OPN通过VEGF途径增强脑卒中后的神经可塑性

该研究旨在探讨骨桥蛋白(osteopontin,OPN)对缺血性脑卒中亚急性期的神经可塑性作用。制备小鼠光化学栓塞模型,在卒中后2、7、14、21、28天采用Western blot测定小鼠大脑皮层梗死周区组织中突触素(synaptophysin,SYN)的蛋白表达水平。卒中后第7天,通过脑立体定位仪局部给予人重组骨桥蛋白(recombinant osteopontin,rOPN)。运用囊泡谷氨酸转运体1(vesicular glutamate transporter 1,VgluT 1)、突触后致密蛋白95(post-synaptic density protein 95,PSD 95)免疫荧光染色,观察骨桥蛋白治疗后梗死周区皮层共存突触的数量。采用胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、离子化钙结合适配器分子1(ionized calcium-binding adapter molecule 1,IBA1)、血小板内皮黏附分子31(platelet endothelial cell adhesion molecule-1,CD3...     

非缺陷性网状内皮组织增生病毒的血清学区别

26株来自各种禽的网状内皮组织增生病毒(REV),用多克隆的抗REV鸡血清做交叉中和试验,用REV、T株,Coo1株所制备的单克隆抗体做免疫荧光试验,比较这些毒株之间的抗原关系,从交叉中和试验结果看,它们之间的抗原关系十分接近,可以认为同属于单一血清型;但也确实存在微小差异,因此又可以将它们分为三个血清亚型,这一结果巳被单克隆抗体检验所证实。     

重组小鼠血管内皮生长因子在毕赤酵母菌中的表达和纯化

目的：建立毕赤酵母重组小鼠血管内皮生长因子（mVEGF）的制备方法,为研究mVEGF的生物活性、抗原性等提供基础。方法：通过全基因合成方法获得编码mVEGF的基因片段,将其克隆至表达载体pPICZaA上,电转化整合到毕赤酵母GS115基因组中,用甲醇诱导表达目的蛋白,表达上清经硫酸铵沉淀、SephadexG25柱脱盐、阳离子交换层析三步纯化获得目的蛋白;用还原型和非还原型SDS-PAGE检测目的蛋白的聚体状态,用Westelqq印迹验证纯化蛋白;通过PNGaseF酶切分析目的蛋白的N-糖基化修饰;通过人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖实验检测目的蛋白的生物活性。结果：获得mVEGF的重组毕赤酵母表达菌株,SDS-PAGE分析可见GSll5表达的重组mVEGF在还原状态下表观相对分子质量约为20×10^3,在非还原状态下约为40×10^3;经Western印迹检测,这些条带均为目的蛋白条带,能被兔抗mVEGF抗体特异性结合,PNGase F酶切后相对分子质量降至18×10^3左右,证明目的蛋白发生了Ⅳ-糖基化修饰;细胞测活实验表明,mVEGF具有刺激HUVEC增殖的生物活性。结论：利用毕赤酵母菌制备了具有生物活性的重组mVEGF。     

人eNOS复制缺陷型重组腺病毒的构建

目的:构建以巨型细胞病毒(CMV)为启动子的heNCS重组腺病毒转移载体.方法和结果:将heNOS cDNA全长亚克隆到穿梭质粒启动子CMV的下游,通过I-Ceu Ⅰ和PI-SceⅠ两个稀有酶切位点将目的基因heNOS与腺病毒质粒DNA(pAdeno-X)进行体外连接,获得重组腺病毒质粒DNA(pAdeno-heNOS),后者经限制性内切酶PacⅠ切割,利用脂质体转染法获得heNOS重组腺病毒.PCR双引物法鉴定是否成功构建heNCS重组腺病毒.结论:PCR双引物检测含有heNOS片段,表明成功构建了heNOS重组腺病毒转移载体AdhCMV-heNOS.     

GST-hDSL重组蛋白的原核表达纯化及对人造血祖细胞的扩增作用

目的:原核表达DSL与谷胱甘肽S转移酶(GST)的融合蛋白并研究观察GST-hDSL对人脐带血CD34 造血祖细胞的体外扩增作用.方法:将人DSL cDNA的蛋白编码序列克隆入原核表达载体pGEX-2T中,在大肠杆菌DH5α中诱导表达融合蛋白,用DEAE阴离子交换柱纯化目的蛋白.然后分离、纯化脐带血CD34 造血祖细胞,不加细胞因子或加入SCF(干细胞生长因子,stem cell factor)和GM-CSF(粒-巨噬细胞集落刺激因子,granuloeyte-macrophage colony-stimulating factor),经过14天的培养,检测GST-hDSL对细胞总数、CD34 细胞百分率、以及集落形成的影响.结果:当SCF和GM-CSF存在时,GST-hDSL组的CD34 细胞百分率,集落(colony forming cells,CFC)数以及高增值潜能集落(high proliferative potential colony forming cells,HPP-CFC)数分别是时照组的1.9、1.2、5.3倍.结论:当与SCF和GM-CSF联合作用时,重组GST-hDSL蛋白对造血祖细胞具有扩增作用.     

人胚胎干细胞向神经上皮祖细胞的诱导分化

人胚胎干细胞具有自我更新和多向分化潜能,是研究早期胚胎发育和细胞替代治疗的重要细胞来源.采用一种与小鼠成纤维细胞共培养的方法进行人胚胎干细胞的神经诱导,可产生高纯度的神经上皮祖细胞,其神经上皮特异性基因的表达有一定的时空性;诱导生成的神经上皮祖细胞具有增殖潜能并可分化为神经元和星型胶质细胞,是潜在的神经干细胞.人胚胎干细胞来源的神经上皮祖细胞为研究神经发育和神经诱导提供了新材料,也为神经系统疾病的细胞替代治疗提供了新的细胞来源.     

VEGF-D的表达与膀胱移行细胞癌LVD及淋巴结转移有关

目的观察血管内皮生长因子D(vascular endothelial growth factor D,VEGF-D)在人膀胱移行细胞癌组织内的表达,探讨VEGF-D在膀胱移行细胞癌组织淋巴管密度(lymphatic vessel density,LVD)及淋巴结转移之间的关系。方法取人膀胱移行细胞癌组织蜡块30例,免疫组化法观察VEGF-D在膀胱移行细胞癌组织内的表达情况。以淋巴管内皮特异性标记物D2-40标记淋巴管,计数癌组织内淋巴管密度。结果VEGF-D蛋白主要表达于癌细胞胞浆内,VEGF-D在淋巴结转移组膀胱移行细胞癌组织内的表达水平明显高于无淋巴结转移组(P0.05);淋巴结转移组膀胱移行细胞癌组织内的淋巴管密度明显高于无淋巴结转移组(P0.05)。VEGF-D表达与膀胱移行细胞癌淋巴管密度及淋巴结转移之间具有显著的相关性。结论VEGF-D表达在膀胱移行细胞癌组织内淋巴管生成及淋巴结转移中起重要作用。     

益心舒片联合美托洛尔对冠心病心绞痛患者心功能、血液流变学和血管内皮功能的影响

摘要 目的：探讨益心舒片联合美托洛尔对冠心病心绞痛患者心功能、血液流变学和血管内皮功能的影响。方法：纳入南京市中心医院2020年7月~2022年8月期间收治的冠心病心绞痛患者126例。采用随机数字表法分为对照组（n=63,接受美托洛尔治疗）和研究组（n=63,对照组基础上接受益心舒片治疗）。对比两组临床症状、心功能[左心室射血分数（LVEF）、心输出量（CO）、左室舒张末期内径（LVEDD）]、血液流变学[血浆黏度、全血高切黏度、全血低切黏度]和血管内皮功能[一氧化氮（NO）、内皮素-1（ET-1）]变化情况,同时观察两组不良反应发生率。结果：两组治疗12周后心绞痛发作次数减少,心绞痛持续时间缩短,研究组的改善幅度大于对照组（P<0.05）。两组治疗12周后CO、LVEF升高,LVEDD缩小,研究组的改善幅度大于对照组（P<0.05）。两组治疗12周后血浆黏度、全血高切黏度、全血低切黏度下降,研究组的改善幅度大于对照组（P<0.05）。两组治疗12周后ET-1下降,NO升高,研究组的改善幅度大于对照组（P<0.05）。对照组（4.76%）、研究组（6.35%）的不良反应发生率组间对比未见差异（P>0.05）。结论：益心舒片联合美托洛尔治疗冠心病心绞痛患者,可有效改善患者的血液流变学、心功能和血管内皮功能。     

康复训练联合高压氧对高血压脑出血术后患者脑血管动力学、血管内皮功能和血清NSE、UCH-L1、GFAP的影响

摘要 目的：观察康复训练联合高压氧对高血压脑出血术后患者脑血管动力学、血管内皮功能和血清神经元特异性烯醇化酶（NSE）、泛素羧基端水解酶（UCH-L1）、神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的影响。方法：按照随机数字表法将2021年3月~2022年12月我院收治的112例行微创钻孔置管引流术的高血压脑出血术后患者分为对照组（n=56,接受常规康复训练）和观察组（n=56,对照组基础上结合高压氧干预）。对比两组量表评分[日常生活能力量表-改良Barthel指数（MBI）、Fugl-Meyer运动功能评定量表（FMA）、美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）]、脑血管动力学指标[平均血流量（Qmean）、外周阻力（R）、平均血流速度（Vmean）]、血管内皮功能[内皮素-1（ET-1）、一氧化氮（NO）]、血清NSE 、UCH-L1、GFAP水平以及不良反应发生情况。结果：与对照组干预后相比,观察组MBI、FMA评分更高,NIHSS评分更低（P<0.05）。与对照组干预后相比,观察组Vmean、Qmean更高,R更低（P<0.05）。与对照组干预后相比,观察组NSE、UCH-L1、GFAP更低（P<0.05）。与对照组干预后相比,观察组NO更高,ET-1更低（P<0.05）。两组不良反应发生率对比未见差异（P>0.05）。结论：康复训练联合高压氧干预高血压脑出血术后患者,可有效改善脑血管动力学、血管内皮功能和血清NSE、UCH-L1、GFAP水平,减轻神经功能损伤,提高生活自理能力。     

血管内皮生长因子的脑保护及其机制研究进展

血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是一种重要的血管发育调节因子,最早发现于肿瘤细胞。上世纪90年代,人们发现VEGF在神经细胞上也有广泛表达,并具有神经细胞保护作用。此外,VEGF显著促进成年哺乳动物结构性神经元再生区(constitutive neurogenic regions)和非神经元再生区(non-neurogenic regions)的神经元再生/更新(neurogenesis/regenera-tion),显示了VEGF在神经损伤性及退行性疾病治疗中的潜在意义。本文着重讨论VEGF在脑缺血损伤中的神经保护(neuroprotection)和神经修复(neural repair)及其细胞和分子机制研究进展。