1株高效菲降解不动杆菌的筛选、鉴定及性能研究

从兰州某化工厂石油废水中分离筛选出1株高效降解菲的细菌F-1并对其菌种进行鉴定,结合紫外分光光度法及气相色谱-质谱联用(GC-MS)对菌株生长特性、不同烃类化合物降解特性及菲降解动力学等进行了研究,利用PCR技术检测了芳香烃代谢相关基因。结果表明,菌株F-1属于约翰逊不动杆菌(Acinetobacter johnsonii),可在终浓度为50～800 mg/L的含菲基础培养基中正常生长。在温度30℃、pH 7. 0、盐度0. 3%(质量分数)、转速180 r/min条件下培养5 d后菲(终浓度为100 mg/L)降解率为43. 57%,降解过程符合一级动力学特征。菌株F-1也能利用联苯、萘、蒽、芘为唯一碳源生长。GC-MS分析显示菌株对C10-C28部分直链烷烃具有较强的降解能力。PCR扩增结果表明,菌株F-1基因组中存在邻苯二酚-1,2-双加氧酶、苯甲酸盐双加氧酶、铁氧化还原蛋白还原酶、乙醇脱氢酶、二羟酸脱水酶、醛缩酶和氧化还原蛋白基因。研究结果为该菌株应用到含菲废水及多环芳烃污染土壤的处理和深度修复研究提供参考。     

碳氮比对固氮菌株WN-F合成胞外多糖的影响北大核心CSCD

从沈阳农业大学棕壤长期定位试验站的栽培玉米土壤样品中分离筛选到高产多糖固氮菌株WN-F,从菌株鉴定、培养条件优化和固氮与产糖关系进行初步研究。对其进行形态学观察和分子生物学鉴定,酶标仪分析菌体生物量法确定菌株的生长培养条件,并分析其固氮与产糖之间的关系。结果表明,该菌株为阿氏芽孢杆菌,并命名为Bacillus aryabhattai WN-F。WN-F菌株在37℃,180 r/min情况下12 h时生长量达最高值。其培养基优化配方为(L^(-1)):蔗糖20.0 g,牛肉膏2.0 g,KH_2PO_4 0.4 g、MgSO_4·7H_2O 0.4 g、NaCl 0.4 g、CaSO_4·2H_2O 0.4 g和CaCO_3 2.0 g。菌株WN-F的产糖情况随着初始氮浓度的增加,呈现出抛物线关系,适宜碳氮比促进菌体合成胞外多糖。Bacillus aryabhattai WN-F是长期定位试验玉米土壤中的优势菌株,高产胞外多糖且有固氮作用,是发挥玉米联合固氮作用,减少化肥施用的候选菌株。     

信号肽对亮氨酸脱氢酶在Bacillus subtilis中分泌表达的影响及酶学性质研究

根据信号肽N端电荷数,选择Sec及Tat两种途径的信号肽构建枯草芽孢杆菌穿梭质粒,首次实现Bacillus cereus源亮氨酸脱氢酶基因在Bacillus subtilis中的分泌表达。Tat途径信号肽Pho D促进蛋白质分泌的效果最好,胞外酶活力达20.25U/ml,为不添加信号肽的2.2倍,信号肽N端较多的电荷数,可能有利于多聚体蛋白的分泌。对表达产物进行纯化和酶学性质测定。结果表明,纯酶比酶活为13U/mg;L-Leucine为底物时酶的K_m为6.17mmol/L,V_(max)为14.49μmol/(L·min);底物特异性研究发现,酶与天然底物L-Leucine的亲和性最好,对一些脂肪族氨基酸也有活性,对芳香族氨基酸L-Phenylalanine无活性;酶的最适pH为10.5~12.0,pH稳定范围为5.0~11.0;最适反应温度为55℃;圆二色谱变温扫描酶二级结构变化,α螺旋含量随温度升高逐渐降低;差示扫描微量热技术(DSC)测定酶的解折叠温度(Tm值)为64.13℃,表明该酶具有较好耐热性。     

鲍曼不动杆菌基因分型技术的研究进展

鲍曼不动杆菌为非发酵糖类革兰阴性杆菌,具有强大的获得耐药性和克隆传播的能力,广泛分布于医院环境,是医院内感染的重要病原菌之一。因此,建立精准、高效的鲍曼不动杆菌基因分型技术,是开展其医院内感染流行病学研究和临床防控的重要工具。本文就近年来鲍曼不动杆菌基因分型技术的研究进展进行综述,并分析比较多种基因分型技术的原理、优点、局限性及应用范围。     

洗涤剂用碱性纤维素酶的研究(I)——产酶菌种的选育及发酵条件

从土壤中分离获得碱性纤维素酶产生菌嗜碱芽孢杆菌ＳＨＹ８－１,经紫外线（ＵＶ）、亚硝基胍（ＮＴＧ）、甲基磺酸乙酯（ＥＭＳ）诱变及反复的自然分离和压力选择,获得高产变异株ＳＨＹ８－５７２５,产酶量由０．８９８ｕ／ｍｌ提高到１５～２０ｕ／ｍｌ,对影响产酶的各因素进行了分析测试。     

不同品系小鼠对实验感染念珠状链杆菌敏感性的观察

本文通过念珠状链杆菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｕｓｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ,Ｓ．ｍ．）实验感染昆明、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ、ＢＡＬＢ／ｃ、ＩＣＲ、ＮＩＨ、ＤＢＡ共６个品系小鼠,观察其对Ｓ．ｍ．敏感性的差异。其中昆明、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ两个品系在腹腔接种后表现出明显的临床、病理改变。昆明小鼠发病率和死亡率分别为９２％和８０％;Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ分别是８０％和１２％。昆明小鼠较之Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠起病急、病情严重,多数动物死于感染的急性期。其余品系的发病率为：ＮＩＨ８％、ＢＡＬＢ／ｃ和ＤＢＡ４％,没有动物死亡;ＩＣＲ在接种后无任何临床病理改变。在实验感染后临床病理改变方面,昆明小鼠和Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠间有较大不同。昆明小鼠以末梢血管淤血、四肢尾部水肿、关节炎、截瘫、腹泻为主,而Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠则以注射部位和其它部位皮下脓肿、化脓性关节炎为主。本研究提示,中国昆明小鼠对Ｓ．ｍ．敏感性最高,可以将其作为“哨兵动物”用于实验大鼠Ｓ．ｍ．的常规监测;不同品系小鼠不仅对实验感染Ｓ．ｍ．的敏感性不同,而且表现出不同的临床病理改变。     

乳杆菌DM8909对大肠杆菌粘附阴道上皮细胞抑制作用的研究

本文对乳杆菌ＤＭ８９０９对大肠杆菌粘附阴道上皮细胞的抑制作用进行了研究。采用３Ｈ－ＴｄＲ将由阴道分离的大肠杆菌进行同位素标记。刮取健康妇女阴道上皮细胞与其进行体外粘附试验作为对照组,试验组先行阴道上皮细胞与乳杆菌ＤＭ８９０９粘附后,再加入标记的大肠杆菌。结果显示：试验组阴道上皮细胞粘附的大肠杆菌的ｃｐｍ值明显低于对照组（Ｐ＜０．０５）,说明乳杆菌ＤＭ８９０９能有效地抑制大肠杆菌对阴道上皮细胞的粘附。     

开发利用土壤杆菌的无标记植物性状转化法

日本烟草产业（ＪＴ）公司成功地开发了可从性状转化植物高效地去除选择性标记的利用土壤杆菌的无标记性状转化法。不仅限于双子叶植物,也能进行单子叶植物水稻的基因导入。ＪＴ公司在川崎市召开的日本育种学会上发表了该项成果。在植物的性状转化中使用了卡那霉素等基因,但是,如果能排除标记,就能反复使用单一标记,所以希望此法能在需要导入代谢系基因群等多种基因时使用。因此,选择标记的去除法是植物重组育种必需的技术。ＪＴ公司开发的载体是在其１９９４年开发的、土壤杆菌（不仅能向双子叶植物中导入基因而且也能向水稻和玉米等…     

无色杆菌蛋白酶Ⅰ肽链N端作用的突变研究

无色杆菌蛋白酶Ⅰ是高度专一于赖氨酸的丝氨酸蛋白酶,比较其它典型同类蛋白酶的一级结构,该酶的成熟体肽链在Ｎ端和Ｃ端分别长出９个和２６个氨基酸残基。在其Ｎ端设计和构建一些突变体。它们分别具有缩短或延长的Ｎ端。这此突变体低于天然酶的活性和稳定性的结果揭示,Ｎ端这部分延长在稳定该酶的活性构象方面起着重要作用。     

工业化生产格瓦斯的研究

选用保加利亚乳杆菌、乳酸乳球菌及产脱假丝酵母同于工业化格瓦斯生产。采用麦芽与焦香麦芽为原料,经保加利亚乳杆菌、乳酸乳球菌和产肮假丝酵母发酵生产格瓦斯,该产品香气浓郁,味道醇厚。