嗜肺军团菌感染小鼠后血清白介素12水平和巨噬细胞功能的变化

摘要：目的 探讨嗜肺军团菌感染Balb/c小鼠后血清白介素12（IL-12）水平和巨噬细胞功能的变化。方法 将36只健康Balb/c小鼠随机分为观察组和对照组各18例,观察组小鼠经腹腔注射嗜肺军团菌菌液0.10 mL,对照组小鼠则经腹腔注射等量的生理盐水,分别于注射后1周和1个月,检测并比较两组小鼠的血清IL-12水平和巨噬细胞功能。结果 注射1周后,观察组小鼠的血清IL-12水平为（14.98±2.90）Lg/mL,巨噬细胞的杀伤活性为（34.71±7.28）%,较对照组均有明显降低,组间比较差异均有统计学意义（P＜0.05）;注射1个月后,观察组小鼠的血清IL-12水平及巨噬细胞杀伤活性均有显著回升,组间比较异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 嗜肺军团菌感染Balb/c小鼠后1周,小鼠的血清白介素12水平及巨噬细胞的功能均有显著下降,且于注射后1个月恢复正常,临床上可将感染后1个月作为相关血清抗体的最佳制备时间。     

嗜肺军团菌毒力基因、致病性及实验诊断研究进展

嗜肺军团菌是引起军团菌肺炎的重要病原体,关于军团菌感染的致病机制目前尚不十分清楚。近来研究发现,军团菌的致病性与其毒力因子和铁代谢等相关,本文对嗜肺军团菌的毒力因子及其作用。致病机制和实验室诊断方法研究进展作一综述。     

橡树岭军团菌的分离及用16S rDNA测序法的鉴定

军团菌属（Ｌｅｇｉｏｎｅｌａ）自１９７１年确定以来,现已有３９个成员。军团菌属主要分布于供水系统中,如空调冷却塔水和浴池淋浴水中。我们曾于１９９４年从北京某宾馆冷却塔水中分离出一株可疑军团菌,但因缺乏标准抗血清而未能定种。由于核酸分析技术和细菌鉴定观念上进步,使我们能根据１６ＳｒＤＮＡ序列比较推测细菌间进化关系,并进而对未知细菌进行鉴定和检测。我们用以１６ＳｒＤＮＡ为靶序列的ＰＣＲ和测定鉴定,确定了该分离株为橡树岭军团菌（Ｌ．ｏａｋｒｉｄｇｅｎｓｉｓ）。     

不同加热方式对嗜肺军团菌环介导等温扩增检测法的影响

目的：研究不同的加热方式对嗜肺军团菌环介导等温扩增检测法的影响方法：用已知的13株嗜肺军团菌样本,采用空气浴、水浴和PCR仪同时进行环介导等温扩增,观察沉淀反应、荧光反应以及产物电泳结果。结果：水浴和PCR仪加热LAMP反应的沉淀产物较多,荧光反应较强,电泳检测结果较为明显。空气浴的3种检测结果均较弱。结论：采用水浴和PCR仪进行环介导等温扩增反应的效果较好,从仪器设备的成本及实验条件考虑,采用水浴是环介导等温扩增反应首选的加热方式。     

抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体的制备及双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测法的建立

目的：制备针对嗜肺军团茵血清8型的单克隆抗体,并建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）检测方法。方法：用甲醛灭活的嗜肺军团菌血清8型菌免疫BALB／c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体,建立双抗夹心ELISA检测方法。结果：研制出8株能特异性分泌抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体的杂交瘤细胞株,Ig类型分别为IgM（2株）、IgG,（1株）和IgG,（5株）;利用IgG1型单抗6G10与6C7配对,建立了双抗夹心ELISA检测方法,该方法的最低检出浓度为2．6×10^5cfu／mL,除与金黄色葡萄球菌有微弱的交叉反应外,与14株其他血清型嗜肺军团菌、17株非嗜肺军团菌及11株非军团菌均无交叉反应,具有较高的特异性。结论：制备了具有高特异性和亲和力的抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体,并建立了双抗夹心EUSA检测方法。     

用绿色荧光蛋白研究军团菌与寄主的相互关系

原生动物作为军团菌的天然寄主,在军团菌的生存、增殖、毒力和抗逆性等方面起着重要的作用。通过多次转化筛选,获得了一种高量表达绿色荧光蛋白基因gfpmut2的自发突变质粒。该质粒在嗜肺军团菌细胞内稳定复制和表达;转化了该质粒的嗜肺军团菌在自然光下即可发出明亮的绿色荧光。以转化菌饲喂嗜热四膜虫BF1株后,在荧光显微镜下能清楚观察到细菌在细胞内的形态变化、增殖和裂解宿主细胞的过程。为研究嗜肺军团菌与原生动物寄主的相互关系提供了一种简单而直观的方法。     

山西水环境军团菌分布及生物学特性研究

根据西方研究,军团菌广泛分布于天然淡水水域及室内供水系统。我国尚无有关专题调查资料。本文作者从山西１１个县市采集不同性质水样３６份,进行军团菌分离培养。１０份天然水样中,２份分离到嗜肺军团菌血清群５各１株,１份分离出米克戴德军团菌１株,２份分离出未能鉴定的军团菌样菌各１株,３份接种豚鼠后动物全部发病,表现符合军团茵感染,但因故未能作满意的分离培养。２６份室内管道水样军团菌分离培养无一阳性。     

用绿色荧光蛋白研究军团菌与寄主的相互关系*

原生动物作为军团菌的天然寄主,在军团菌的生存、增殖、毒力和抗逆性等方面起着重要的作用。通过多次转化筛选,获得了一种高量表达绿色荧光蛋白基因gfpmut2的自发突变质粒。该质粒在嗜肺军团菌细胞内稳定复制和表达;转化了该质粒的嗜肺军团菌在自然光下即可发出明亮的绿色荧光。以转化菌饲喂嗜热四膜虫BF1株后,在荧光显微镜下能清楚观察到细菌在细胞内的形态变化、增殖和裂解宿主细胞的过程。为研究嗜肺军团菌与原生动物寄主的相互关系提供了一种简单而直观的方法。     

嗜肺军团菌SBT、PFGE、AFLP分子分型方法的比较

比较SBT、PFGE、AFLP三种分子分型方法在嗜肺军团菌分型研究中的分辨力,探讨SBT方法在嗜肺军团菌分型中的可应用性。收集石家庄市6所医院冷却塔水中分离的32株嗜肺军团菌,对其中的24株血清I型嗜肺军团菌进行SBT分型研究,并与PFGE和AFLP分型结果进行了比较。24株LP1型嗜肺军团菌共分为4个ST型,分辨系数为0.239 1。PFGE方法将32株菌株共分为15个PFGE型,分辨系数为0.925 4。AFLP方法将32株菌株分为23个AFLP型,分辨系数为0.973 7。通过比对EWGLI网站SBT数据库,ST1021型和ST345型为本地区独特型别且属于同一克隆系;ST1型为优势型别并在我国长期流行;由于缺失neuA而未分型的嗜肺军团菌株与其他23株菌分属于不同的克隆系。SBT方法的分型能力不及PFGE方法和AFLP方法。但SBT分型方法能够通过全球比对数据库得到更多的关于菌株遗传进化和流行分布的资料,在研究菌株分子流行病学及进化方面优于PFGE和AFLP方法。     

广州市公共场所中央空调冷却塔水中军团菌mip基因分型

【目的】研究广州市公共场所中央空调冷却塔水中军团菌的基因特征和优势型别。【方法】采用军团菌巨噬细胞感染力增强因子(Macrophage infectivity potentiator,mip)基因分型方法。提取广州市2008-2010年分离的140株(119株嗜肺,21株非嗜肺)军团菌基因组DNA,针对mip基因进行PCR扩增并测序,将核苷酸序列上传至欧洲军团菌感染工作组(EWGLI)数据库进行比对,得到mip型别,并构建系统发育进化树。【结果】140株军团菌均可扩增出700 bp左右的目的条带。119株嗜肺军团菌分为10个mip型别,L.pneumophila-phil-1为优势型别,占52.9%(63/119);21株非嗜肺军团菌分为6个mip型别,L.feeleii-D3131为优势型别,占47.6%(10/21)。【结论】广州市公共场所中央空调冷却塔水中军团菌具有多样性,mip分型技术可用于军团菌的快速基因分型。