利用GAP启动子在毕赤酵母中组成型表达人鹅型溶菌酶2

利用甘油醛三磷酸脱氢酶(glyceraldehydes-3-phosphatedehydrogenase,GAP)启动子在毕赤酵母中表达人鹅型溶菌酶2(human goose-type lysozyme 2,h LysG2),并在小试规模建立一套有效的重组hLysG2(recombinant h LysG2,rh LysG2)生产工艺流程。根据毕赤酵母密码子偏爱性设计并人工合成hLysG2基因,将其连接至pGAPZαA质粒中,构建重组表达质粒pGAPZαA-h LysG2。将重组表达载体线性化后电转化毕赤酵母GS115感受态细胞,通过Zeocin抗性筛选获取高拷贝重组菌株,并在5L生物反应器中进行发酵培养。发酵60h后发酵液上清酶活性达到最高,发酵液上清经SDS-PAGE及Western blot检测证实rh LysG2得到表达。与诱导型表达相比,组成型表达发酵时间缩短了48h,上清中rhLysG2总活性提高了23.8%;使用甲壳素亲和层析和分子筛层析对rhLysG2进行纯化后,每升发酵液上清可纯化到187.4mg重组蛋白,纯化产物纯度达99.0%以上;浊度测定法分析显示,在p H 5.6、30℃和0.1mol/L Na+的条件下,rhLysG2可达到最大酶活性13 500U/mg。利用GAP启动子在毕赤酵母中成功表达了高纯度和高活性的rh LysG2,避免了甲醇的使用,缩短了发酵时间,提高了蛋白产量,为将rhLysG2开发为新型抗耐药菌药物奠定了基础。     

Alarin——新的血管活性肽

Alarin是2006年被发现的神经肽galanin家族的新成员。Galanin是1983年Tatemoto K等发现的由23个氨基酸残基组成的肽类物质。1999年Ohtaki T等发现了能够与galanin受体相结合的另一个内源性肽类物质———GALP(galain-like peptide)。GALP由60个氨基酸残基组成,其9~21位氨基酸残     

无量山大寨子黑长臂猿一夫二妻制的群体结构及其行为学原因

2003年8月—2005年8月，对无量山大寨子5个黑长臂猿群体的结构和组成进行了观察。当一个群体在早晨鸣叫或依次通过树冠时，记录群体的结构和组成。每个群体都由1个成年雄性、2个成年雌性及其后代组成。2003年8月平均群体大小为6.2只；到2005年8月,平均群体大小发展为6.4只，其中有2个亚成年雄性从出生群迁出，且有3只幼猿出生。 在3个群体(G1、G2和G3)中两个成年雌性都成功繁殖了后代。同一群体内两个成年雌性间无攻击或等级行为。2005年4月15日，当一只亚成年雌性进入G3的领域后，两只成年雌性对其进行追逐驱赶，并且干扰其与成年雄性配合进行二重唱， 成年雄性没有直接驱赶流浪的亚成年雌性，10天后这只亚成年雌性离开了G3的领域。亚成年雄性经常与群体其他成员保持一定距离，并且在出生地通过独唱练习鸣叫。黑长臂猿可能通过亚成年雄性和雌性的迁出，及成年雌性对外来流浪雌性的驱赶维持这种一夫二妻的群体结构。     

内蒙古阿拉善骆驼生活环境水生双翅目昆虫种类调查

【目的】通过对内蒙古阿拉善骆驼生活环境中水生双翅目昆虫的调查研究,以明确其种类的组成和分布。【方法】于2014年5-9月利用网捕法,调查了阿拉善骆驼生活环境水生双翅目昆虫。对鉴定的吸血种类的COI基因序列进行了测序和分析。【结果】共发现水生双翅目昆虫21科41属47种,其中有16种为内蒙古地区新记录,12种为吸血种类,长角亚目、芒角亚目和短角亚目个体数量分别占水生双翅目昆虫总数的49.3%,43.5%和7.2%。分子数据分析显示,12种吸血水生双翅目昆虫的COI基因序列一致性在75.9%~97.3%之间,不同科之间大部分水生双翅目昆虫差异显著,科内不同属间差异也较明显。【结论】本研究基本上掌握了内蒙古骆驼生活环境水生双翅目昆虫的种类,特别是吸血种类,为后期骆驼福斯盘尾丝虫病传播媒介种属的确定提供了基础数据。     

福建闽江河口湿地水禽群落组成及迁徙动态研究

2012—2015年在福建闽江河口湿地采用直接计数法开展了48次水禽调查,共记录水禽175 325只次,隶属7目14科91种。群落主要组成物种包括斑嘴鸭Anas poecilorhyncha、黑腹滨鹬Calidris alpina、三趾滨鹬Calidris alba、环颈鸻Charadrius alexandrinus和铁嘴沙鸻Charadrius leschenaultii等11种,常见种15种,偶见种31种。研究区域11月至翌年2月为越冬期,水禽数量最多,3—6月为春季迁徙期,水禽数量下降,4—9月为夏候鸟栖息期和繁殖期,7—9月部分候鸟和旅鸟开始迁徙过境,数量先升后降,10—11月冬候鸟快速增加,7—11月为秋季迁徙期。     

临床路径管理模式对开放腹股沟疝修补术患者医疗成本和效果的影响

目的探讨临床路径管理模式对开放腹股沟疝修补术患者医疗成本和效果的影响。方法对70例行开放腹股沟疝修补手术患者的临床资料进行回顾性分析总结。结果在医疗成本方面,实施临床路径管理模式的观察组开放式腹股沟疝修补术的直接医疗成本均值为(4922.4±230.4)元,间接成本均值为(620.6±100.1)元,均明显低于对照组(P0.05)。在治疗效果方面,观察组患者的不良反应发生率为2.9%明显低于对照组的11.4%,差异具有统计学意义(P0.05);而且观察组患者的平均住院时间、自主活动时间和术中出血量均明显低于对照组(均P0.05)。结论临床路径管理模式对开放腹股沟疝修补术患者在医疗成本和效果方面具有显著优势。     

苏云金芽孢杆菌chiA,chiB全基因的克隆、表达及其序列分析

以苏云金芽孢杆菌科默尔亚种15A3菌株基因组DNA为模版,用touchdown PCR方法扩增几丁质酶ChiA和ChiB的全基因序列(GenBank登录号:EF103273和DQ512474)。将PCR产物连接pUCm-T克隆载体,获得重组质粒pUCm-chiA和pUCm-chiB,分别转化E.coliXL-Blue。克隆的几丁质酶基因可以利用本身的启动子异源表达各自的蛋白,不需要几丁质作为诱导物。表达的几丁质酶能够分泌到胞外。证明15A3菌株可组成型表达2种几丁质酶。经核苷酸及氨基酸序列分析证明,chiA基因全长1426bp,含有343bp的上游非编码区和1083bp的ORF,编码360个氨基酸。推测成熟蛋白分子量为36kD,只有一个几丁质酶催化域。chiB基因全长2279bp,含有248bp的上游非编码区和2031bp的ORF,编码676个氨基酸。推测成熟蛋白分子量约为70.6kD,具有三个功能域。核苷酸序列分析显示chiA和chiB的启动子所处的位置及转录起始碱基都不相同,-35区相同,而-10区有两个碱基不同,SD序列也不完全一致。     

长江上游三层流刺网渔业现状的调查

1997-1999年对长江上游宜宾江段和合江江段的三层流刺网渔业现状进行了调查。合江江段三层流刺网内网目在10-180mm之间,宜宾江段以50mm以下的网目为主。采集到的鱼类有59种,包括17种长江上游特有鱼类;渔获物组成存在区域、季节和年际之间的差异。目前长江上游的捕捞强度比70年代显著提高。     

贺兰山东坡低山区植被种类组成区域分异与植被性质的分析

本文以定量和定性分析相结合,分析了贺兰山东坡海拔1200—1900m低山区范围内植被种类组成的区域分异、植被性质及生态条件的区域分异特点。结果表明,该范围内务主要植被类型具有荒漠草原或荒漠草原化的共同特点,其种类组成均在北、中、南不同地段存在一定差异。此差异反映出本区海拔1600m以上的中部地段及其以下的北部地段分别是生态环境最湿润和最干旱的区域．