大鼠孤束核中神经肽Y样神经元与咽肌运动神经元的联系——PRV和…

用ＰＲＶ和ＰＹ免疫荧光双标记法研究了大鼠孤束核中ＮＰＹ样神经元对咽肌运动神经元的调控。ＰＲＶ注射大鼠咽肌后,在孤束核的中介记叙 中间亚核中可见许多ＰＲＶ和ＮＰＹ双标记细胞。首次证明了大鼠孤束核中的ＮＰＹ样神经元和咽肌运动神经元的联系。推测ＮＰＹ对咽肌运动的精确调控有关。     

海宁地区19519例女性生殖道感染情况分析及临床意义探讨

目的 通过对19 519例门诊阴道分泌物标本的检测,探讨阴道炎病原体的分布情况和定期进行阴道分泌物检查的意义。方法 通过显微镜镜检等方法检测19 519例阴道分泌物标本的清洁度、假丝酵母菌、线索细胞、滴虫等。结果 19 519例标本中,共检出阴道炎9 142例,占46.84%,病因不明的阴道炎占26.83%。假丝酵母菌、线索细胞及滴虫检出率分别为15.30%、3.84%、0.87%。各种病原体感染既可单独存在,也可混合感染。清洁度Ⅲ~Ⅳ度的患者中病原菌检出率明显高于І~Ⅱ度（P<0.05）。结论 阴道炎在门诊病例中的比例非常高,女性应定期进行阴道分泌物检查,并对育龄妇女和老年女性开展阴道感染防治健康教育以降低生殖泌尿系感染风险。     

重组阿拉伯糖苷酶在毕赤酵母中的分泌表达及其活性分析

假密环菌是一种果树腐病菌,具有较强的分解代谢纤维素的能力。本文根据已克隆出的阿拉伯糖苷酶基因序列（Accession Number AJ620046）设计引物从假密环菌的mRNA中克隆出阿拉伯糖苷酶的ORF片段,构建重组质粒pPIC9-AF,与组氨酸标签融合,电转化毕赤酵母菌GS115并进行诱导表达。所得到的重组阿拉伯糖苷酶在30-35℃时有较高的酶活,最适反应活性pH值在6.0-8.0之间,而在pH4.0－8.0范围内酶活基本保持在80%以上,比大多已报道的阿拉伯糖苷酶最适pH范围宽。本研究工作对于高效表达重组阿拉伯糖苷酶以及对其进一步的酶学性质研究提供了一个良好的基础。     

人健康肝组织刀豆凝集素(Con A)结合型糖蛋白组学研究

通过凝集素亲和层析技术结合双向电泳-质谱技术构建人健康肝组织Con A结合型糖蛋白数据库并进行生物信息学分析; 利用研磨和匀浆两步法抽提人健康肝组织总蛋白, 通过固相凝集素亲和层析获得与刀豆凝集素(Con A)结合型糖蛋白, 经过双向电泳、荧光染色、图像分析获得人健康肝组织表达谱; 通过MALDI-TOF-MS质谱鉴定及生物信息学分析获得人健康肝组织数据库, 并建立了高重复性的人健康肝组织Con A结合型糖蛋白表达谱, 图谱均点数为301±15, 挖取139个蛋白点进行质谱鉴定, 去冗余后确定了85个与细胞周期、代谢通路相关的蛋白质; 通 过NetNGlyc和NetOGlyc对糖基化位点进行预测, 并按照geneontology对其功能定位等进行分类, 并对其中与肿瘤发生发展相关的蛋白进行具体分析. 由此可见, 凝集素亲和层析结合2－DE, 质谱鉴定是一种高通量的检测方法, Con A结合型糖基化修饰谱的构建为后续研究奠定了基础.     

Effective inhibition of human cytomegalovirus gene expression by DNA-based external guide sequences

To investigate whether a 12 nucleotide DNA-based miniEGSs can silence the expression of human cytomegalovirus （HCMV） UL49 gene efficiently, A HeLa cell line stably expressing UL49 gene was constructed and the putative miniEGSs （UL49-miniEGSs） were assayed in the stable cell line. Quantitative RT-PCR and western blot results showed a reduction of 67% in UL49 expression level in HeLa cells that were transfected with UL49-miniEGSs. It was significantly different from that of mock and control miniEGSs （TK-miniEGSs） which were 1 and 7%, respectively. To further confirm the gene silence directed by UL49-miniEGSs with human RNase P, a mutant of UL49-miniEGSs was constructed and a modified 51 RACE was carried out. Data showed that the inhibition of UL49 gene expression directed by UL49-miniEGSs was RNase P-dependent and the cleavage of UL49 mRNA by RNase P was site specific. As a result, the length of DNA-based miniEGSs that could silence gene expression efficiently was only 12 nt. That is significantly less than any other oligonucleotide-based method of gene inactivation known so far. MiniEGSs may represent novel gene-targeting agents for the inhibition of viral genes and other human disease related gene expression.     

视黄酸和亚硒酸钠对肝癌细胞某些表型逆转的加和作用

 人肝癌细胞株SMMC-7721经1μmol/L视黄酸和或2.5μmol/L亚硒酸钠处理后,膜上纤维连接蛋白沉着量逐日上升,且较相应天数的对照组细胞增加,而甲胎蛋白分泌量和~3H-TdR参入率被明显抑制。视黄酸和亚硒酸钠同时处理的联合组作用强度接近于两者单独使用时作用强度的加和。对以上结果和视黄酸及亚硒酸钠使肝癌细胞接触抑制恢复及表型逆转的关系作了讨论。     

人B组轮状病毒vp7基因的克隆和序列分析

利用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)技术,扩增了人B组轮状病毒WH—2vp7基因,连接到克隆载体pUCm—T,并对其基因序列进行了分析。WH—2与ADRV的同源性达98％,与印度加尔各达分离株CAL—1达92％,而与动物B组轮状病毒同源性差别较大,如与IDIR(鼠)同源性仅为58％,与WD653(牛)B组轮状病毒同源性为63％,与ATI(牛)同源性为61％。对vp7基因的二级结构分析发现其mRNA折叠形成多达18个发卡环状结构。VP7蛋白是249个氨基酸组成,分子：量为28．4kDa,含有3个潜在的N连接的糖基化位点和多个磷酰化位点,从氨基酸序列的同源性来看,WH—2与ADRV的同源性达99％,与CAL—1达95％,而IDIR仅为51％,说明了WH—2和ADRV的起源相同。此研究对了解B组轮状病毒基因的进化和变异规律具有重要意义,也将为B组轮状病毒预防性疫苗的研制提供科学的依据。     

重组人促红细胞生成素中试纯化工艺研究

采用堆积床生物反应器,用无血清培养基培养分泌ｒｈＥＰＯ的工程细胞株ＸＰ９５０１。所收集的上清液,经过快速离子交换层析—反相—分子筛层析纯化后,所得ＥＰＯ纯度达９９％以上,比活性为１－５×１０５ＩＵ／ｍｇ。整个纯化全过程的ＥＰＯ体内活性回收率为４６％。所纯化的ＥＰＯ分子量为３６ｋｄ,等电点为３－５。免疫印迹证明其有天然ＥＰＯ的免疫原性,Ｎ端１５个氨基酸序列分析与文献报道一致。本纯化工艺路线简单,时程短,重复性好,适合于大规模生产重组人促红细胞生成素。     

人白细胞介素11融合蛋白切割位点的改变及成熟蛋白的纯化

将 h IL- 1 1 c DNA克隆入硫氧还蛋白基因融合表达载体 p TRXFUS的 trx A基因 3′末端 ,构建符合读码框的融合基因 ,并在两基因间改变原有的肠激酶切割位点 ,引入蛋白质的羟胺切割位点序列 ,该融合蛋白在大肠杆菌中表达量达 2 0 %以上 .经羟胺切割 ,柱层析等纯化步骤后 ,得到纯度98%以上的成熟 h IL - 1 1 .用 IL- 6依赖细胞株 7TDI及 MTT法测定生物学活性 ,比活达 8× 1 0 6 IU/mg.并对纯品进行了 Western blot,N端 1 5个氨基酸测序及 h IL- 1 1氨基酸组成等分析和鉴定