小胶质细胞在神经病理性疼痛中的作用

神经病理性疼痛对患者的生理和心理健康都有着极大的影响。近几年来的研究表明,外周神经炎症或损伤激活的小胶质细胞通过表达及释放一系列介质分子,在神经病理性疼痛的产生和传递通路中发挥重要的调制作用。激活的小胶质细胞与神经元之间信息交互传递从而影响痛敏行为的这一崭新模式极大地推进了人们对于疼痛的理解。同时也为以小胶质细胞作为靶点,开辟镇痛药物治疗的新方法提供了理论依据。     

PTD-hEGF融合蛋白在大肠杆菌中的表达及活性分析

为获得hEGF在大肠杆菌中的高效表达,构建了pPTD-hEGF原核表达载体。将其转化大肠杆菌BL21(DE3),经0.3mmol/LIPTG诱导,PTD-hEGF融合蛋白进行了有效表达,表达产物主要形成了包涵体。经Ni2 -NTA亲和层析纯化,融合蛋白的纯度达99.5%。MALDI-TOF-MS分析证明表达的融合蛋白氨基酸序列完全正确。PTD-hEGF融合蛋白能明显促进HEK-293细胞的分裂和生长。     

Spindle-view系统在猪卵母细胞去核中的应用

应用Spindle-view对体外成熟培养36、42、44和48h的猪体外成熟卵母细胞减数分裂纺锤体进行去核操作,并与传统去核方法(McGrath-Solter去核法,挤压去核法)相比较,结果表明:①在42~48h之间利用Spindle-view得到的猪卵纺锤体影像与极体的相对位置没有明显的变化;②Spindle-view适合用于猪体外成熟卵母细胞减数分裂纺锤体的观察及去核;去核效率与其他两种方法相比差异极显著(95.5%,42.1%,74.2%,P<0.01);③纺锤体成像是否清晰可用于猪卵母细胞的质量监控。     

细胞渗透肽的研究近况

细胞渗透肽是一类能携带大分子物质进入细胞的短肽,其跨膜能力不依赖经典的胞吞作用,被认为是一种理想的运载工具,在将蛋白质和其他分子导入活细胞的研究中有着广泛的应用前景.该文着重介绍细胞渗透肽的跨膜转运机制及其应用等.     

Giemsa-C带揭示的绵枣儿多倍体复合体染色体变异

绵枣儿是分布在东亚的多倍体复合体。以Giemsa-C带法对分布在中国的绵枣儿24个居群进行了染色体变异分析。AA和BB细胞型大部分居群未发现变异,分别具a2和b1染色体的近着丝点着丝粒带。AABB虽无居群内变异,但居群间有所不同。其中柳林、商南和徐州居群带型相同,带纹丰富。元宝山居群只有b1的近着丝粒带,而灵岩山居群具a2和b1的近着丝粒带。根据已有的研究资料推测,绵枣儿b1和a2上的近着丝粒带显示的应当是高度重复的rRNA基因;大庆和文县居群一个体该位点的杂合可能是由于部分rRNA拷贝的同源染色体间转移;AABB起源后随时间推移会发生rRNA重复位点的丢失;柳林等居群丰富的带纹可能是其刚刚起源时重复基因关闭的表征,随时间推移同样可能会丢失。另外大量的实验证据表明,BB比AA细胞型可能更易于发生染色体结构变异。     

四种前体对胀果甘草细胞悬浮培养生产甘草黄酮的调控效果评价

在胀果甘草细胞悬浮体系中加入苯丙氨酸、酪氨酸、肉桂酸和乙酸钠来研究前体对甘草细胞生产甘草黄酮的影响。结果显示,4种前体在合适的浓度下对细胞的生长没有明显的抑制作用,而且均能促进细胞内甘草黄酮的生物合成,但高浓度的肉桂酸对细胞的生长有一定的抑制作用。苯丙氨酸的最佳添加浓度为20 mg/L,酪氨酸、肉桂酸、乙酸钠的最佳添加浓度都是5 mg/L。此时,均可使培养体系的甘草黄酮产量高达100 mg/L以上,其中酪氨酸的添加使得产量高达对照的1.43倍。苯丙氨酸、肉桂酸和乙酸钠3种前体的添加时间均以第10天为宜,酪氨酸添加时间以第5天为最佳。而且,在添加苯丙氨酸和乙酸钠后的第3天收获细胞,此时细胞的生物量和甘草黄酮产量最大。此外,苯丙氨酸、乙酸钠的添加可以增加黄酮合成的关键酶之一——苯丙氨酸裂解酶的活性。酪氨酸对苯丙氨酸裂解酶影响不大,而肉桂酸的添加却导致其活性显著降低。     

阿米洛利抑制NHE-1减轻低氧性肺动脉平滑肌细胞增殖

目的：研究Na^＋／H^＋交换抑制剂阿米洛利对低氧刺激的大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）增殖的影响,以及Na^＋／H^＋交挟体-l（NHE-1）活性和表达的变化.方法：常氧（21％O2）或低氧（2％O2）条件下培养PASMCs,并分别给予浓度为1．653、3．125、6．25、12．5、25和50μmol／L．等不同浓度的阿米洛利,培养24h,采用MTT比色实验和免疫组化检测PCNA阳性细胞率的方法反映细胞增殖情况,同时采用激光共聚焦检测细胞内pH以反映Na^＋／H^＋交换体-1活性,RT—PCR法检测Na^＋／H^＋交换体-1mRNA的表达量.结果：低氧培养的PASMCs细胞内pH升高,NHE—1mRNA的表达增多,而阿米洛利可以降低细胞内pH,减少NHE—1mRNA的表达量。同时低氧较常氧培养MTT光吸收值较常氧培养明显升高。PCNA阳性细胞率明显增高,而给予阿米洛利时上述两个指标随药物浓度增加而逐渐下降。结论：低氧可以激活PASMCs细胞膜上的E—1,增加其mRNA水平表达量,使细胞内碱化,促进细胞增殖,而Na^＋／H^＋交换抑制剂阿米洛利可以抑制其活性,减少mRNA水平的表达,导致细胞内酸化,从而抑制细胞增殖,并且此抑制作用在3．125～50μmol／L．浓度范围内呈现明显的浓度依赖性。     

氧化应激条件下G6PD对Raji细胞内GSH水平的影响

目的：观察体外培养的Burkit淋巴瘤（Raji）细胞在氧化应激条件下细胞内葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）对还原型谷胱甘肽（GSH）水平的影响。方法：体外培养Raji细胞,分别在G6PD活性被抑制及不抑制的情况下,检测细胞在酚嗪甲酸硫酯（PMS）作用后60min及360min时G6PD、谷胱甘肽还原酶（GR）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）活性及GSH水平。结果：在PMS作用下,Raji细胞内GSH水平在60min时显著下降（P〈0．01）而360min时可上升至对照组水平,G6PD及GPx活性持续显著升高（P〈0．01）而GR活性在360min时有显著升高（P〈0．01）;使用脱氢表雄酮（DHEA）抑制G6PD活性后,Raji细胞再在PMS作用下,细胞内各指标与PMS处理组比较,GSH水平显著降低（P〈0．01）,GPx活性在60min时显著增高（P〈0．05）而GR活性在360min时显著降低（P〈0．01）。结论：细胞在氧化应激条件下G6PD可能是Raji细胞内影响GSH水平的一个关键因子,对维持胞内GSH水平起重要的调节作用。     

L-硝基精氨酸对大鼠急性脑缺血损伤后炎症因子及细胞凋亡的影响

目的：观察L-硝基精氨酸（L—NA）对局灶性脑缺血损伤后炎症因子和神经细胞凋亡的影响。探讨L—NA保护脑缺血损伤组织的作用机制。方法：健康雄性SD大鼠,体重250—280g,随机分为3组（n=10）：假手术组（SH组）、缺血组（IS组）、L—NA治疗组（L—NA组）。IS、L—NA组采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血损伤模型。L-NA组每次腹腔注射L—NA20mg／kg,每日2次,连续3d。IS组给予等量的生理盐水。将大鼠断头取脑,采用免疫组化法检测脑组织中TNF—α表达变化,放免法检测IL-1β水平变化,流式细胞仪测定脑组织神经元凋亡率、Bcl-2蛋白、Bax蛋白表达及Bcl-2蛋白与Bax蛋白比值（Bcl-2／BaX）。结果：与SH组比较,IS组脑缺血灶范围内TNF-α表达明显增强,IL-1β水平显著升高,神经凋亡率及Bax蛋白表达升高,Bcl-2／BaX降低;与IS组比较,L—NA组脑缺血灶范围内TNF-α表达及IL-1β水平显著降低,神经凋亡率降低,Bcl-2蛋白表达及Bcl-2／BaX升高,Bax蛋白表达降低结论：L—NA通过抑制TNF-α和IL-1β的升高,增加Bcl-2蛋白表达,降低Bax蛋白表达,调节Bcl-2／Bax平衡,对脑缺血大鼠脑神经元产生一定程度的保护作用。     

A novel heterodimeric cytokine consisting of IL-17 and IL-17F regulates inflammatory responses

CD4＋ helper T （TH） cells play crucial roles in immune responses. Recently a novel subset of TH cells, termed THIL-17, TH 17 or inflammatory TH （THi）, has been identified as critical mediators of tissue inflammation. These cells produce IL-17 （also called IL-17A） and IL-17F, two most homologous cytokines sharing similar regulations. Here we report that when overexpressed in 293T cells, IL-17 and IL-17F form not only homodimers but also heterodimers, which we name as IL-17A/F. Fully differentiated mouse THi cells also naturally secrete IL-17A/F as well as IL-17 and IL-17F homodimeric cytokines. Recombinant IL-17A/F protein exhibits intermediate levels of potency in inducing IL-6 and KC （CXCL 1） as compared to homodimeric cytokines. IL-17A/F regulation of IL-6 and KC expression is dependent on IL-17RA and TRAF6. Thus, IL-17A/F cytokine represents another mechanism whereby T cells regulate inflammatory responses and may serve as a novel target for treating various immune-mediated diseases.