韩克隆专家黄禹锡造假案之警示

黄禹锡,一个曾经在韩国科学界被奉为近似神一样的人物,在去年末首尔大学调查结论出台后,其声誉轰然倒地,以他为象征的韩国股市生物概念股再次大幅走低。今年1月10日,首尔大学的最终调查报告彻底否定了黄的体细胞克隆的论文与成果,这项调查开始渐落下帏幕。首尔大学调查委员会指     

λ拟操纵基因的克隆

以HindtTI和艮o Rl双重酶解p1)G3|质粒DNA制备了29个硷基对DNA片段。该DNA片段含有l‘个硷基对A拟操纵基因(pseud~perator),其一端为HindLTI接头,另一端为EcoRI接头。29个玲基对片段与pBR325质粒连接、转化、筛选获得克隆pQHl00(Ap‘Tc‘。M’)。FQHl00DNA分别以Hznd[1l,EcoRl单独酶解或双重酶解,经凝胶电泳分析,其结果表明,pQH1~)0DNA含有两个A拟操纵基因,这两个DNA片段在HtnI川位点上,以头对头的方式相连。     

脂肪酸合成酶基因片段克隆以及胰岛素诱导时该酶mRNA含量的变化

采用高效的由mRNA合成cDNA的方法,我们得到了含有3.7kb的脂肪酸合成酶基因片段的克隆pFAS_(203)。它具有限制内切酶PstⅠ、BamH Ⅰ、HineⅡ、PvuⅡ、Ava Ⅰ以及Pvu Ⅰ酶切位点,与已经得到的经杂交选择的mRNA离体翻译产物鉴定的cDNA克隆pFAS_(15)有部分重叠。对饥饿的糖尿病大鼠注射胰岛素并饲以无脂食物,肝中FAS mRNA以及其前体RNA含量增加,当注射后再饲无脂食物达12小对,肝中FASmRNA及其前体RNA约为糖尿病鼠的30倍。Poly(A)~+ RNA的Northern分析表明诱导期间FASmRNA含量增加而其分子大小不变。这些结果表明胰岛素对FAS基因的转录有调节作用。胰岛素诱导后的脂肪酸合成酶活性升高是在转录水平上调节的。     

快速连续测定乙肝病毒DNA酶解大片段的顺序

 用“剪切重组”术及内引物法测定了克隆在M_(13)mp_8载体中的HBVDNA 1.3Kb片段的完整顺序,简化了操作过程,为连续测定大段DNA的顺序提供了简单、快速、有效的途径。     

犬Ⅰ型腺病毒DNA的酶切分析及分子克隆

犬Ⅰ型腺病毒(CAV-1)弱毒用限制性内切酶EcoR Ⅰ,BamH Ⅰ,Pst Ⅰ,Sph Ⅰ和Hind Ⅲ消化分析后其图谱与强毒株相比没有差异。将弱毒DNA用Pst Ⅰ完全消化后以鸟枪法克隆到载体质粒pBluescrip'SK中,经用光生物素标记的CAV-1 DNA杂交筛选以及Pst Ⅰ分析重组质粒证明已将分子量为5.5,3.5,2.85,1.2,0.32和0.28Kb的CAV-1DNA片段克隆到质粒中。克隆到的这些片段将可考虑进一步研究作为探针检测犬及狐狸等野生动物的腺病毒感染。     

高粱叶绿体psbD基因在重组质粒pSD_2Ⅱ中的定位及psbD基因的亚克隆

利用pUC19我们构建了高粱叶绿体基因文库,从库中我们筛选到4个含psbD基因的阳性克隆。Southern分析证明重组质粒由pUC19和高梁叶绿体DNA的Pst10片段组成。通过8种限制性内切酶酶切分析和Southern分析测出了重组质粒pSD_2Ⅱ的物理图谱,并确定了高梁psbD基因在重组质粒中的精确位置。通过构建pSAC_2质粒,可以将Pst10片段中非psbD部分去除,使psbD可以直接用EcoRⅠ从pSAC_2上切下,为研究高粱psbD基因的表达和序列分析奠定了基础。     

编码酵母丙氨酸tRNA两个半分子的DNA的克隆

用DNA合成仪合成寡聚脱氧核苷酸。用T4-DNA连接酶把这些寡聚脱氧核苷酸重组成双链DNA。这两个双链DNA的上游是T7-启动子,下游分别编码酵母丙氨酸tRNA的5′半分子(1-35位核苷酸)和3′半分子(35-76位核苷酸)。再把这两个双链DNA克隆到PUC 12质粒中。经点杂交筛选和DNA顺序测定证明克隆是成功的。