赭曲霉11α羟化酶的克隆表达及关键氨基酸位点分析

11α,17α-双羟基黄体酮是甾体激素类药物的重要中间体,工业上主要利用霉菌对17α-羟基黄体酮的11α羟化反应制备。对赭曲霉的11α羟化酶及其关键氨基酸位点展开研究,为深入解析酶的催化机理提供基础数据。利用底物转化实验探究了10个羟化反应常用霉菌对17α-羟基黄体酮的转化能力,考察了赭曲霉来源的11α羟化酶CYP68J5在不同表达系统中的活性,借助结构预测、分子对接和定点突变等手段对CYP68J5的关键氨基酸位点进行解析。结果表明,赭曲霉的转化能力最强,转化时间60 h的摩尔产率达到最大值,为78.55%;其羟化酶CYP68J5在酿酒酵母中的表达活性最高;位于底物结合口袋附近的D118、F216、M488是CYP68J5的关键氨基酸位点,这些位点在维持酶的结构稳定性上发挥重要作用,是后续分子改造的潜在重要靶点。     

双针刺疗法在孕足月初产妇催产中的应用效果及对应激反应和内源性神经递质的影响

摘要 目的：研究双针刺疗法在孕足月初产妇催产中的应用效果及对应激反应和内源性神经递质的影响。方法：选取2020年3月~2022年5月期间我院妇产科收治的孕足月初产妇102例。根据随机数字表法分为对照组（51例）和研究组（51例）。产妇在临产宫口开至3 cm（T0）后,对照组不予以任何镇痛方法干预,研究组给予双针刺疗法干预。比较两组催产疗效、产程情况、宫颈成熟指标、应激反应和疼痛、内源性神经递质指标的变化情况。结果：研究组的临床总有效率高于对照组（P<0.05）。研究组的总产程、第一产程、第二产程、第三产程时间均短于对照组（P<0.05）。研究组的宫颈口扩张、宫颈管消退、先露位置、宫颈硬度、宫口位置大于对照组（P<0.05）。两组宫颈口开10 cm（T1）的血糖、皮质醇水平升高,但研究组低于对照组（P<0.05）。两组T1的视觉疼痛模拟（VAS）评分、P物质（SP）、β-内啡肽（β-EP）、神经肽Y（NPY）升高,但研究组低于对照组（P<0.05）。结论：孕足月初产妇采用双针刺疗法可提高催产疗效,促进宫颈成熟,缩短产程时间,同时还可减少内源性神经递质的释放,减轻产妇应激反应。     

过表达IDO骨髓间充质干细胞对腹腔异位移植心脏模型大鼠炎症反应、T细胞亚群和NF-κB/NLRP3通路的影响

摘要 目的：探讨过表达吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）骨髓间充质干细胞（BMSCs）对腹腔异位移植心脏模型大鼠炎症反应、T细胞亚群和核因子（NF）-κB/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）通路的影响。方法：慢病毒载体及基因开启技术构建过表达IDO大鼠BMSCs,建立60只大鼠腹腔异位移植心脏模型,造模成功后,随机分为4组,每组各15只。空白组建模后未给予任何处理,吗替麦考组喂养吗替麦考40 mg/kg,空白-BMSCs组在腹腔异位移植心脏术后3 d,经尾静脉注射空白-BMSCs,IDO组在腹腔异位移植心脏术后3 d,经尾静脉注射过表达IDO-BMSCs（每只400 μL,10⁶个细胞）。检测并对比四组心功能、血清心肌酶、炎症因子、T细胞亚群、心脏病理变化以及NF-κB/NLRP3通路相关蛋白表达情况。结果：IDO组射血分数差值、环比收缩（FS）差值大于空白组、吗替麦考组、空白-BMSCs组（P＜0.05）,血清肌钙蛋白I（cTnI）、肌酸激酶同工酶（CK）-MB、白细胞介素（IL）-1α、IL-1β、IL-2、γ干扰素（IFN-γ）、IL-18水平以及脾脏组织CD40、CD86、CD80、MHC II、CD45RA、CD45RA+CD45RB,心脏组织NF-κB、NLRP3、半胱氨酸蛋白酶-1（Caspase）-1表达低于空白组、吗替麦考组、空白-BMSCs组（P＜0.05）,血清IL-10、TGFβ1、TGFβ3水平以及脾脏组织CD274、Treg表达高于空白组、吗替麦考组、空白-BMSCs组（P＜0.05）。HE染色结果显示IDO组炎症细胞浸润较空白组、吗替麦考组、空白-BMSCs组明显减少。结论：过表达IDO-BMSCs可减轻免疫和炎症反应,改善移植心脏功能,可能与其抑制NF-κB/NLRP3信号通路的激活有关。     

I型马立克氏病毒38kD磷蛋白与Ⅱ和Ⅲ型病毒间的交叉免疫反应

由致病性Ⅰ型马立克氏病病毒(MDV)特异性的单克隆抗体H_(19)制备亲和层析柱,从感染重组杆状病毒BP38Ⅱ的昆虫细胞系Sf9细胞中提纯MDV的pp38基因表达产物,以此免疫小鼠制备抗血清,测定其与不同型MDV毒株感染的鸡胚成纤维细胞免疫反应性,同时也用不同型MDV毒株(HVT,Z4)制备的抗血清和自然感染发病鸡血清分别与感染重组病毒的Sf9细胞进行免疫交叉反应.试验结果表明,完整的Ⅰ型MDV来源的pp38基因产物与所试Ⅱ型Z4株和Ⅲ型HVT Fc126毒株在抗原性上有显著交叉反应.这一结果表明,在Ⅱ型和Ⅲ型MDV毒株中可能存在着pp38的类似物.     

蛋白质N端豆蔻酰化修饰的基因工程表达偶联加工系统

对酵母ＮＭＴ基因在大肠杆菌中表达进行较详细的研究,进而构建了复制子为ｐ１５Ａ并含卡那霉素抗性基因的相容性表达质粒ｐＫＺＭＴ,将其与表达质粒ｐＣＺｍＣα１共转化进大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）Ｆ′,进行双质粒表达偶联加工修饰研究,其中ｐＣＺｍＣα１表达底物蛋白小鼠ｃＡＭＰ依赖的蛋白激酶催化亚基α（ＰＫＡ-ｍＣα）。ＳＤＳＰＡＧＥ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析表明,双质粒表达系统中,ＰＫＡ-ｍＣα都得到了稳定的高表达,尤其在２３℃低温诱导表达时,表达产物的可溶性部分明显增多;而酵母ＮＭＴ被控制在有利于活性功能的可溶性低水平表达。［^３Ｈ］ｍｙｒｉｓｔｉｃａｃｉｄ标记测定及放射自显影的结果显示,在大肠杆菌中表达的重组ＰＫＡ-ｍＣα被豆蔻酰化修饰。     

双水相电泳分离蛋白质的研究

近几年来,随着生物技术的迅速发展,制备型电泳技术的研究得到了重视。然而由于技术上的原因,大规模的制备型电泳技术的研究还未能取得突破。阻碍电泳放大的一个主要问题是由于电加热作用而导致的热对流对电泳分离的破坏。为解决这一问题,人们提出了许多方法。例如,在太空的微重力环境下进行电泳,应力稳定自由流动电泳,循环等电聚焦和区带电泳,色谱电泳和等电膜等电聚焦等。这些方法在电泳放大上都取得了一定的进展,但各有其局限性。最近,Clark提出利用双水相的液液界面阻止热对流的设想,为开发大规模的制备型电泳技术开辟了一条新途径、Raghava Rao等在两种双水相体系上施加电场后成倍地缩短了分相时间。Levine和Bier采用U型管电泳装置研究了双水相体系中血红蛋白的电泳迁移率,观测到界面有阻滞作用。Clark在柱型电泳装置中进行了一组双水相萃取肌红蛋白的简单实验。在10mA的恒电流下电泳40min之后,肌红蛋白的分配系数为7.5,而当电场反向后,分配系数变为0.04,界面阻力并不显著,两者结论并不一致。     

大瓣鱼科─新属与历史动物地理学研究

描述了采自云南曲靖龙华山下泥盆统徐家冲组顶部的一件大瓣鱼科化石,定名为龙华全瓣鱼（Hoopetalichthyslonghuaensisgen.etsp.nov.）。对新属种与其它瓣甲鱼类的比较表明全瓣鱼是最原始的大瓣鱼类,它与其余的大瓣鱼类构成姊妹群。通过对大瓣鱼科的历史动物地理学研究认为,瓣甲鱼目起源于华南,而大瓣鱼科的祖先几乎是广布的。大瓣鱼科隔离分化模式显示,在泥盆纪期间,华南区与东冈瓦纳区有较密切的联系     

用单克隆抗体作芜菁花叶病毒不同分离物外壳蛋白抗原结构的比较研究

用芜菁花叶病毒辽宁分离物（ＴｕＭＶ－ＬＮ）,山东分离物（ＴｕＭＶ－ＳＤ）和榨菜分离物（ＴｕＭＶ－ＺＣ）作抗原,分别免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,经脾细胞与ＳＰ２／Ｏ－Ａｇ１４骨髓细胞融合,共获得７个单克隆抗体分泌细胞株,为研究３个分离物的抗原差异,用胰蛋白酶消化ＴｕＭＶ的外壳蛋白（ＣＰ）。分别形成４、２和１条降解带,经ＳＤＳ－１５％ＰＡＧＥ后,转移至硝酸纤维薄膜上,用３个分离物的抗血清和７种单隆抗体分别做     

血液流变学与美尼尔氏病56例临床分析

测定了５６例美尼尔氏病患者和５６例健康成人的血液流变学,结果显示美尼尔氏病患者血粘度,红细胞电泳,纤维蛋白原,血沉均高于健康人,表明美尼尔氏病与血液流变性的变化有关