ROMA在卵巢上皮性癌早期诊断中的研究进展

卵巢上皮性癌(Epithelial ovarian cancer,EOC)死亡率居妇科恶性肿瘤首位,早期诊断可明显改善患者预后。人附睾上皮分泌蛋白(human epididymis protein 4,HE4)对早期EOC的检测敏感性高,有助于对EOC高危患者的筛选,与CA125可互补,增加盆腔包块患者中EOC早期诊断力度。HE4与CA125联合检测及结合绝经状态预测盆腔包块患者中卵巢恶性肿瘤的发病风险模型(Risk of Ovarian Malignancy Algorithm,ROMA),能成功预测盆腔包块患者中EOC高风险个体,对卵巢良恶性肿瘤的鉴别预测更为准确且更易被接受,有较大的临床应用价值。     

干细胞植入缺血大脑后功能研究进展

目前,干细胞移植在多个中枢神经系统疾病的研究和临床应用中取得突破性进展。其中,干细胞移植治疗脑缺血疾病是细胞移植治疗研究中最活跃的领域。但是,移植细胞是否具有神经元的功能及细胞移植治疗的机制目前存在很多争议。本文就干细胞移植治疗缺血性脑疾病后移植细胞的功能和治疗缺血性脑疾病机制的可能途径的研究情况作一综述。     

人骨形成蛋白-7成熟肽基因在巴斯德毕氏酵母中的分泌表达

目的:利用甲醇酵母表达系统,构建重组人骨形成蛋白-7(rhBMP-7)成熟肽的基因工程菌,并实现其分泌表达。方法:采用PCR方法,依据GenBank数据库中hBMP-7成熟肽序列(AccessionNo.NM_001719)设计并合成一对引物,从已构建的含hBMP-7的克隆载体中扩增获得人骨形成蛋白-7成熟肽基因片段,并以pPIC9K为表达载体构建重组表达质粒,电转化巴斯德毕氏酵母SMD1168,于30℃进行甲醇诱导分泌表达,经筛选获得rhBMP-7成熟肽表达株,并进行了表达产物的活性测定。结果:表达产物存在于培养上清中,约占分泌蛋白总量的8%。经Western印迹分析可以检测到重组表达产物,ELISA检测其具有特异性结合活性。结论:构建了重组人骨形成蛋白-7成熟肽的基因工程菌并在甲醇酵母中实现了分泌表达,为进一步的活性及功能研究奠定了基础。     

重组阿拉伯糖苷酶在毕赤酵母中的分泌表达及其活性分析

假密环菌是一种果树腐病菌,具有较强的分解代谢纤维素的能力。本文根据已克隆出的阿拉伯糖苷酶基因序列（Accession Number AJ620046）设计引物从假密环菌的mRNA中克隆出阿拉伯糖苷酶的ORF片段,构建重组质粒pPIC9-AF,与组氨酸标签融合,电转化毕赤酵母菌GS115并进行诱导表达。所得到的重组阿拉伯糖苷酶在30-35℃时有较高的酶活,最适反应活性pH值在6.0-8.0之间,而在pH4.0－8.0范围内酶活基本保持在80%以上,比大多已报道的阿拉伯糖苷酶最适pH范围宽。本研究工作对于高效表达重组阿拉伯糖苷酶以及对其进一步的酶学性质研究提供了一个良好的基础。     

臭虫分泌特殊信息素避免同性交配

臭虫的交配是一个暴力事件。雄臭虫通过用自己的阴茎刺穿雌臭虫的肠道来向后者授精。然而,由于这种小虫无法识别不同的性别,因此同性交配时有发生。     

智能注射器

儿童生长激素分泌不足可以通过长时期的每天注射生长激素,使得儿童的生长水平达到正常儿童的生长速度。使用传统注射器,每次注射都需要先设置生长激素注射剂量。手续麻烦。     

重组人GALNT3-sol蛋白在毕赤酵母中的高效表达和活性鉴定

目的:为了获得有催化活性的人乙酰半乳糖胺转移酶3(GALNT3),构建了GALNT3可溶性区域(GALNT3-sol)的真核分泌表达载体,在巴斯德毕赤酵母中表达并纯化GALNT3-sol蛋白,体外检测其转糖基活性。方法:以构建好的pET15b/GALNT3-sol为模板进行PCR,扩增编码人GALNT3-sol的cDNA片段(1 755 bp),将其克隆至真核表达载体pPIC9K,载体线性化后采用电击法转化毕赤酵母GS115。通过MD平板和G418平板筛选出阳性高拷贝重组菌株。阳性菌株经过甲醇诱导表达人GALNT3-sol重组蛋白,表达上清进行Ni-NAT分离纯化。分别采用SDS-PAGE和Western blot鉴定纯化的重组蛋白,并使用HPLC和MALDI-TOF/MS分析其转糖基化反应的活性。结果:成功构建了能够分泌表达GALNT3-sol的毕赤酵母菌株。阳性表达菌株在BMMY培养基(pH 6.0)中20℃培养,经0.5%甲醇诱导表达96 h,摇瓶表达量可达5mg/L。SDS-PAGE和Western blot结果显示表达重组蛋白为糖基化形式。活性检测显示表达的重组蛋白具有转糖基活性。结论:成功获得可以高效分泌表达具有活性的人GALNT3-sol蛋白的毕赤酵母菌株,为进一步研究人GALNT3的性质及其应用提供了基础。     

缺氧环境下MSCs促进血管内皮细胞增殖和血管形成

目的 探讨成人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells BMSCs)在体外缺氧环境下对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖和血管形成能力的影响及其可能机制.方法密度梯度离心法收集分离成人骨髓血MSCs并进行体外培养扩增,传代至4代进行实验,流式细胞仪鉴定MSCs表面标志.BMSCs缺氧培养0h(对照组)、12h、24h和48h后,RT-PCR检测SDF-1和VEGF基因表达,ELISA法检测细胞上清液中SDF-1和VEGF蛋白含量.HUVECs传代培养后分成三组进行实验:对照组、BMSCsCMN-HUVECs组,BMSCsCMH-HUVECs组,MTT检测三组细胞增殖能力,体外血管形成实验分析三组细胞在Matrigel上管腔样结构形成情况.结果 (1) BMSCs呈旋涡状长梭形即纤维母细胞样生长;(2) 人BMSCs阳性表达CD29、CD44和CD90,而CD34、CD45和CD106为阴性;(3) BMSCs缺氧培养后SDF-1和VEGF在mRNA和蛋白水平表达均较常氧培养显著增高(P均<0.05);(4) BMSCsCMH明显提高HUVECs增殖能力(P<0.05),显著增加HUVECs在Matrigel上形成管腔样结构的能力(P<0.05).结论 人BMSCs在缺氧环境下通过旁分泌SDF-1和VEGF提高血管内皮细胞增殖和管腔样结构形成能力,促进血管新生.     

糖尿病不同发展阶段胰岛功能的变化趋势*

目的:研究糖尿病不同发展阶段胰岛素敏感性及胰岛素分泌功能的改变,指导2型糖尿病的早期诊断。方法:57例行OGTT体检者,分为NGT、IGT、IFG+IGT、新诊断T2DM四组,并行IVGTT,采用HOMA-IR评估胰岛素敏感性,采用葡萄糖处置指数[DI1=HOMA-β/HOMA-IR,DI2=ΔI30/ΔG30/HOMA-IR,DI3=MBCI×IAI,DI4=AIR0-10/HOMA-IR]及AUCINS/HOMA-IR评估胰岛素分泌功能。结果:IGT、IFG+IGT、新诊断T2DM组HOMA-IR无统计学差异(P>0.05),均显著高于NGT组(P<0.05)。IGT、IFG+IGT、新诊断T2DM组DI1逐步降低(P<0.05);NGT、IGT组DI1无统计学差异(P>0.05)。NGT、IGT、IFG+IGT、新诊断T2DM组DI2、DI3、DI4逐步降低(P<0.05)。IFG+IGT、新诊断T2DM组OGTTAUCINS/HOMA-IR逐步降低(P<0.05),且显著低于NGT组(P<0.05);NGT、IGT组OGTTAUCINS/HOMA-IR无统计学差异(P>0.05)。结论:(1)IGT阶段胰岛素抵抗及胰岛素1相、早期相分泌功能的下降同时存在。IFG+IGT阶段胰岛素1相、早期相分泌进一步下降,并出现基础相、2相分泌的减少,胰岛素抵抗加重不明显。新诊断T2DM阶段胰岛素各相分泌进一步减少,胰岛素抵抗加重不明显。(2)在T2DM发生过程中,胰岛素分泌功能下降较胰岛素敏感性下降更为明显。(3)胰岛素抵抗及胰岛素1相、早期相分泌功能的下降是T2DM的预测因子。(4)IFG+IGT阶段应积极干预。     

自分泌运动因子受体在大鼠胃肠的定位

目的 研究自分泌运动因子受体在大鼠胃肠的表达及分布特点。方法应用免疫组织化学方法染色。结果在大鼠胃壁内有自分泌运动因子受体的表达,免疫反应产物主要定位于胃底腺,阳性细胞胞体大,胞核呈阴性,小肠和大肠组织均呈阴性反应。结论正常大鼠胃底腺有自分泌运动因子受体的表达,提示可能参与胃腺的多种生理活动。