儿茶素单体EGCG酶法修饰研究及其产物抗氧化活性评价

利用Novozym 435脂肪酶在非水介质中催化儿茶素单体EGCG(表没食子儿茶素没食子酸酯)的酶促酰化反应,以增加EGCG的脂溶性。探讨了溶剂种类、水活度、加酶量、反应时间、反应温度、酰基供体等条件对酰化反应的影响。借助液质联用仪及红外光谱仪对合成产物进行鉴定,表明在叔戊醇体系中,脂肪酶可催化EGCG与丁酸乙烯酯的反应,酰化后EGCG主体结构不变,其分子中引入了四碳链的烷基。对修饰后EGCG抗氧化活性的评价表明:在相同的添加量下,酶修饰EGCG活性略低于未改性EGCG,但是清除DPPH·、O-·2自由基能力总体高于TBHQ、维生素C,清除·OH自由基能力低于TBHQ,高于维生素C。     

MTT比色法测定促肝细胞生长物质对肝细胞生长的刺激活性

本实验建立了用简便的ＭＴＴ比色法对促肝细胞生长物质的促肝细胞增殖作用的测定方法,确定了实验的最适条件。与传统的３Ｈ ＴｄＲ掺入法进行比较的结果显示,ＭＴＴ比色法与３Ｈ ＴｄＲ掺入法测定结果基本相符,灵敏度相近,但消除了同位素的污染,是一个测定促肝细胞生长物质刺激肝细胞增殖活性的简便方法。     

长效促胰岛素降糖酵母的构建及其对糖尿病模型小鼠的治疗效果

益生菌生物药物是指通过口服表达药用多肽(蛋白)的重组益生菌活细胞达到治疗疾病的新型口服给药系统。为了构建一种能有效防治2型糖尿病的酵母生物药物,文章首先构建了酿酒酵母(S.cerevisiae)整合型表达载体pNK1-PGK,并且通过绿色荧光蛋白(GFP)证明其表达功能正常,利用该载体将10×GLP-1 (Glucagon-like peptide-1)基因转化到酿酒酵母INVSc1中,通过营养缺陷型和Western blotting成功筛选出表达10×GLP-1的长效促胰岛素降糖酵母(Long-acting GLP-1 hypoglycemic yeast, LHY)。该酵母生长迅速,外源基因10×GLP-1表达稳定,表达量达到1.56 mg/g细胞湿重。通过链脲佐菌素和高脂高糖饮食联合诱导的方法构建了2型糖尿病小鼠模型,用LHY对其进行口服灌胃治疗,证明LHY具有较好疗效,明显降低血糖水平。     

槲皮素对结肠癌细胞生长的影响

通过MTT试验观察槲皮素对结肠癌细胞系RKO生长的影响;通过流式细胞仪技术观察槲皮素对细胞周期和细胞凋亡的影响;采用RT-PCR和western印迹技术,确定槲皮素对p21、p27和p53表达的影响.MTT法显示槲皮素加药组生长抑制作用明显,且具有剂量依赖性;流式细胞仪分析结果显示,经5μmol/L槲皮素作用后细胞周期明显阻滞在G0/G1期;5、10、20μmol/L3个剂量组的细胞凋亡率分别为23.4%、24.2%、47.9%,而对照组为13.2%;p21和p27的mRNA及蛋白质表达水平上调,促凋亡蛋白p53表达水平上调.因此,槲皮素对RKO生长有明显的抑制作用,槲皮素可能通过上调p21和p27表达使RKO细胞周期阻滞于G0/G1期,可能通过上调促凋亡蛋白p53表达诱导RKO细胞发生凋亡.     

丁酸钠对CHO-EPO工程细胞株rhEPO表达量的影响

以稳定整合有ｐＥＤＥＰＯ的ＣＨＯＥＰＯ工程细胞株为研究对象,在无血清条件下,系统观察了０５、１０、２５和５０ｍｍｏｌ／Ｌ４个浓度的丁酸钠作用于该细胞株的情况,结果表明：丁酸钠对ＣＨＯＥＰＯ工程细胞的生长有明显的抑制作用;影响ＣＨＯＥＰＯ工程细胞ＥＰＯ表达,浓度１０ｍｍｏｌ／Ｌ可提高ＥＰＯ表达量２５倍左右,并可持续较长的一段时间;延缓ＣＨＯＥＰＯ工程细胞在无血清培养时的细胞脱落;提高ＣＨＯＥＰＯ工程细胞ＥＰＯｍＲＮＡ水平     

生长激素释放激素和人血清白蛋白融合蛋白的克隆表达

目的:通过与人血清白蛋白(HSA)融合,延长生长激素释放激素(GHRH)在体内的半衰期。方法:根据毕赤酵母偏爱密码子重新设计GHRH的核酸序列,并通过化学合成和重叠PCR法将GHRH的N端与HSA的C端通过一个11肽的接头连接,获得GHRH和HSA融合的全长基因序列。构建pPIC9-HSA-GHRH表达载体,电击转化毕赤酵母GS115感受态细胞,通过表型筛选和诱导表达实验得到蛋白表达工程菌,对表达产物进行分离纯化和生物学活性分析。结果:克隆了HSA-GHRH融合基因,构建了pPIC9-HSA-GHRH融合表达载体;电击转化后通过表型筛选和诱导表达实验得到蛋白表达工程菌;经分离纯化后,对表达产物的生物学活性分析显示其在体内有促进生长的作用。结论:与人血清白蛋白的融合有效地提高了GHRH的表达水平,并延长了GHRH的半衰期。     

微量热法研究灵芝的促菌和抑菌作用

应用微量热法测定了大肠杆菌、枯草杆菌在不同浓度灵芝水煎液作用下的生长热———时曲线 ,根据Malthus模型 ,计算出了两种细菌在指定条件的生长速率常数。以生长速率常数大小为依据评价灵芝的促菌抗菌作用。结果为大肠杆菌的最佳用药浓度为 0 0 18g .ml- 1 ,最低用药浓度为 0 .3 967g .ml- 1 。枯草杆菌最佳用药浓度为 0 0 2 6g .ml- 1 ,最低用药浓度为 0 2 968g .ml- 1 。灵芝浓度较小时对两种细菌有促菌作用 ,灵芝浓度较大时对两种细菌有抑菌作用的结论。     

魔芋粉酶解产物与低聚果糖对双歧杆菌的促生长作用比较研究

由枯草芽胞杆菌以摩芋粉为底物经发酵培养获得的β-甘露聚糖酶酶活力达10U／ml,用该酶液水解魔芋粉制备含有低聚糖的魔芋粉酶解产物。在无碳源的GAM基础培养基中,添加不同量的魔芋粉酶解产物对双歧杆菌具有明显的促生长作用,其促生长作用与低聚果糖相当,均以2％的浓度增殖效果最明显,与不加低聚糖的对照组相比,活菌数可以提高几倍到十几倍。     

不同的下丘脑肽和神经递质对鲤鱼促性腺激素和生长激素分泌活动的影响

以１龄性腺发育中期鲤鱼为材料,采用腹腔（ｉ．ｐ）注射的方法,研究不同的下丘脑肽和神经递质对鲤鱼促性腺激素（ＧｔＨ）和生长激素（ＧＨ）分泌的影响。结果表明：促甲状腺激素释放激素（ＴＲＨ）、Ｌ－多巴（Ｌ－ＤＯＰＡ）、甲基睾酮（ＭＴ）、γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）、促黄体素释放激素类似物（ＬＨＲＨ－Ａ）和三碘甲状腺原氨酸（Ｔ３）都能显著刺激ＧｔＨ的分泌,但最大效应时间各不相同。ＴＲＨ和ＬＨＲＨ－Ａ能促进ＧＨ的分泌,Ｌ－ＤＯＰＡ、ＭＴ、ＧＡＢＡ对血清ＧＨ水平没有明显影响;Ｔ３则对ＧＨ分泌有一定的抑制作用。这说明鲤鱼ＧｔＨ和ＧＨ的分泌除了受各自的下丘脑释放因子和释放抑制因子的双重神经内分泌调控外,还受多种其它相同和不同调节因子的影响,也反映了鲤鱼ＧｔＨ和ＧＨ分泌的神经内分泌调控的复杂性。     

gyrB基因在细菌系统发育分析中的应用

细菌gyrB编码DNA促旋酶的B亚单位蛋白,对细茵DNA的转录和复制很重要.因不显现频繁的基因横向转移并且基于该序列的分析与DNA杂交同源性分析有较好的一致性,近年来常被选用于细菌系统发育分析及细菌鉴定,一般采用对该基因测序或对其PCR产物RFLP等方法进行研究.