HIV-1 C亚型密码子优化gp120基因重组腺病毒载体的构建及表达

目的构建含有HIV-1C亚型gp120基因重组腺病毒载体,并在293细胞中表达gp120蛋白。方法PCR扩增,获得HIV-1C亚型gp120片段,定向克隆人腺病毒转移载体pTrack-CMV,线性化后转化至含有腺病毒骨架载体pAd-easy-1的大肠埃希菌BJ5183,获得重组子prAd—gp120,PacI酶切纯化后转染293细胞,包装成复制缺陷型重组腺病毒vAd—gp120。结果经PCR、酶切及DNA测序,插入片段大小、方向正确,获得了具有感染力的vAd—gp120重组腺病毒;通过Western印迹检测,重组腺病毒在293细胞中表达出分子量为120kD的蛋白。结论成功构建了含有HIV-1C亚型gp120基因重组腺病毒载体,并获得该基因的表达。     

接种变栖克雷伯氏菌DX120E对不同甘蔗品种的促生效应

为探究具有高固氮酶活性的变栖克雷伯氏菌DX120E回接甘蔗后的固氮能力和促生效应,以甘蔗品种B8和GT21的无菌组培苗为材料,采用根部接种的方法,研究固氮菌DX120E在甘蔗体内的定殖数量及其对甘蔗组培苗植株生长、氮代谢关键酶活性和硝态氮含量及矿质元素吸收的影响.结果表明： 固氮菌DX120E能在甘蔗根和地上部分组织内生存和定殖;接种固氮菌DX120E可以有效促进甘蔗植株生长和对矿质营养的吸收;显著提高甘蔗植株体内的硝酸还原酶(NR)活性,同时也能在一定程度上提高植株体内谷氨酰胺合成酶(GS)活性,增加硝态氮含量.表明变栖克雷伯氏菌DX120E对甘蔗具有明显的促生效应,在生物固氮肥开发方面具有较大的应用前景.     

与血液相关的3种常见疾病

1 贫血病,指人体在单位体积中的血红蛋白浓度、红细胞计数低于正常最低值。如我国成年男性血红蛋白低于120g／L，成年女子低于110g／L即可诊断为贫血。贫血常是指一种症状，而不是一个独立的疾病。人体各个系统的疾病均可引起贫血，如慢性肾病、各种病原所致慢性感染、各种原因所引起的失血等。与中学学习相关的常见贫血主要是以下2种。     

亚洲主要流行HIV-1 Gp120及其5个高变区多态性分析

HIV-1 Gp120及其5个高变区的多态性是HIV-1能够逃逸宿主免疫反应和耐药性的主要原因。下载了现有数据库中记载的包括B’、C、CRF01_AE、CRF07_BC和CRF08_BC 5种亚洲主要流行亚型和重组型的所有Gp120及其5个高变区序列,分析了HIV-1 Gp120及其5个高变区序列的长度多态性,糖基化位点数以及序列特征。结果显示,绝大部分的HIV-1 Gp120序列长度为496～515个氨基酸之间,这提示Gp120长度为496～515个氨基酸的HIV-1毒株可能是疫苗研究的理想毒株。比较5个高变区,V3区表现出了最低的长度多态性,几乎没有糖基化位点,表明受到较强的功能限制。不同亚型和重组型的V3区一致序列比较发现,所有的HIV-1亚型均表现为R5型。这提示阻断HIV-1病毒结合CCR5受体是治疗艾滋病的有效途径,R5型毒株可以作为艾滋病疫苗研究的理想毒株。另外,V1和V4区展现了很高的长度多态性,糖基化位点也较多;而V2和V5区的长度多态性和糖基化位点都较低。这些结果表明降低这4个高变区的多态性和糖基化位点数目可能解决HIV-1病毒对疫苗的逃逸,从而研究出真正有效的疫苗。     

共同受体CCR5与HIV gp120的相互作用及相关肽类抑制剂

存在于巨嗜细胞、树突状细胞等胞膜上的G蛋白偶联受体CCR5作为R5嗜性的HIV-1病毒的主要共同受体,可以和病毒的表面糖蛋白gp120相互作用,并由此决定了病毒的另一表面糖蛋白gp41融合构象的形成以及随后的病毒与细胞的膜融合。CCR5在细胞膜上迅速移动,并与其他分子(如CD4和胆固醇)存在相互作用,加速了与gp120的作用。CCR5的这种中心作用已经使其成为抗HIV-1药物研究的很有吸引力的靶点。目前已发现一系列衍生于CCR5的胞外区的多肽、天然存在的蛋白质以及设计的多肽,可干扰CCR5与gp120之间的相互作用,从而抑制病毒复制。     

表现神经症状的SIVmac251感染猴大脑基底节病毒gp120序列变异分析

目的 研究猴免疫缺陷病毒SIVmac251在中国恒河猴感染传代过程中产生的可能的神经侵袭性和神经嗜性及其分子机制.方法 从静脉感染SIVmac251-155p6N的8只实验猴中出现严重神经症状的1只猴中,监测病毒及免疫指标变化,观察临床症状、猴脑组织病变,单拷贝PCR扩增病毒gp120序列并分析变异及糖基化位点变化情况.结果 感染猴晚期出现明显艾滋病脑病症状,病理切片显示脑组织出现多核巨细胞及神经元变性、坏死.脑基底节分离出单一序列病毒,其氨基酸序列与血浆病毒及感染毒株SlVmac251-155p6序列差异主要位于Gp120的V1和V4区,并且在C1区66位出现一个糖基化位点缺失.结论 SIVmac251在猴体长期传代过程中表现出神经嗜性毒株的特征,对AIDS脑病研究具有重要意义.     

共表达HIV-1中国流行株gp120与IL-18重组鸡痘病毒的构建及其免疫原性观察

为筛选我国的HIV-1疫苗候选株,以鸡痘病毒282E4中国疫苗株为载体,构建了共表达中国流行株HIV-1外膜蛋白gp120和IL-18的重组鸡痘病毒,并将该重组鸡痘病毒免疫BALB/c小鼠,检测免疫小鼠脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体水平。结果显示,HIV_1外膜蛋白gp120和IL-18不但可在重组鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞中表达,而且可在重组鸡痘病毒感染的哺乳动物细胞中表达。重组病毒具有良好的免疫原性,可诱导小鼠产生特异性抗体和脾特异性CTL反应,且IL_18发挥了免疫佐剂的作用。本研究结果为制备安全、有效的HIV-1基因工程活载体疫苗奠定了基础。     

乳腺癌超声征象与ER、PR、连环蛋白p120、癌基因CerbB-2、原癌基因Her-2/neu表达的关系研究

目的:探讨乳腺癌超声征象与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、连环蛋白p120、癌基因CerbB-2、原癌基因Her-2/neu表达的关系。方法:将2014年10月至2017年10月我院收治的50例乳腺癌患者纳入本研究,术前获得患者完整乳腺超声图像资料,术后通过免疫组织化学法检测ER、PR、CerbB-2、Her-2/neu和p120的表达情况。记录超声检查与组织标本检测结果,比较不同乳腺癌超声征象中ER、PR、CerbB-2、Her-2/neu和p120的表达情况。结果:p120阴性表达率为62.00%,ER阳性表达率为50.00%,PR阳性表达率为36.00%,CerbB-2阳性表达率为74.00%,Her-2/neu阳性表达率为30.00%。病灶边缘有毛刺征、周边有高回声晕征、无淋巴结转移患者的ER阳性表达率高于病灶边缘无毛刺征、周边无高回声晕征、淋巴结转移者(P0.05);病灶边缘有毛刺征、周边有高回声晕征患者的PR阳性表达率高于病灶边缘无毛刺征、周边无高回声晕征者(P0.05);内部有微小钙化、血流显像分级2-3级、淋巴结转移患者的p120阴性表达率高于内部无微小钙化、血流显像分级0-1级、无淋巴结转移者(P0.05);内部有微小钙化、血流显像分级2-3级、淋巴结转移患者的CerbB-2阳性表达率高于内部无微小钙化、血流显像分级0-1级、无淋巴结转移者(P0.05);内部有微小钙化、淋巴结转移患者的Her-2/neu阳性表达率高于内部无微小钙化、无淋巴结转移者(P0.05)。结论:乳腺癌超声征象与ER、PR、CerbB-2、Her-2/neu和p120的表达有紧密联系,可为治疗方案拟定提供参考。     

NTG诱变农抗702产生菌链霉菌702的研究

目的:筛选出产抗真菌活性物质的高产链霉菌702突变株。方法:分别以链霉菌702菌株为试验材料,以庆大霉素为敏感抗生素,NTG诱变链霉菌702菌株,获得抗庆大霉素突变株。结果:NTG处理90min对菌株的致死率可达73.46%,突变率高达23.64%,经过摇瓶筛选获得高产突变株20-29-12,产素单位达到1 443μg/mL,比出发菌株提高了38.08%。结论:采用抗药性致死突变标志的NTG诱变筛选模型可以获得产抗真菌活性物质的链霉菌702高产菌株。