HCV5＇端非编码区cDNA的体外转录

采用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）从广东省一例慢性丙型肝炎病人血清中获得丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）５＇端非编码区（５＇ＮＣＲ）３０２ｂｐ的ｃＤＮＡ片段,经补齐和提纯后插入ｐＵＣ１９质粒,获得的重组体ｐＵＮ进行序列测定。将ｐＵＮ的目的基因亚克隆进体外转录载体ｐＳＰＯＲＴＩ多克隆位点的ＥｏｏＲＩ和ＰｓｔＩ切点之间,所得重组体ｐＳＮ线性化后由Ｔ＿７ＲＮＡ多聚酶及ＳＰ６ＲＮＡ多聚酶引导体外转录反应,产物经凝胶电泳及特异引物ＲＴ－ＰＣＲ,证实ＳＰ６引导的是正义ＲＮＡ,Ｔ７合成的是反义ＲＮＡ,其大小分别力４２９ｂｐ和３６２ｂｐ。并证实所得ＲＮＡ力ＨＣＶ５＇ＮＣＲｃＤＮＡ转录而来。获得的ＨＣＶ５＇ＮＣＲｃＤＮＡ和ＲＮＡ在常规逆转录和ＰＣＲ步骤中用于设立有效的模板对照,对消除假用性及评估试剂有重要意义。同时,ＨＣＶ５＇ＮＣＲ体外转录载体的构建可用于制各ＲＮＡ探针和反义ＲＮＡ,改进后还可作为定量ＰＣＲ的竞争性模板。     

链霉菌酪氨酸酶基因的克隆与表达

本文综述了近年来对链霉菌酪氨酸酶基因的研究。由酪氨酸酶合成黑色素是链霉菌属各个种的共同特性,并受到酪氨酸酶基因的控制。链霉菌几个种的酪氨酸酶基因已克隆到,其产黑色素的特性使之作为重要的标记基因得以广泛应用,同时,该基因在链霉菌的不同种及不同属的微生物中得到了高水平的表达。链霉菌酪氨酸酶基因表达调控的分子机制也得到较深入的研究。     

介绍几种促进种子萌发的方法

木兰科植物多为高大的常绿乔木,树形优美,树冠宽广,是优良的城市行道树和庭园绿化树,如荷花玉兰等。很多种类的花芳香优雅,香气持久宜人,是提取高级香精的原料,如黄兰、白兰、玉兰等。一些种类还是我国的传统中药,如辛夷、厚朴等。但木兰科种子的鉴定却是园林工人在选种时遇到的一大困难。这里介绍一种快速、准确的鉴别方法。     

凤尾菇与平菇的鉴别及其分类地位

凤尾菇韧伞（Ｌｅｎｔｉｎｕｓ ｓａｊｏｒ－ｃａｊｕ）和糙皮侧耳（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｏｓｔｒｅａｔｕｓ）为两种广泛栽培的食用菌,在中文文献中经常与侧耳属（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）的其它几种食用菌统称为平菇。为了种类鉴别和澄清分类上的关系,本文对两种真菌进行了详细的形态描述和特征比较,确认凤尾菇是韧伞属（Ｌｅｎｔｉｎｕｓ）的成员,不应归放在侧耳属内。凤尾菇韧伞与糙皮侧耳,或韧伞属与侧耳属的最显蓍的差异在     

食管癌病人运铁蛋白(Tf)和组特异性成份(Gc)亚型分布的研究

应用超薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳法, 分析了潮汕地区216例无血缘关系、临床上诊断为食管癌的病人和216例健康人的运铁蛋白(Tf)亚型分布情况, 结果发现:食管癌病人组TfC1C1纯合子频率为0.2639,Tf*Cl基因频率为0.4745,显著低于正常人组(分别为0.4352和0.6227,均为P<0.0 01);同时,食管癌病人组TfC2C2纯合子频率为0.2278,Tf*C2基因频率为0. 4977,显著高于正常对照组(分别为0.1852,P<0.05,和0.3634,P<0.001)。应用超薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦结合免疫固定法,分析了潮汕地区21 7例无血缘关系的临床上诊断为食管癌病人和 217例健康人的组特异性成份(Gc)亚型的分布,发现两组间无显著性差异。     

人微小纤溶酶原基因的克隆和表达

用PCR方法扩增人微小纤溶酶原(Microplasmingen,mPlg)基因,再与表达载体重组．构造mPlg原核表达质粒并转化大肠杆菌。阳性克隆pSSE-mPlg经温度诱导表达,SDS-PAGE等方法证明表达产物的分子量约为29kDa。占全菌总蛋白的24％左右,并在菌内形成包涵体。经半胱氨酸再氧化法和空气氧化法复性。表达产物r-mPlg经SK作用后显示纤溶活性。同时对蛋白质浓度、复性时间等因素对复性的影响进行了初步探讨。     

PSⅡ反应中心D1蛋白的小肽抗体的制备和鉴定

用人工合成的PSⅡ反应中心D1蛋白中(229～240)的12肽,与牛血清白蛋白偶联后做为抗原免疫家兔, 获得抗菠菜D1蛋白抗体. 免疫双扩散法测得其具较高的效价,蛋白印迹检测结果显示该抗体仅与D1蛋白有免疫亲和反应. 表明此抗体可作为检测D1蛋白及其光抑制时降解产物的探针.     

酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶基因(PGK1)启动子片段的亚克隆

含有3-磷酸甘油酸激酶基因(PGK1)的酿酒酵母染色体3.1kb HindⅢ片段,已被克隆到大肠杆菌-酵母菌穿梭载体pCN60上。Kpn Ⅰ核酸内切酶在pCN60上没有酶切位点,而在pCN60(PGK1)上仅有一酶切位点。用此酶将pCN60(PGK1)质粒完全酶切,再用Bal31从两端逐步消解碱基对,使反应终止于每端消解500bp左右,加上EcoR Ⅰlinker。用EcoRⅠ、BamH Ⅰ酶切,分离1. 9kb的DNA片段,插入用同样双酶切的酵母启动子探针载体pVC727上,转化E.coli C600,再从转化子中提取重组质粒转化酵母受体菌NA87-11A。用菌落染色法筛选出PHO5基因高效表达转化子,这个转化子质粒含有1.9kb的BamH Ⅰ、EcoRⅠ酶切片段,它具有强启动子功能,并测定其3'末端序列。