传,对培养收获液进行反转录聚合酶链反应(reverse transcr...     

异麦芽寡糖促进肠道分离菌生长的体外实验

目的 观察添加１％异麦芽寡糖对从正常人阑尾标本中分离双歧杆菌、乳杆菌和类杆菌的体外促生长作用。方法 分别在培养前和培养１２、２４、３６ｈ和４８ｈ,用７２１分光光度计和ｐＨ计测定培养液ＯＤ值和ｐＨ值变化。结果 接种双歧杆菌的培养液ＯＤ值从０．１２８增加到１．７,ｐＨ值由７．１降到４．２,增殖效果与添加１％葡萄糖相当。接种乳杆菌的培养液ＯＤ值从０．１７增加到０．８５,ｐＨ值由７．０降到４．８,增殖效果低于添加１％葡萄糖。接种类杆菌的培养液ＯＤ值从０．１０５增加到１．６５,ｐＨ值由７．１降到５．１,增殖效果高于添加１％葡萄糖。结论 添加１％民麦芽寡糖具有促进肠道分离菌双歧杆菌、乳杆菌和类杆菌生长的作用。     

高速逆流色谱法分离纯化茶黄素

首次应用高速逆流色谱法分离纯化茶黄素单体成分,溶剂系统为乙酸乙酯－正己烷－甲醇－水（３：１：１：６）,优化了分离茶黄素的条件。同时与ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０柱色谱法梯度洗脱对比,结果表明,高速逆流色谱法分离时间相对较短,可进行较大量的分离制备。高速逆流色谱法较之ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０柱色谱法还有一个突出的优点,即无不可逆吸附污染及不会导致样品化学变性。     

砷污染土壤中毛球菌的分离及其砷还原特性

生物异化还原作用是地球化学循环中的重要部分,其对环境污染物具有良好的治理作用。从湖南省石门县的土壤中分离出1株厌氧砷还原菌,通过16S rRNA分析为毛球菌属,命名为Trichococcus sp.CC328。菌落圆形,无色透明,短杆状革兰阴性菌,最适生长条件为p H 9,Na Cl浓度12-16 g/L。当As(V)的初始浓度为63mg/L时,24 h时细胞数目最多(18×108个/m L),48 h时砷还原率为83%;当Fe(III)的初始浓度为30 mg/L,72 h时还原率为37%。本研究是首次发现具有砷和铁还原能力的毛球菌,为土壤中砷的生物转化提供参考。