抗菌i—RNA没有传递异性体液免疫活性能力的确定及其对机体免疫功…

本实验用抗绿脓杆菌ｉ－ＲＮＡ致敏小鼠,用栈联免疫吸附试验直接检测鼠体内绿脓杆菌特异性抗体的产生,并通过电镜技术观察补体参与下的溶菌杀菌现象来间接反映体内是否有特异性抗体的产生。结果证实ｉ－ＲＮＡ没有传递特异性体液免疫活性的能力。提示抗菌ｉ－ＲＮＡ有佐剂活性,可以增强机体的体液免疫功能和细菌免疫功能。     

升血汤促进辐射后骨髓移植小鼠造血与免疫重建的研究

本文用多项血液学及免疫学指标研究了中药升血汤对骨髓移植小鼠造血与免疫重建的影响,结果证明,升血汤有明显促进骨髓移植小鼠造血与免疫功能恢复的功效,表现在小鼠骨髓造血干细胞数量的恢复,小鼠外周血象的改善,脾及骨髓中有核细胞数的增加,明显促进小鼠细胞免疫和体液免疫功能的恢复,研究结果为升血汤的临床应用提供了实验依据。     

一个改进的PCR过程中聚合酶复制精确性测定系统的建立

在大肠杆菌中建立了一套用于测定ＤＮＡ聚合酶在ＰＣＲ过程中复制精确性的系统,并测定了耐热ＦＤＤＮＡ聚合酶在ＰＣＲ扩增过程中的复制精确性。这一系统主要包括以质粒ｐＵＣ１１８和ｐＵＣ１１９为出发质粒所构建的一套共６个突变质粒,分别为ｐＦＤＦＰ１１８和ｐＦＤＦＰ１１９（＋１移码突变）、ｐＦＤＦＭ１１８和ｐＦＤＦＭ１１９（－１移码突变）、ｐＦＤＦＵ１１８和ｐＦＤＦＵ１１９（碱基置换突变）。这些突变质粒均不能进行ｌａｃＺ－α互补反应,因此在含有Ｘ－Ｇａｌ和ＩＰＴＧ的培养基上菌落呈白色。同时还构建了ＰＣＲ产物克隆载体ｐＦＤＦＬ１１８和ｐＦＤＦＬ１１９。以上述突变质粒为模板进行ＰＣＲ反应,取反应产物和ｐＦＤＦＬ１１８或ｐＦＤＦＬ１１９连接后转化到大肠杆菌中。若在ＰＣＲ过程中发生回复突变,则转化子在含有Ｘ－Ｇａｌ和ＩＰＴＧ的培养基上呈蓝色。由转化子中蓝白菌落个数即可计算出ＤＮＡ聚合酶的复制差错率。用这一系统测得ＦＤＤＮＡ耐热聚合酶的复制差错率为１０－５～１０－６。     

草鱼免疫应答的初步研究

研究了草鱼在不同水温条件下受抗原刺激后其中和抗体的变化。15℃培养条件下中和抗体上升缓慢,9周内滴度低于1:8;20℃时,3周后抗体可上升到1:256,最高达1:5270,而在25℃时,1周中和抗体即达到1:570,最高可达1:20000以上。并探索了从草鱼血清中提纯抗体的条件,研究其抗体的特性。草鱼血清中的抗体为大分子蛋白,容易解离为抗原性相同,分子量近似于人IgG的较小分子,含有较多的二硫键,具有类似IgM的某些特性。     

斑点酶免疫实验检测流行性出血热抗体方法的研究

本文应用斑点酶免疫试验(DEIA),检测流行性出血热病人血清42份,其结果与间接免疫荧光(IFA)进行了比较,符合率100％,其DEIA几何干均滴度为1:880,IFA为1:580,同类风湿因子阳性血清[RF(+)]无交叉反应,证明本方法具有较高的敏感性和特异性,本文还对不同方法处理组织内源酶的效果和不同阻断剂的阻断效果进行了比较。试验结果表明本法不但敏感、特异,而且简单、快速、安全、经济、易于推广。     

哈尔滨城市和乡村青年居民肠道菌群多样性研究

【目的】分析居住于哈尔滨城市和乡村的青年居民肠道菌群多样性的异同。【方法】采用PCR和DGGE技术相结合的方法对生活于哈尔滨城市和乡村的青年志愿者肠道菌群多样性进行研究。基于DGGE指纹图谱,分别使用聚类和PCA分析对志愿者肠道微生物相似性进行分析,使用Shannon-Weine多样性指数(H′)、丰度(S)和均匀度(EH)对志愿者肠道微生物多样性进行分析,对图谱中具有代表性的共性和特异性条带进行胶回收和克隆测序以分析志愿者肠道微生物组成。基于PCR技术在种水平上对城乡志愿者肠道内乳杆菌属和双歧杆菌属多样性进行定性分析。【结果】相似性分析显示,城乡青年居民间肠道微生物群落结构存在分开趋势,相似性小于城市或乡村青年居民内部;多样性分析显示,城乡青年居民肠道微生物多样性差异不显著;测序结果表明,城乡居民肠道微生物组成在门水平上相同,但是在种属水平上存在差异。PCR定性分析显示Lactobacillus plantarum、L.casei和L.salivarius在哈尔滨城乡青年居民肠道内检出率接近100%,Bifidobacterium longum和B.breve的检测率约90%,在哈尔滨城乡青年居民肠道内普遍存在;乳杆菌属和双歧杆菌属各细菌种在城乡居民肠道中的检出频率差异不显著。【结论】哈尔滨城市和乡村青年居民肠道微生物多样性差异不显著。     

内参基因加标法定量土壤微生物目标基因绝对拷贝数

【目的】通过荧光定量PCR技术对土壤微生物目标基因进行绝对定量,其定量结果的准确性容易受到DNA提取得率以及腐殖酸抑制性的影响。【方法】采用内参基因加标法,利用构建的突变质粒DNA,对供试水稻土壤样品中的微生物16S r RNA目标基因的绝对拷贝数进行荧光定量PCR检测,用来表征该样品中细菌群落总体丰度。在定量前通过双向引物扩增方法验证突变质粒中的内参基因对供试土壤的特异性。【结果】不同水稻土壤样品的DNA提取量在样品间差异较大。通过内参基因加标法对DNA提取量进行校正,显著提高了16S r RNA基因绝对定量的精确度。不同水稻土壤样品间的变异系数为17.8,与未加标处理相比降低了66.7%。在此基础上,进一步通过内参基因加标法对土壤有机质和含水率均呈现典型空间特征差异的6处亚热带湿地土壤样品中的16S r RNA基因进行绝对定量。16S r RNA基因绝对拷贝数与土壤微生物生物量碳具有显著的线性相关性(R2=0.694,P0.001),表明内参校正后的16S r RNA基因绝对拷贝数可以准确反映单位质量土壤中微生物的丰度。【结论】内参基因加标法可以对DNA提取得率以及腐殖酸对PCR扩增的抑制性进行校正,从而提高绝对定量的准确性。基于内参基因加标法的目标基因绝对定量PCR检测,可作为土壤微生物生物量测量,以及微生物功能基因绝对丰度定量的一种核酸检测方法。